临床应用磁性微粒分离免疫酶联法测定血hCG的探讨

为观察磁性微粒分离的免疫酶联测定法（ＩＥＭＡ）ｈＣＧ药盒的临床使用价值，我们对ＩＥＭＡｈＣＧ药盒和放免法（ＲＩＡ）β－ｈＣＧ药盒进行了对照。并对１５１例非妊娠妇女及１９例葡萄胎、绒癌血标本进行了ＩＥＭＡ法ｈＣＧ测定。结果：非妊娠妇女正常值为＜１０ｍＩＵ／ｍｌ；以ＩＥＭＡ法测β－ｈＣＧ药盒标准品，ｈＣＧ测定值与标准品各浓度点呈显著相关ｒ＝０．９９；７７份葡萄胎、绒癌阴转前血标本两法测定值亦明显相关，ＩＥＭＡｈＣＧ测定７７份阳性标本中β－ｈＣＧ测定８份为阴性，１９份为可疑值范围；１９例葡萄胎、绒癌随访病人中１８例１４３次血ｈＣＧ测定均在１０ｍＩＵ／ｍｌ以内。其中１例于临床复发前１＋月ｈＣＧ即升高至本文可疑值范围。化疗后两周降至正常。结论：ＩＥＭＡｈＣＧ药盒敏感度为１００％，特异性为９７％，较ＲＩＡβ－ｈＣＧ药盒敏感，对葡萄胎、绒癌患者的诊治、随访有重要的临床意义。

免疫酶联染色法检测衣原体感染的研究

本文报告了快速免疫酶联染色法检测衣原体感染方法的建立,并以衣原体单克隆抗体免疫荧光染色法为基准和对照,对该法的敏感性、特异性进行了比较。该法对临床疑为非淋球菌性尿道炎的尿道细胞涂片的阳性检出率为20.83％,略低于衣原体单克隆抗体免疫荧光法(23.08％),而远高于Giemsa染色法(9.48％)。该法的敏感性为80.95％,特异性为98.57％,阳性符合率为94.44％,阴性符合率为94 52％。实验证明,该法具有特异、敏感、简便、快速、无需特殊仪器设备等优点。本文还讨论了该法用于直接检测临床标本的前景。

免疫酶联染色检测沙门氏菌研究

免疫酶联染色检测沙门氏菌研究云南省畜牧兽医研究所李学良，刘素珍玉溪市畜牧兽医站李炳云近几年免疫酶联染色法已广泛应用于细菌、病毒病的实验诊断和饲料、肉品的卫生检验，我们将其成功地用于动物沙门氏菌的快速检测，现报告如下。１材料和方法１．１标本：腹泻仔猪的...

磁性分离免疫酶联测定法与放射免疫分析法测定T_3、T_4、TSH的含量比较

磁性分离免疫酶联技术是酶联免疫系统与磁性分离技术相结合的测定方法。该方法操作简便、快速出结果,可以单个标本测定,特别适用于中小医院使用,同时该方法不使用同位素,避免了实验室工作人员及工作场所的放射性污染,

免疫亲和层析技术协同酶联免疫吸附法检测赭曲霉毒素A

利用免疫亲和层析技术(immunoaffinity chromatography,IAC)对样品中赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)进行捕获与浓缩,利用酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法对IAC捕获的目标物OTA进行测定。IAC与ELISA中的抗OTA单克隆抗体来自不同的克隆株,分属不同独特型,与OTA结合靶点的选择性存在差异,IAC与ELISA协同检测,可以有效过滤OTA结构类似物造成的干扰,提高免疫分析的特异性与灵敏度。该方法用于加标样品测定时,OTA的检出限为0.2 ng/g,定量限为0.4 ng/g,OTA的平均回收率为75.9%,与单一的ELISA法相比,该方法虽然回收率略低,但灵敏度可以显著提高,达到ELISA法的60倍。通过对49份样品的实际检测,该方法检出阳性样品与国标法的符合率达到100%,漏检率为0%,由此可见,该方法在准确性上表现出明显的优势。作为一种综合免疫分析技术,该方法不需要大型仪器设备,对操作环境没有严格要求,便于基层实验室对样品中OTA的分析。

