抗C3d单抗制备及免疫金层析法的建立

目的 研制抗C3d单抗 ,建立免疫金层析法检测血浆补体片段C3d ,判断补体活化情况。方法 用菊糖 C3b作抗原 ,免疫Balb/c小鼠 ,并制备杂交瘤 ,以羊抗C3包被酶标反应板并结合C3d为检测板 ,筛选分泌抗C3d单抗的杂交瘤。利用proteinG柱亲和层析提取抗C3d单抗IgG和C3d结合物 ,进行SDS PAGE电泳 ,鉴定单抗的特异性。将抗C3d单抗标以胶体金 ,制备免疫金层析测试条。通过在免疫金中加未标金的抗C3d单抗 (游离单抗 )来调整试纸条的灵敏度 ,并测定C3d。结果 SDS PAGE电泳图上 ,出现IgG的重链、轻链、及C3d 3个条带 ;金标记抗C3d单抗的试条 (Ⅰ )测C3d的灵敏度在 6～ 10ng/ml,当加入 0 .1μg/ml游离抗C3d单抗 (Ⅱ )后 ,灵敏度为 10～ 15ng/ml。利用两种试条灵敏度的不同 ,对轻、中重型肝炎检测 ,结果轻型肝炎患者在纸条Ⅰ上阳性率为 83 3% (2 5 / 30 ) ,纸条Ⅱ全为阴性 ,中重型肝炎者在纸条Ⅰ、Ⅱ的阳性率为 10 0 % (30 / 30 )。结论 用本试验建立的免疫金层析法测定肝炎患者血浆C3d水平 ,可判断补体活化程度 ,辅助乙型肝炎轻、重分型。

快速检测猪囊虫抗体的金免疫层析法的建立及应用

目的 研制一种简便快速检测囊虫抗体的新方法 ,提供基层单位使用。方法 应用胶体金和免疫层析合成技术进行研究 ,建立检测囊虫抗体的金免疫层析法 ;以ELISA为对照 ,观察GICA法敏感性、特异性和稳定性。结果 每ml胶体金中兔抗猪IgG最适标记量为 30 8μg ,最佳抗原包被浓度为 1mg/ml。建立的GICA法检测囊虫病猪血清均为阳性 ,正常猪及其他疾病猪血清 ,结果均为阴性 ;整个实验仅一步操作 ,检测时间 5～ 15min。同ELISA法比较 ,两种方法检测囊虫抗体的相符率达 96 8% (P >0 0 5 )。GICA试纸条分别在 4℃和室温下保存 10 5d及 37℃保存 4 5d ,检测结果均未发现改变。结论 检测囊虫抗体的GICA法简便、快速、敏感、特异、稳定。

检测肌红蛋白的半定量金免疫层析法的研究

目的建立一种半定量检测人血清肌红蛋白的金免疫层析方法,用于急性心肌梗死的快速检测。方法一株抗人肌红蛋白单克隆抗体标记胶体金,另一株抗人肌红蛋白单克隆抗体包被膜作为检测线,兔抗鼠IgG抗体包被膜作为对照线,建立半定量金免疫层析测定方法。结果本法测定结果分为3个半定量判定区段：〈70、70-150和〉150μg/L;与化学发光免疫测定对照检测83份血清标本,符合性良好。结论金免疫层析测定法具有半定量的特点,方法简便、快速、准确,适用于急性心肌梗死的早期检测。

