黄芪免煎颗粒对兔干眼模型泪液及角膜、结膜黏蛋白1表达的影响

目的观察益卫固表药物黄芪免煎颗粒对兔干眼模型泪液及角膜、结膜黏蛋白1(MUC1)表达的影响。方法选取健康成年家兔30只,随机分为对照组(CG)、模型组(MG)、黄芪组(AM),每组10只。MG组和AM组建立兔黏蛋白缺乏型干眼模型,AM组以黄芪免煎颗粒口服溶液8.0 mL/kg灌胃28 d,CG组和MG组以等量0.9%氯化钠注射液灌胃。于造模后第0、28、56 d取家兔泪液,酶联免疫吸附法检测MUC1表达情况。第56 d取角膜、结膜行免疫荧光法检测MUC1表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MUC1基因表达。结果(1)泪液MUC1:与CG组比较,MG组兔第28、56 d泪液MUC1表达降低(t_(28 d)=26.739,t_(56 d)=15.268,均P=0.000);与MG组比较,AM组兔第56 d泪液MUC1表达升高(t=8.031,P=0.000),差异均有统计学意义。(2)角膜、结膜MUC1基因:与CG组比较,MG组MUC1基因表达降低(t=19.261,P=0.000);与MG组比较,AM组MUC1基因表达升高(t=6.008,P=0.000),差异均有统计学意义。(3)角膜、结膜MUC1蛋白:与MG组比较,AM组角膜、结膜MUC1蛋白表达均升高(t_(角膜)=4.582,t_(结膜)=6.354,均P=0.000),差异有统计学意义。结论黄芪免煎颗粒可通过提高干眼模型兔的泪液及角膜、结膜MUC1蛋白表达,发挥补益卫气作用,缓解黏蛋白缺乏型干眼症状。

密蒙花滴眼液对去势兔干眼模型泪腺细胞凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-8的干预作用

目的通过建立去势兔干眼模型,观察密蒙花滴眼液对其泪腺细胞凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-8的干预作用。方法将35只新西兰白兔随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、0.3、0.5、1.0 mg/mL、1.5、3.0 mg/mL密蒙花滴眼液(C、D、E、F、G组)。A、B组不予处理,C、D、E、F、G组分别予以相应密蒙花滴眼液局部滴眼,3次/日。疗程为4周。造模前、用药前及用药后检测各组基础泪液分泌试验(Schirmer′s test I,SIT)水平,免疫组化检测各组泪腺组织中Caspase-3、Caspase-8的表达情况,Real-time PCR法检测各组泪腺组织中Caspase-3、Caspase-8 mRNA的相对表达情况。结果与A比较,用药前及用药后B组SIT值降低(P<0.01);与B组比较,各治疗组用药后SIT值升高(P<0.01);各治疗组用药后与本组用药前比较,SIT值升高(P<0.01)。与A组比较,B组Caspase-3、Caspase-8表达及mRNA相对表达量升高(P<0.01)。与B组比较,D、F、G组Caspase-3及C、D、E、F、G组Caspase-8表达降低(P<0.01);C、D、E、F、G组Caspase-3及D、E、F、G组Caspase-8 mRNA相对表达量降低(P<0.01)。与C组比较,Caspase-3表达降低(P<0.05);D、E、F、G组Caspase-8 mRNA相对表达量降低(P<0.01)。除D与G组比较外,其他各浓度组间Caspase-3 mRNA相对表达量比较均有统计学意义(P<0.01)。结论密蒙花滴眼液可以通过下调去势兔干眼模型泪腺细胞凋亡因子Caspase-3和Caspase-8的表达,达到维持泪腺基础分泌量和保护泪腺的作用。

兔自身免疫性干眼模型的建立及泪腺炎症因子研究

目的通过静脉回输自体激活的淋巴细胞建立稳定的兔自身免疫性干眼模型,并分析干眼的泪腺炎性因子,探究干眼的泪腺免疫反应。方法通过体外分离、培养兔泪腺上皮细胞和自体外周血淋巴细胞,建立二者的共培养体系。将体外激活的自体外周血淋巴细胞通过耳缘静脉注射的方法诱发自身免疫性泪腺炎。对干眼临床指标及泪腺细胞因子表达进行检测。结果与正常对照组相比,干眼模型组泪液分泌显著减少(t=115.6,P<0.05),泪膜破裂时间缩短(t=92.5,P<0.05)。荧光素钠染色显示角膜弥漫性点状着色,正常对照组基本无着色。泪腺组织HE染色显示淋巴细胞浸润,正常对照组很少。RT-PCR结果显示,干眼模型组泪腺中炎性因子IFN-γ、IL-6、IL-17 mRNA相对表达量显著升高(t=26.2、18.7、8.4;均为P<0.05),抑炎因子IL-10、TGF-βmRNA相对表达量显著降低(t=22.1、14.2;均为P<0.05)。结论经兔泪腺上皮细胞激活的自体外周血淋巴细胞静脉回输后,成功诱发干燥综合征样自身免疫泪腺炎,建立了稳定的兔自身免疫性干眼模型。泪腺组织中细胞因子IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β、IL-10参与泪腺内炎症反应的发生和发展。