兔抗LGALS1蛋白多克隆抗体的制备

为制备兔抗LGALS1蛋白多克隆抗体,将纯化LGALS1蛋白作为抗原,联合弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂免疫新西兰大白兔,经过3次免疫后采集兔血清,采用间接ELISA测定抗血清效价,Western blot检测分析抗体特异性,IFA检测抗体应用效果。结果:血清效价为1∶102 400,Western blot检测可见特异性条带,IFA检测显示细胞质呈特异绿色荧光。结论:试验成功制备了兔抗LGALS1蛋白多克隆抗体,抗体特异性好,效价高。

抗CCL20单克隆抗体对血清淀粉样蛋白A相关的结节病中促炎性细胞因子的抑制作用

目的探讨抗CCL20单克隆抗体是否可抑制高水平血清淀粉样蛋白A(SAA)相关的结节病外周血单个核细胞(PBMC)中促炎性细胞因子的表达。方法提取健康人和结节病患者的PBMC,并进行分组。除空白对照组(正常人PBMC)和结节病PBMC对照组(患者PBMC)外,另将结节病组PBMC中分别加入SAA、SAA+抗CCL20单克隆抗体、SAA+NF-κB抑制剂BAY11-7082或地塞米松,经培养48 h后收集各组细胞,分别作为PBMC+SAA刺激组、PBMC+SAA+NF-κB抑制剂BAY11-7082组、PBMC+SAA+抗CCL20单抗组、PBMC+地塞米松干预组,使用ELISA分别测定各组细胞上清液中细胞因子IL-17A、IL-23、IL-6、CCL20和TGF-β1的表达,使用RT-PCR测定各组细胞中CCR6、IL-17、ROR-γt和Foxp3的mRNA表达水平,使用Western blot检测各组细胞中p-NF-κB和NF-κB蛋白的表达水平。结果PBMC+SAA+抗CCL20单抗组与PBMC+SAA组相比,细胞上清液中的IL-17A、IL-23和IL-6的水平显著降低(P<0.01),而TGF-β1的含量显著升高(P<0.01)。PBMC+SAA+抗CCL20单抗组相较于PBMC+SAA组,细胞中CCR6、IL-17A、ROR-γtmRNA水平显著降低(P<0.01),而Foxp3 mRNA差异无统计学意义(P>0.05)。PBMC+SAA+抗CCL20单抗组中p-NF-κB蛋白表达水平较PBMC+SAA组明显降低(P<0.01)。结论抗CCL20单克隆抗体可抑制高水平SAA相关的结节病PBMC中促炎性细胞因子的表达。

血清抗PLA2R抗体、增殖诱导配体、24 h尿蛋白水平联合检测在特发性膜性肾病中的应用价值

目的:探究在特发性膜性肾病中采用血清抗PLA2R抗体、增殖诱导配体(APRIL)、24 h尿蛋白水平联合检测的应用价值。方法:研究对象为80例特发性膜性肾病患者与30例进行体检健康者。回顾80例患者的病历资料,所有患者的病情均经肾穿刺活检病理检查确诊,并按病理分期分为3组,即病理分期为1期者为观察A组(25例),病理分期为2期者为观察B组(30例),病理分期为3期者为观察C组(25例),健康体检者为对照组。四组参与研究者,均开展血清抗PLA2R抗体、增殖诱导配体(APRIL)、24 h尿蛋白水平检测,对比四组血清抗PLA2R抗体、增殖诱导配体(APRIL)、24 h尿蛋白水平,同时评估联合检测在特发性膜性肾病中的应用价值。结果:特发性膜性肾病患者的抗PLA2R抗体、APRIL、24 h尿蛋白水平明显高于对照组相应指标水平,比较差异具有统计学意义(均P<0.05);三组患者的血清抗PLA2R抗体、APRIL、24 h尿蛋白水平比较差异无统计学意义(均P>0.05),其中观察C组患者以上指标高于观察1、2组,观察B组患者以上指标高于观察A组,比较差异均具有统计学意义(均P<0.05);血清抗PLA2R抗体表达越高,患者的APRIL、24 h尿蛋白水平越高,之间存在明显的正相关关系,比较差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论:特发性膜性肾病采用血清抗PLA2R抗体、增殖诱导配体(APRIL)、24 h尿蛋白水平联合检测,不仅可以检测出相关病情,还可以对病情的严重程度进行鉴别诊断。