评价水痘-带状疱疹病毒抗体的新型酶联免疫吸附方法

目的:水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白已被证明是高度准确的VZV特异性免疫指标。本研究以重组蛋白作为包被抗原建立了酶联免疫吸附方法(ELISA),用于评价水痘疫苗接种后的血清抗体水平。方法:筛选ELISA包被抗原,以重组蛋白gE和gB作为包被抗原,W1044国际参考品作为标准品,初步建立VZV抗体的ELISA法并对其进行验证。将建立的ELISA法与膜抗原荧光抗体(FAMA)法进行比对。结果:以gE和gB作为包被抗原,成功建立了ELISA方法,采用线性拟合,标准曲线在抗体浓度0.25~4 mIU·mL^(-1)范围内具有良好的线性关系,R^(2)>0.990,回收率为85%~120%,定量限为0.25mIU·mL^(-1),精密度CV<15%,特异性良好。与FAMA法相比,ELISA法的灵敏度为89%,特异性为93%,总符合率为90%。结论:本课题成功建立了VZV抗体ELISA检测方法,可作为一种灵敏、特异的水痘疫苗临床血清评价方法。

半乳甘露聚糖化学发光法与酶联免疫法检测对侵袭性肺曲霉病诊断价值的比较

目的比较半乳甘露聚糖化学发光法与传统的酶联免疫法检测对侵袭性肺曲霉病(invasive pulmonary aspergillosis,IPA)诊断的临床价值。方法选取2022年7月至2022年10月期间浙江省人民医院收治的145例疑似IPA患者作为研究对象,分别采用化学发光法和酶联免疫法对患者血清样本中半乳甘露聚糖进行检测,比较血清中半乳甘露聚糖在两种免疫分析法中的测定结果,进而分析其对IPA的诊断价值。结果根据IPA的诊断标准,145例疑似患者中有31例(21.4%)临床诊断为IPA,IPA患者中有11例(35.5%)下呼吸道标本检出曲霉属,其中烟曲霉占63.6%。病例组血液恶性肿瘤患者比对照组多,差异有统计学意义(P<0.05);在胸部影像学特征上,病例组晕轮征、空气新月征/空洞的发生率较对照组显著增加(P<0.05)。此外,对上述两种方法的样本半乳甘露聚糖检测结果进行分析,其中142例(97.9%)患者两种检测方法结果判读一致,经Kappa组内相关系数(r)检验分析,两种方法的一致性为r=0.948。化学发光法和ELISA法的敏感性分别为71.0%和67.7%,特异性分别为83.3%和85.1%,ROC曲线下面积分别为0.774和0.779。结论对于半乳甘露聚糖的检测,化学发光法与酶联免疫法一致性好,在诊断性能上二者无显著性差异;而化学发光法比酶联免疫法在稳定性和重复性上具有优势。此外,化学发光法实现了样本处理、检测、结果分析的自动化操作,大大缩短了检测耗时,同时适用于单个样本的检测,具有较高的临床应用价值。

基于衍生化3-氨基-2-恶唑烷酮的夹心酶联免疫分析

建立一种3-氨基-2-恶唑烷酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ)夹心免疫检测方法。通过1,6-己二醇连接2-硝基-4-羧基苯甲醛和生物素合成针对AOZ的新型衍生试剂。在样品前处理时加入衍生试剂可对AOZ进行衍生,衍生产率为89%。在酶标板上包被抗AOZ单克隆抗体并以辣根过氧化物酶标记的亲和素或抗生物素抗体作为第二结合物可实现AOZ的夹心酶联免疫吸附检测(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)。从实际应用的角度,得到双抗夹心和抗体-亲和素夹心模式下两个表位的极限距离,分别为12Å和13Å,理想距离分别为16Å和17Å。在双抗夹心和抗体-亲和素夹心模式下的检出限分别达到1.8 pg/mL和0.8 pg/mL(以AOZ质量浓度计),相对于竞争ELISA,其灵敏度最高提高了25倍。平均回收率为73%~85%,平均相对标准偏差为9.0%。

