免疫金银染色法、斑点ELISA和斑点免疫金银染色法检测华支睾吸虫病人血清中抗体的研究

用免疫金银染色法(IGSS)、斑点ELISA和斑点免疫金银染色法(Dot-IGSS)三种方法,同时检测40份华支睾吸虫病人血清,阳性率分别为100％、90％和95％,检测40份正常人血清,阴性率分别为100％、97.5％和97.5％,显示三种方法均有较高的敏感性和特异性。

快速斑点免疫金染色法与二种免疫金银染色法检测抗囊尾蚴抗体的比较研究

目的 建立敏感性高、特异性强 ,方法简便和经济实用的快速诊断囊尾蚴病的免疫学检测方法。方法将猪囊尾蚴液抗原点加于微孔滤膜 ,经预作用和封闭后 ,依次加入待检血清和金标记二抗 ,建立快速斑点免疫金染色法 (F -Dot-IGS)以检测囊尾蚴病患者血清抗体 ,同时用快速微量斑点免疫金银染色法 (RMDot-IGSS)和斑点免疫金银染色法 (Dot-IGSS)检测作为对照。结果 检测 4 0例囊尾蚴病患者血清抗体 ,阳性率 10 0 % ;检测 4 0例健康人血清均为阴性 ;除包虫病患者外 ,10例肝吸虫病患者、10例血吸虫病患者和 10例肺吸虫病患者血清未见交叉反应。结论 F -Dot-IGS敏感特异 ,快速简便 ,有较高的实用价值 。

免疫金银染色法在蛋白质微阵列检测TORCH感染的实验研究

目的研制基于免疫金银染色法的TORCH检测蛋白质微阵列。方法将TORCH抗原点样于已经被琼脂糖膜修饰的玻片表面,与待测血清和胶体金标记的抗人IgM(μ链)孵育,用银增强微阵列信号,肉眼观察或普通的平板扫描仪记录结果。以不同浓度的纯化人IgM制备标准曲线。结果蛋白质微阵列的灰度质和IgM的浓度呈线性关系。60份待测血清与ELISA法同时检测,诊断符合率为93.3%。结论该法具有高信息通量、低成本、制备与检测快速简单的优点。

免疫金银染色法诊断血吸虫病的研究

应用免疫金银染色法(IGSS)诊断血吸虫病,并与ELISA法比较。检测153例粪检阳性和76例健康人血清,其敏感性和特异性分别为96.08％和100％,显著高于ELISA的88.24％和94.70(p>0.05);与肝吸虫病的交叉反应两法均为4.76％;治疗后3年的49例血吸虫病人阳性率IGSS和ELISA分别为30.60％和28.57％,两法无显著差异(p>0.05)。表明IGSS的特异性高,敏感性强,制备金标记物方法简便,结果稳定。

彩色免疫金银染色法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究

试验首次建立了固相载体上的彩色免疫金银染色法(CIGSS)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),并获得成功。用提纯的PRRSV高免兔制备高免血清,按常规方法提取兔抗PRRSVIgG,建立了检测PRRSV抗原的彩色免疫金银染色法。经方阵试验确定最佳兔抗PRRSV IgG工作浓度为1∶400,金标羊抗兔IgG的工作浓度为1∶1 000,银染色的时间为15 min,彩染的时间为2 min。用该法对提纯的PRRSV病毒抗原的最低检出量为1.469μg/ml,其敏感性为DIGFA的5倍。以CIGSS法检测了52份疑似PRRSV感染的猪样本,阳性率为53.84%,而检测猪细小病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪巴氏杆菌以及正常的Marc-145细胞培养物,均为阴性反应。表明该法具有快速、准确、操作简便、敏感性高、易于判断、特异性强、重复性好等优点,可用于大量PRRSV抗原样本的检测。

应用免疫金银染色法对日本血吸虫、华支睾吸虫和卫氏肺吸虫进行抗原定位的研究

应用免疫金银染色技术（IGSS）和间接荧光抗体试验（IFAT）对日本血吸虫、华支睾吸虫和卫氏肺吸虫进行抗原定位的研究。证明日本血吸虫成虫主要特异性抗原定位在虫体肠管壁,华支睾吸虫和卫氏肺吸虫主要抗原定位也在肠管壁。IGSS观察华支睾吸虫的贮精囊部位以及卫氏肺吸虫皮层也存在特异性抗原。