金免疫层析法检测囊虫循环抗原试验研究

应用胶体金和免疫层析技术进行了检测金免疫层析法(GICA)囊虫循环抗原(CA)试验研究。5株抗囊虫McAb和一株多抗用于最佳配对的筛选,一株用于标记胶体金,另一株包被NC膜。以双抗体夹心ELISA为对照,GICA用于CA检测,观察其敏感性、特异性和稳定性。结果显示,以McAb 1A5和1B6配对的结果最佳,1A5最适标记量为10μg／mL,186最佳包被浓度为1 g／L;用GICA和ELISA两种方法检测囊虫CA,痈猪血清和囊液的符合率达100％,病人血清和脑脊液的符合率达80％;CA最低检测量为10 ng,检测正常猪、人及其他疾病血清,均呈阴性;检测时间5-15 min,整个实验仅一步操作;GICA试纸条分别在4℃和室温下保存105 d以及在37℃保存45 d,检测结果均未发现改变。以上结果表明,快速检测囊虫循环抗原的金免疫层析法具有简便、快速、敏感、特异和稳定的特点,适合基层使用。

金标记免疫层析法测定沙眼衣原体检测下限的确定

目的比较金标记免疫层析法与定量PCR的方法检测沙眼衣原体的结果,确定金标记免疫层析法检测沙眼衣原体的最低下限。方法25例临床标本同时进行金标记免疫层析法与定量PCR的方法检测,比较这两种检测方法的结果差异。结果定量PCR方法检测结果拷贝数在105指数级的标本8例。其金标记免疫层析法检测2例为阴性,6例为弱阳性。结论金标记免疫层析法检测沙眼衣原体的最低下限为105拷贝数。

金免疫层析法快速定量测定β-HCG试验研究评价

验证金免疫层析法(GICA)快速定量测定β-HCG在临床检验中的适用性和准确性及临床应用价值。用GICA法和化学发光免疫法(CLIA)测定β-HCG浓度,统计两种检测结果的符合率、相关性。结果表明:GICA法和CLIA法测定β-HCG浓度的结果相关性较好,两组检测数据成正相关。阳性符合率为97.9%,阴性符合率为96.4%,两种检测结果无显著性差异(P>0.05)。GICA测定β-HCG浓度,具有一定临床应用价值。

免疫层析金标法测粪潜血试验的对比分析

目的 评价 3种粪潜血试验的方法 .方法 采用联苯胺法、试纸法、一步法对粪潜血试验进行对比分析 ,分别进行敏感性、特异性、干扰性评价试验 .结果 联苯胺法、试纸法阳性率高 ,但受某些食物及药物的外来因素干扰 ,特异性欠佳 ,一步法可克服食物及药物干扰 ,特异性较好 .结论 联苯胺法、试纸法适用于过筛 。

金标记免疫层析法联合ELISA法检测HBsAg

目的探讨金标记免疫层析法检测HBsAg在临床检验中的应用价值。方法金标记法检测HBsAg阳性者,再经ELISA法检测HBsAg阳性符合率。结果金标记法检测HBsAg阳性者400份,再经ELISA法检测HBsAg阳性者360份,符合率达90%(360/400),不符合率10%。结论金标记免疫层析法联合ELISA法可准确检测HBsAg。

免疫层析金标法测定甲胎蛋白浓度筛查出生缺陷

目的:用免疫层析金标法测定甲胎蛋白(AFP)浓度,观察其临床适用性。方法:应用AFP金标试条在SC-1金标试条智能测定仪上对102例血清样本进行AFP测定,并与电化学发光免疫测定仪测定结果对比。结果:两种方法测定结果相关性良好,相关系数γ=0.984,两测定值的比值为0.990;其直线回归方程Y=3.391+0.990X。且经自身对照计量比较的t检验得d=1.9015ng/mL,t=1.122,P=0.264>0.05。结论:用免疫层析金标法定量AFP有临床应用价值。