莫米松糠酸酯高特异性抗体制备及酶联免疫分析方法

莫米松糠酸酯(mometasone furoate,MF)是一种常见的糖皮质激素。为快速、便捷地监控MF的滥用情况,制备了MF单克隆抗体并建立了其竞争酶联免疫检测方法。将氨氧乙酸分别连接至MF和莫米松二糠酸酯(mometasone difuroate,MDF),合成了免疫半抗原和包被半抗原。免疫半抗原以活泼脂法连接钥孔血蓝蛋白获得全抗原,通过免疫小鼠、细胞融合及筛选获得能够稳定分泌抗MF单克隆抗体的细胞株,制备并纯化了抗体。该抗体的主要识别区域为MF的五元环区域,因此不和常见的64种糖皮质激素发生交叉反应。建立了基于异源包被的MF间接竞争酶联免疫检测法,其半抑制浓度(IC_(50))为1.2 ng/mL,对肌肉和肝脏的最低检出限分别为0.52μg/kg和0.59μg/kg。灵敏度相比于同源包被提升了20倍。使用60%甲醇水溶液提取动物组织的添加回收率为70%~82%。该方法能有效应用于动物组织中MF的快速筛查。

酶联免疫吸附法在食品中重金属残留检测中的应用

酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)以其高特异性、高灵敏度等优势,在食品重金属残留检测领域展现出广阔的应用前景。本文综述了ELISA检测水产品中汞、谷物中镉、蔬菜中铅、奶制品中铬和食用油中砷的研究进展,重点阐述了抗原设计、抗体制备、样品前处理和检测条件优化等关键技术。针对不同食品基质,提出了进一步提升ELISA检测性能的建议,为食源性重金属分析提供参考。

间接竞争酶联免疫分析用于薏苡仁中杂色曲霉毒素的快速检测研究

杂色曲霉毒素(Sterigmatocystin,ST)是一种主要由杂色曲霉和构巢曲霉等真菌产生的次级代谢产物,其结构与黄曲霉毒素相似,具有潜在的致癌性和毒性,严重危害人类生命健康。研究发现部分中药易ST污染,但目前针对中药中ST的快速检测研究相对较少。通过系统优化样品前处理条件及影响检测灵敏度的关键参数,建立了简便的间接竞争酶联免疫分析法(ic-ELISA),用于消费量较大的药食同源薏苡仁中ST的快速筛查。所建立ic-ELISA的半数抑制浓度(Half-Maximal Inhibitory Concentration,IC 50)为0.11 ng/mL,线性范围为6.25~100μg/kg,加标回收率在79.27%~99.95%之间,相对标准偏差(RSD)<12%。此外,该方法可抗基质干扰,只需利用溶剂标准曲线即可进行定量。用所建立的ic-ELISA对96批薏苡仁样品进行了检测,并用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)对阳性样品进行了确证。该ic-ELISA快速、准确、经济,可作为薏苡仁中ST高通量快筛的技术手段,同时为其他中药中ST的快速检测提供参考。

纳米抗体多聚化测略提升间接竞争性酶联免疫吸附实验检测黄曲霉毒素M_(1)的灵敏度

酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)具有高通量、操作简单、检测结果明显等优点,是一种较为理想的检测食品中真菌污染物的免疫分析技术。然而,传统的ELISA方法具有较大的局限性,比如使用时抗体易受温度影响,容易变性,贮存期短,易受到检测环境中其他物质干扰而造成假阳性或假阴性等。该实验使用实验室前期获得的抗黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))纳米抗体(nanobody-M4,Nb-M4)与C4结合蛋白(recombinant C4 binding protein alpha,C4BPa)C端片段融合形成自组装七聚体融合蛋白(Nb-M4-C4 bpα),并基于该七聚体开发应用于乳制品中AFM_(1)的间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)。在最佳实验参数下,AFM_(1)的IC_(50)为0.038 ng/mL,检测限为0.009 ng/mL,较单体Nb-M4的提高了8.63倍和5.56倍。与AFM_(1)类似物和其他常见真菌毒素的交叉反应可忽略不计,且在加标乳样中获得了良好的回收率和可重复性。此外,将所开发的方法应用于实际样品中AFM_(1)的分析,结果与HPLC的结果具有很好的相关性(R^(2)=0.995)。该研究表明,自组装的七聚化纳米抗体是改善亲和力和信号放大的有效策略,今后可用于灵敏、选择性和快速检测食品中的霉菌毒素和其他小分子污染物。