微量快速斑点免疫金银染色法检测囊尾蚴病患者血清抗体的研究

目的 建立一种便捷的囊尾蚴病免疫学诊断方法。方法 在斑点免疫金银染色法 (Dot-IGSS)的基础上 ,待检血清标本原倍使用 ,缩短抗原抗体及与金标二抗的作用时间 ,建立微量快速斑点免疫金银染色法 (RMDot-IGSS)。结果 RMDot-IGSS法检测囊尾蚴病患者血清 96份 ,阳性率为 10 0 % ;检测健康献血员血清 5 0份 ,特异性为 96 % ;检测华支睾吸虫病患者、卫氏并殖吸虫病患者、日本血吸虫病患者血清各 10份 ,均未出现交叉反应 ;但棘球蚴病患者血清 10份有明显的交叉反应。以上结果与Dot-IGSS法检测结果比较 ,无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 RMDot-IGSS法的敏感性和特异性与Dot-IGSS相似 ,但操作简便快速 。

免疫金银染色法检测SLE患者血清抗核抗体和抗双链DNA抗体的临床研究

目的 探讨检测系统性红斑狼疮 (SLE)患者血清抗核抗体 (ANA)和抗双链DNA抗体 (A -dsDNA)的临床意义。方法 用免疫金银染色法 (immunogold -silverstaining ,IGSS)和斑点免疫金银染色法 (dot -immunogold -silverstaining ,Dot-IGSS)同步检测SLE患者血清ANA和A -dsDNA。结果 16 9例活动期SLE患者血清ANA和A -dsDNA的阳性率分别为 98.2 %和 77.2 % ;4 4例非活动期患者ANA和A -dsDNA的阳性率分别为 72 .2 %和15 .9% ,两组比较 ,阳性率有显著性差异 (P <0 .0 1)。活动期病人的血清滴度也较非活动期患者高 (P <0 .0 1) ;A -dsDNA阳性患者的肾损害率明显高于A -dsDNA阴性者 (P <0 .0 1)。结论 ANA、A -dsDNA阳性且滴度高提示SLE处于活动期 ,A -dsDNA阳性提示有肾损害的可能 ;但A -dsDNA阴性亦不能排除SLE。

单抗免疫金银染色法诊断家蚕微孢子虫的研究

本文首次探讨了光镜水平的免疫金银染色法结合单克隆抗体技术鉴别家蚕微孢子虫,并就单抗免疫金银染色法的条件和特异性进行了摸索研究,结果认为:pH≤7.4,用丙酮固定,在室温下25℃染色10分钟或30℃染色5分钟,单抗免疫金染色法效果好,且对家蚕微孢子虫有很强的特异性。

快速斑点免疫金染色法与二种免疫金银染色法诊断日本血吸虫病的比较

将日本血吸虫虫卵可溶性抗原点加于微孔滤膜 ,经预作用和封闭后 ,依次加入待检血清和金标记二抗 ,建立快速、敏感、特异性强 ,操作简便和经济实用的诊断日本血吸虫病的免疫学检测方法———快速斑点免疫金染色法 (R Dot IGS) ,该法无需银显影 ,检测过程仅为 15min。用 (R Dot IGS)、快速微量斑点免疫金银染色法 (RM Dot IGSS)和斑点免疫金银染色法 (Dot IGSS)同步检测 5 5份日本血吸虫病患者血清 ,三种方法的阳性率分别为 98. 18% ( 5 4/ 5 5 ) ,98. 18% ( 5 4/ 5 5 )和 10 0 % ;检测 5 0例健康人血清均为阴性 ;检测 10例肝吸虫病人和 10例肺吸虫病人血清 ,仅有 1份肝吸虫病人血清在RM Dot IGSS反应为阳性。检测结果证明R Dot IGS具有敏感特异、快速简便实用的特点 ,适用于日本血吸虫病的现场流行病学调查和临床快速诊断。

微量快速斑点免疫金银染色法检测系统性红斑狼疮患者血清肾小球基底膜抗体的研究

目的 建立一种便捷的检测系统性红斑狼疮 (SLE)患者血清肾小球基底膜抗体 (GBA Ab)的方法。 方法 在斑点免疫金银染色 (dot immunogoldsilverstaining ,Dot IGSS)的基础上 ,待检血清标本原倍使用 ,缩短抗原与抗体及与金标二抗的作用时间 ,建立微量快速斑点免疫金银染色法 (microvolume fast dot IGSS ,MFDot ISGG )。 结果 用MFDot IGSS法和Dot IGSS法同时检测SLE患者血清 6 0份 ,GBM Ab阳性率分别为 6 0 %和 6 1.7% ;检测其他自身免疫性疾病患者血清 40份 ,GBM Ab阳性率分别为 2 .5 %和 2 .5 % ;检测健康献血员血清 40份 ,GBM Ab均为阴性。二种方法的敏感性和特异性差异均无显著意义 (P >0 .0 5 )。 结论 MFDot IGSS法检测SLE患者血清GBM Ab的敏感性和特异性与Dot IGSS法相似 ,但操作简便快速 。