金标记免疫层析法初筛不同人群无偿献血者HBsAg结果分析

目的初步了解益阳市无偿献血者不同人群HBsAg阳性率流行情况，从而减少HBsAg阳性血的无效采集，确定低危献血群体，为安全输血提供保障。方法采用金标记免疫层析法对献血者进行HBsAg初筛检测，回顾性分析2006—2008年流动采血车上72935名无偿献血者基本资料及初筛检测结果。统计学方法采用χ^2检验。结果HBsAg总阻性率5．12％，2006～2008年各年阳性率呈递降趋势；男性阳性率为5．98％、女性阳性率为3．48％，差异有统计学意义（P〈0．05）；不同年龄段阳性率差异无统计学意义（P〉0．1）；军人和学生HBsAg阳性率比较无统计学意义（χ^2=0．68，P〉0．01），但学生和军人HBsAg阳性率比其他人群显著（r=34．67，P〈0．05）。结论益阳地区HBsAg阳性率逐年呈下降趋势，学生和现役军人是安全输血的低危人群，应作为主要选择对象。

尿微量白蛋白半定量金免疫层析试条的研制和临床评价

目的 建立一种半定量检测人尿液中的微量白蛋白（mAlb）的金免疫层析方法。方法 应用一株抗人白蛋白单克隆抗体与胶体金结合，组成胶体金结合物试剂；白蛋白包被在硝酸纤维素膜上，而制成竞争法的试剂条，同时用一定浓度的羊抗鼠IgG抗体作为参比线。结果 该法经人白蛋白标准液测定，结果判定可分为〈20、20-50、50-200和〉200mg／L4个半定量区段；137例经散射免疫浊度法定量测定白蛋白浓度的临床尿标本用于该法的对比测定，结果符合性良好。结论 该法具有半定量的特点，结果可靠，适用于糖尿病、高血压等并发肾病的早期诊断。方法简便、快速，特别适合中、小医院和门诊部使用。

甲胎蛋白半定量金免疫层析测定

目的：建立简便、快速的血清甲胎蛋白（AFP）半定量检测法。方法：用不同亲和力的两种抗AFP单抗在硝酸纤维素膜上作平行线包被，配以另一金标记抗AFP单抗，制备有高、低两个阳性界限的半定量金免疫层析试剂条。结果：⑴用AFP质控血清测定：AFP>30μg/L时，第一条强亲和力单抗线显色：AFP>200μg/L时，第二条弱亲和力单抗线也显色：AFP<30μg/l时，两条单抗线均不显色。⑵用于检测巳作定量测定的AFP浓度不同的临床血清标本67份，结果均与上述情况符合。结论：用本法测定AFP可为肝炎与肝癌的鉴别诊断提供进一步的参考数据。

金标法检测梅毒螺旋体特异性抗体的适用性分析

目的 探讨TP 金标法在梅毒患者检测与献血者筛查中的适用性。方法 2 86 34份无偿献血者标本经RPR、TP ELISA法初、复检 ,阳性标本以TPPA确认 ,同时用TRUST、TP 金标法检测。金标法检测了 2 5例临床梅毒 ,31例自身免疫性疾病标本。结果 RPR、TP ELISA共检出阳性 1 35份 ,两法共阳性 6 7份 ,RPR单阳 4份 ,TP ELISA单阳 6 4份 ;1 35份阳性中TPPA确认阳性 1 1 3份 ,TP ELISA假阳性 1 8份 (1 5 .9% ) ,金标法 5份 (4 .4 % ) ,RPR 4份 (3.5 % ) ,TRUST 1份 (0 .8% ) ;RPR漏检 4 6份 (4 0 .7% ) ,TRUST漏检 35份 (30 .9% )。 2 5例梅毒标本金标法均为阳性 ,31例自身免疫性疾病标本金标法为阴性。结论金标法其灵敏度、特异性与TPPA相比无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,比RPR、TRUST好 (P <0 .0 5 )。

3种不同的免疫检验方法检测人类免疫缺陷病毒的可靠性

目的探讨3种不同的免疫检验方法检测人类免疫缺陷病毒的可靠性。方法选择2018年10月至2019年10月医院检验科的50份血清样本,所有样本均使用双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)、金免疫层析法及化学发光法3种免疫检验方法予以检测,以免疫印迹法的检测结果为金标准,比较3种不同的免疫检验方法检测人类免疫缺陷病毒的灵敏度、特异度及准确度。结果双抗原夹心ELISA检测人类免疫缺陷病毒的灵敏度、特异度及准确度均高于金免疫层析法与化学发光法,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论与金免疫层析法及化学发光法比较,双抗原夹心ELISA检测人类免疫缺陷病毒的可靠性较高。