间接竞争酶联免疫吸附测定法快速筛查药酒中双氯芬酸

目的建立间接竞争酶联免疫吸附测定法快速筛查药酒中双氯芬酸(diclofenac,DCF)。方法采用活性酯法和混合酸酐法分别将DCF与载体蛋白耦合,得到DCF的免疫原和检测抗原。采用DCF-牛血清白蛋白免疫BALB/c小鼠,随后用杂交瘤等技术制备抗DCF单克隆抗体(monoclon alantibody,mAb),基于DCFmAb建立了间接竞争酶联免疫吸附测定法,对该检测方法的性能(准确度、精密度和特异性)进行鉴定。结果紫外扫描结果表明DCF已成功与载体蛋白偶联;获得最优株抗DCF的杂交瘤细胞株(4B9),其IC50值为0.61ng/mL;该检测方法在药酒中的DCF平均添加回收率为85.9%,其批间变异系数(coefficient of variation,CV)(5.3%~9.7%)均大于批内CV(4.9%~9.1%),与类似物(酮洛芬、阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬、舒林酸、萘普生、罗非昔布)没有交叉反应。结论本研究建立的间接竞争ELISA法为DCF在药酒中的残留提供了一种新的筛查手段。

酶联免疫吸附试验和化学发光法检测EB病毒NA1-IgA抗体的性能比较

目的分析酶联免疫吸附试验(ELISA)和化学发光法在EB病毒核抗原1(EB-NA1)-IgA抗体检测中的各项性能。方法20例临床已确诊为鼻咽癌患者作为鼻咽癌组,20例非鼻咽癌患者作为对照组。取血清标本,同时采用ELISA和化学发光法对EB-NA1-IgA抗体进行检测,以组织病理检查诊断为鼻咽癌的结果作为金标准,计算两种方法的灵敏度、特异度和准确度。结果鼻咽癌组两种方法检测血清EB-NA1-IgA抗体的阳性率均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两种方法检测鼻咽癌组的血清EB-NA1-IgA抗体的阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05),两种方法检测对照组的血清EB-NA1-IgA抗体的阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA与化学发光法的灵敏度、特异度、准确度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论ELISA和化学发光法检测血清EB-NA1-IgA抗体对鼻咽癌均有较好的辅助诊断价值。

化学发光法与酶联免疫法在乙肝病毒血清学检验中的临床对比研究

目的比较化学发光法与酶联免疫法在乙肝病毒血清学检验中的应用价值。方法选择2021年1月—2021年12月广昌县中医院收治的100例疑似乙肝病毒感染患者进行研究,在确认所有患者病例资料完整后抽取其空腹血,分别采用化学发光法和酶联免疫法对患者乙肝五项进行检测,对比2类检测方法对乙肝五项阳性检测率的差异,以实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)检测结果作为金标准,对比化学发光法及酶联免疫法检测HBV的诊断效能。结果化学发光法检测乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)、乙肝e抗体(hepatitis B e antibody,HBeAb)的阳性检出率高于酶联免疫法(P<0.05);2类方法在乙肝表面抗体(hepatitis b surface antibody,HBsAb)、乙肝e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)、乙肝核心抗体(hepatitis B core antibody,HBcAb)及总阳性检出率方面比较,差异无统计学意义(P>0.05)。酶联免疫法检验HBV阳性的灵敏度为93.85%、特异度为85.71%、准确率为91.00%、阳性预测值为92.42%、阴性预测值为88.24%,与PCR检验的Kappa值为0.801;化学发光法检验HBV阳性的灵敏度为96.92%、特异度为88.57%、准确率为94.00%、阳性预测值为94.03%、阴性预测值为93.94%,与PCR检验的Kappa值为0.866;化学发光法具有更优的诊断效能。结论相较于酶联免疫法,化学发光法在对乙肝病毒五项血清检测中表现出更高的诊断价值,值得推广。