免疫金银染色法检测红细胞C3b受体及应用

红细胞膜表面的I型补体受体(CRI,又称免疫粘附受体、C3b/C4b受体、CD35),具有调控补体活性、粘附、运送、清除循环免疫复合物（CIC）的功能。常用检测方法为红细胞C3b受体酵母菌花环试验。本文介绍一种免疫金银染色法（IGSS）,方法简便,判断结果容易,适于常规应用。

免疫金银染色法和免疫荧光法检测抗角质蛋白抗体对类风湿性关节炎的诊断价值

目的探讨免疫金银染色法和免疫荧光法检测抗角质蛋白抗体对于类风湿性关节炎患者的诊断价值,比较两种方法的不同,为临床上正确诊断提供依据。方法采用免疫金银染色法和免疫荧光法分别检测48例类风湿性关节炎患者和48例正常对照者血清中的抗角质蛋白抗体。结果免疫金银染色法和免疫荧光法对于抗角质蛋白抗体检测的阳性率为:病例组分别为72.91%和52.08%,对照组为0和0;两种方法对于抗角质蛋白抗体的检测,其特异度都很高,两者间比较差异无统计学意义(P>0.05);但是在诊断的敏感度及正确率方面,免疫金银染色法好于免疫荧光法,两者间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论免疫金银染色法检测抗角质蛋白抗体对于类风湿性关节炎患者的诊断价值较高,其敏感度和特异度都较高,在临床上,可以采用免疫金银染色法检测抗角质蛋白抗体,其对于类风湿性关节炎的辅助诊断更有意义。

免疫金银染色法诊断班氏丝虫病的初步研究

应用免疫金银染色法（ＩＧＳＳ）检测１２３份班氏丝虫病人血清，５０份非流行区健康人血清和３２份流行区健康人滤纸于血液，阳性符合率为９８．３７％，阴性符合率分别为１００％和９６．８８％。非流行区健康人的阴性符合率显著高于ＩＦＡＴ的８６．００％（Ｐ＜０．０１）。与蛔虫病的交叉反应，１５例中１例出现阳性反应。用ＩＧＳＳ检测马来丝虫沙鼠血清抗体结果，阳性符合率与阴性符合率均为１００％。用班氏丝虫病人和健康人血清进行重复试验，结果均一致。表明ＩＧＳＳ敏感性高，特异性强，结果稳定，可用于班氏丝虫病的诊断。

免疫金银染色法快速检测水产品中孔雀石绿残留的研究

目的研究一种快速、稳定地检测水产中孔雀石绿残留的方法。方法基于胶体金免疫层析技术,采用竞争法,以硝酸纤维素(nitrocellulose,NC)膜为载体,以孔雀石绿单克隆抗体为标记蛋白,制备一种金标免疫层析试纸条用于渔药残留快速检测,同时用免疫金银染色法提高试纸条的灵敏度。结果该检测系统选用20nm直径的胶体金用于标记抗体,最适p H为9.0,最适蛋白结合量为每1 m L胶体金结合15μg抗体蛋白。标记成功的抗体以1:10比例稀释并取20μL固定到用PBS(0.01 mol/L,10%蔗糖,0.05%吐温-20)预处理过的玻纤膜上,作为金标垫。用于包被NC膜的抗原与二抗浓度分别为3 mg/m L和0.7 mg/m L。用免疫金银染色法放大显色信号,制备的试纸条检出限为0.2 ng/m L,并应用到实际鱼样的检测中。整个测试时间约为10 min。结论本方法重现性良好,且置于室温环境下保存90 d后仍稳定可靠,为水产品中孔雀石绿残留的快速检测提供了一条可行途径。

应用微量免疫金银染色法于砂眼衣原体血清学分型

建立了微量免疫金银染色法用于砂眼衣原体分离株的血清学分型。与微量免疫荧光法相比,微量免疫金银染色法具有结果可在普通光镜下读取以及可长期保存等优点。其敏感性与微量免疫荧光法相当或更高。对15个血清型参考株和40株分离株的分型结果与微量免疫荧光法一致,结果表明微量免疫金银染色法是一种较理想的微量免疫荧光法的替代方法。

免疫金银染色法检测系统性红斑狼疮患者血清中抗ds─DNA抗体的初步研究

本研究首次采用ＩＰＡ－胶体金为探针的免疫金银染色法检测系统性红斑狼疮病人血清中的抗ｄｓ－ＤＮＡ抗体，结果表明：应用该法大大提高了抗ｄｓ－ＤＮＡ抗体的检出率，在其它结缔组织病的病人血清中也检出一定量的抗ｄｓ－ＤＮＡ，其意义有待于进一步观察研究。

免疫金银染色法检测B淋巴细胞膜表面免疫球蛋白

B淋巴细胞在分化成熟过程中产生膜表面免疫球蛋白(SmIg)。常用的检测方法为免疫荧光法,因限于设备条件难以在基层实验室开展。我们建立了测定B淋巴细胞SmIg的免疫金银染色法(IGSS)。