3种不同免疫检验方法检测抗HIV结果可靠性比较观察

目的对比分析采用金免疫层析试验、双抗原夹心ELISA法及间接酶联免疫吸附试验检测HIV抗体结果的可靠性。方法抽取2013年卫生部全国血站系统免疫检验提供的室间质量评价血清以及卫生部临床检验中心定值质控血清2 NCU/m L和4 NCU/m L、无偿献血人员血清样本,分别采用3种检验手段进行诊断,对比分析HIV测抗结果。结果利用双抗原夹心ELISA法检验定值质控血清2 NCU/m L和4 NCU/m L、室间质量评价血清、无偿献血人员的血清阳性率依次为100.0%、100.0%、100.0%、0.0%;金免疫层析试验测抗结果分别为100.0%、88.9%、96.2%、0.7%,而间接酶联免疫吸附试验测抗结果分别为77.8%、100.0%、84.6%、1.5%。故利用双抗原夹心ELISA法进行测抗,结果可靠性更高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论利用3种免疫手段进行HIV测抗过程中,双抗原夹心ELISA法的测抗结果可靠性较其他两种检测方法更高,值得在临床诊断HIV病毒测抗结果活动中大力推广应用。

低浓度乙型肝炎表面抗原三种检测方法的比较与分析

目的比较金标记免疫层析法(GICA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和电化学发光免疫分析法(ECLIA)检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的敏感度。方法对平时收集的用化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)检测的0.05 IU/ml<HBsAg≤10.0 IU/ml的368份血清标本和200例CMIA法检测的HBsAg阴性标本分别用GICA、ELISA和ECLIA三种方法检测,以CMIA为标准,对GICA、ELISA和ECLIA的敏感度、特异度进行比较。结果 ECLIA法检测低浓度HBsAg的敏感度高于ELISA和GICA法(P<0.05)。结论 ECLIA法检测低浓度HBsAg的敏感度高于ELISA和GICA法,CMIA和ECLIA对低浓度的HBsAg有很好的检出率,GICA和ELISA在低浓度的HBsAg检测方面漏检现象严重,建议对首次进行HBsAg的标本应选择敏感度高的CMIA或ECLIA。

两种进口金标结核抗体的效果评价

目的通过对两种金标结核抗体试剂盒检测结果的分析比较,以评价二者对结核病的临床诊断价值。方法以原理同为胶体金免疫层析法(GICA)的法国TB-CHECK-1和韩国SD Rapid TB两种结核抗体对受检样本进行检测,用流行病学法分别计算两种试剂盒对结核病诊断的灵敏度、特异度、正确指数、似然比、预测值以及符合率。结果韩国SD Rapid TB试剂盒在评测指标上略高于法国TB-CHECK-1,但两者差异无统计学意义;两种试剂盒对于结核性脑膜炎的诊断具有重要的参考价值,对菌阳患者的检测会获得较高的阳性率。结论韩国SD Rapid TB试剂盒略优于法国TB-CHECK-1,两者对于临床诊断或排除结核病具有一定的参考价值。

三种检测沙眼衣原体方法的比较

目的:比较沙眼衣原体感染的三种实验室检测方法。方法:用Giemsa染色直接细胞学检查法、衣原体抗原快速免疫层析法(ICA)和实时荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)同时检测157例非淋菌性泌尿生殖道感染者和100例非泌尿生殖道感染的门诊病人。结果:Giemsa染色法I、CA法和FQ-PCR法的灵敏度和特异性分别为54.5%和100%、100%和98.2%、100%和92.0%。结论:ICA法具有较高的灵敏度和特异性,推荐基层单位使用ICA法。