酶联免疫分析技术在食品安全快速检测中的应用

酶联免疫分析技术操作简单、灵敏度较高、技术成本较低且能够应用到多种成分检测中,因此被广泛应用于大批量食品安全快速检测中。随着相关技术的革新,酶联免疫分析技术在实践检测中的应用也愈发成熟,同时衍生出众多新型技术,满足了食品快速、高质量检测需求。基于此,本文探究了酶联免疫分析技术在各类食品检测中的应用,分析了酶联免疫分析技术的优势,希望能够为广大从业人员提供些许参考。

集成化酶联免疫微流控平台检测红酒中的赭曲霉毒素A

目的基于微流控芯片在自动化、检测成本上的优势,建立高效的间接竞争酶联免疫吸附法检测红酒中的赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的方法。方法设计按压阀控制的微流控芯片,将含有OTA的样本以及其余4种免疫检测试剂注射进入芯片中。通过负压泵驱动这些试剂分别流经包被有OTA的硅膜夹层进行检测。确定抗原和抗体的工作浓度,绘制拟合标准曲线,计算检出限,分析真实样本的加标回收率。结果抗原为鸡蛋卵白蛋白(ovalbumin,OVA)偶联的OTA,孵育质量浓度为5.0μg/mL,捕获抗体为鼠抗OTA抗体,工作质量浓度为5.0μg/mL,检测抗体为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的羊抗小鼠免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG),稀释倍数为1:1000,OTA的线性范围为1~32 ng/mL,检出限为0.632 ng/mL,干红葡萄酒中的回收率为94.48%~105.76%;相对标准偏差为6.54%~11.18%。结论建立的方法检测成本低,灵敏度高,准确性好,可用于红酒中OTA的定量检测,为检测食品中的生物标志物提供参考。

基于酶联免疫分析方法检测畜禽饲料中恩拉霉素

本文建立了一种应用于检测畜禽饲料中恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法。采用羰基二咪唑法将生物活性高的恩拉霉素A组分合成的半抗原偶联卵清蛋白,构建检测原;同时将杂交瘤细胞株2H1F91免疫BALB/c小鼠,制备特异性识别恩拉霉素的单克隆抗体。在此基础上,构建了恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法的标准曲线,该曲线IC_(50)为91.61ng/mL,线性范围为25.73~471.39ng/mL,检出限为13.11ng/mL。猪饲料样品的添加回收率为91.60%~95.75%,鸡饲料的添加回收率为89.33%~94.80%,并且二者的变异系数均低于12%,这表明建立的方法结果可靠,适用于畜禽饲料中恩拉霉素含量的快速检测。

半抗原直接包被的四环素酶联免疫吸附分析法的建立

为建立更优的四环素(tetracycline,TC)酶联免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),将TC与蛋白质偶联制备人工完全抗原免疫BALB/c小鼠,获得抗TC的单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)。采用酸性高锰酸钾羧化酶标板,将TC直接包被在酶标板上,并对ELISA反应体系条件进行优化,构建一种半抗原直接包被的TC ELISA检测方法。所制备的MAb特异性良好,交叉反应率低。所构建的检测方法最低检测限IC_(10)值为0.306 ng/mL,半数抑制率IC_(50)值为9.26 ng/mL,牛奶和水中加标回收率分别为96.46%~101.89%、96.84%~102.50%。与人工完全抗原包被的检测方法相比(IC_(10)值:0.624 ng/mL,IC_(50)值:28.24 ng/mL,牛奶和水中加标回收率分别为93.86%~105.12%、94.04%~105.56%),检测灵敏度有明显提高,并可用于实际样品中TC含量的检测,具备良好的应用前景。