改良组织块法分离培养兔成纤维样滑膜细胞

目的通过改良组织块细胞培养法,建立一种简单,可行的兔成纤维样滑膜细胞体外培养方法。方法无菌条件下取正常兔膝关节滑膜组织,剔净后剪成碎块,用灭菌滤纸吸掉组织上附着的水分,碎片接种于培养皿,观察细胞生长状况及形态特征。取第3代对数期细胞,用CCK-8法绘制其生长曲线,并用免疫荧光法检测波形蛋白的表达情况。结果体外培养的兔成纤维样滑膜细胞形态为长梭形纤维样,细胞生长力较旺盛,生长曲线为典型的"S"型,免疫荧光检测显示第3代细胞强表达波形蛋白。结论改良组织块法可以分离培养出兔成纤样维滑膜细胞,方法简便,成功率高,满足实验要求。

悬浮组织块法分离培养兔成纤维样滑膜细胞

目的:建立兔成纤维样滑膜细胞悬浮组织块分离培养法。方法:取正常兔膝关节滑膜组织,用悬浮组织块法分离培养兔成纤维样滑膜细胞,观察细胞生长状况及形态特征,取第3代对数期细胞,CCK-8法绘制其生长曲线,免疫荧光法检测波形蛋白的表达情况,并与组织块贴壁法进行比较。结果:两种方法体外培养得到的兔成纤维样滑膜细胞形态为长梭形纤维样,细胞生长力较旺盛,生长曲线为典型的"S"形,免疫荧光检测显示第3代细胞强表达波形蛋白。结论:悬浮组织块法可以分离培养出兔成纤样维滑膜细胞,方法简便,效率高,为体外分离培养兔成纤维样滑膜细胞提供了一种新的方法。

白细胞介素-1β小干扰RNA的设计、合成及筛选

目的设计和合成针对白细胞介素-1β(IL-1β)的特异性小干扰RNA(siRNA),研究其对体外培养的新西兰白兔膝关节滑膜成纤维细胞表达IL-1βmRNA的干扰作用,筛选出有干扰效果的IL-1βsiRNA,为进一步构建IL-1β特异性双链RNA(dsRNA)质粒载体创造条件。方法参照siRNA的设计原则,采用Ambion公司提供的软件,利用Finder程序查找和设计针对IL-1βsiRNA的正义和反义寡核苷酸链。体外转录法合成4个IL-1βsiRNA,将合成的IL-1βsiRNA分别转染体外培养的新西兰白兔膝关节滑膜成纤维细胞,并以未转染细胞作为空白对照,采用RT-PCR技术检测所合成的IL-1βsiRNA对体外培养的兔滑膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的影响。结果转染48小时后,4条IL-1βsiRNA链中有1条(L4)能够使兔滑膜成纤维细胞IL-1βmRNA的表达水平明显下调,其余3条IL-1βsiRNAs链未见明显的干扰效果。结论不同的IL-1βsiRNA对兔膝关节滑膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达水平具有不同的干扰效能。成功筛选出1个有效的IL-1βsiRNA,初步提示RNA干扰技术可用于抑制兔膝关节滑膜成纤维细胞IL-1βmRNA的表达。