血清抗微生物抗体结合粪钙卫蛋白检测鉴别诊断IBD患者的临床意义

目的 探讨血清抗微生物抗体结合粪钙卫蛋白检测鉴别诊断炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)患者的临床意义。方法 选取2021年1月至2022年12月盐城市盐都区疾病预防控制中心收治的96例以炎症性肠病(IBD)入院的患者为研究对象,分别进行血清抗微生物抗体结合粪钙卫蛋白检测,以病理检查及肠镜检查作为疾病诊断金标准,对两种诊断方式在IBD鉴别诊断中的实施价值进行分析。结果 96例疑似IBD患者经检查其中阳性患者89例,占比92.71%,其中克罗恩病(CD)患者45例、溃疡性结肠炎(UC)患者44例,分别占比50.56%、49.44%。经血清抗微生物抗体结合粪钙卫蛋白检测,检测结果与病理检验结果一致。UC组粪钙卫蛋白表达情况高于CD组(t=7.918,P <0.05)。经检查血清抗微生物抗体检测CD的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、诊断符合率88.89%、97.73%、97.56%、89.58%、93.26%高于粪钙卫蛋白77.78%、95.45%、94.59%、80.77%、86.52%,联合诊断效果更高。血清抗微生物抗体结合粪钙卫蛋白检测UC敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、诊断符合率均高于血清抗微生物抗体88.64%、97.78%、97.50%、89.80%、93.26%,高于粪钙卫蛋白79.55%、95.56%、94.59%、82.69%、87.64%。结论 IBD患者在检验过程中采用血清抗微生物抗体结合粪钙卫蛋白能够有效鉴别诊断患者的疾病类型,将两种方式联合其诊断敏感度,特异度较高,有效避免患者疾病误诊情况的发生,值得在临床疾病诊断过程中应用。

表面等离子体共振法检测人血清白蛋白抗体活性

表面等离子体共振法是研究生物大分子间相互作用的有效方法之一，和非直接方法（如酶联免疫）相比，具有实时、快速和免标记等特点。我们在甲羧基化葡聚糖修饰的传感片表面直接交联固定人血清白蛋白（ＨＳＡ），用于ａｎｔｉ－ＨＳＡ抗体活性的检测，并用Ｈ_３ ＰＯ_４（０．１ｍｏｌ／Ｌ）溶液再生。结果表明表面等离子体共振（ＳＰＲ）生物传感器能快速实时检测ａｎｔｉ－ＨＳＡ抗体的活性，且传感片能够重复使用１００次以上。

血清学阴性类风湿关节炎关节液中抗环瓜氨酸肽抗体、抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体的测定及临床意义

目的:检测血清学阴性类风湿关节炎(serum negative rheumatoid arthritis,SNRA)患者的关节液中抗环瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide,CCP)抗体、抗突变型瓜氨酸波形蛋白(mutated citrullinated vimentin,MCV)抗体水平,了解关节液中这两种抗体对诊断SNRA的临床意义。方法:应用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测两组患者膝关节液中抗CCP抗体和抗MCV抗体,实验组为SNRA患者,共29例,对照组为骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者,共28例,并收集两组患者的临床表现及实验室指标。结果:实验组29例SNRA患者膝关节液中抗CCP抗体阳性者10例(34.5%),测定值为(114.5±62.6)U/m L;抗MCV抗体阳性者6例(20.7%),测定值为(32.0±11.3)U/m L;对照组28例OA患者膝关节液中3例抗CCP抗体阳性(10.7%),测定值为(20.6±0.1)U/m L,2例抗MCV抗体阳性(7.1%),测定值为(22.1±1.7)U/m L。SNRA组关节液抗CCP抗体的阳性率显著高于对照组(34.5%vs.10.7%,χ2=4.571,P<0.05);SNRA组关节液抗MCV抗体的阳性率高于对照组(20.7%vs.7.1%,χ2=2.167,P>0.05),但差异无统计学意义;抗CCP抗体在SNRA中的敏感性为34.5%,特异性为89.3%,阳性预测值为76.9%,阴性预测值为56.8%;抗MCV抗体敏感性为20.7%,特异性为92.9%,阳性预测值为75.0%,阴性预测值为53.1%;膝关节液中抗CCP抗体和抗MCV抗体两者联合检测的敏感性为48.0%,特异性为82.8%,SNRA关节液抗CCP抗体阳性组、抗MCV抗体阳性组与各自阴性组相比较,在年龄、病程和晨僵方面差异均无统计学意义,而膝关节液抗CCP抗体阳性组和抗MCV抗体阳性组红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)和28个关节的疾病活动评分(the disease activity score in 28 joints,DAS28)均比各自阴性组高(P均<0.01)。抗CCP抗体与ESR和CRP之间呈正相关(r=0.567,P<0.01;r=0.664,P<0.01);抗MCV抗体与ESR和CRP之间呈正相关(r=0.344,P<0.01;r=0.749,P<0.01)。结论:SNRA关节液抗CCP抗体和抗MCV抗体联合检测有助于SNRA诊断和疾病活动的判断。

血清抗幽门螺杆菌热休克蛋白60抗体与消化性溃疡的关系

目的 :探讨幽门螺杆菌 (Hp)感染患者血清抗幽门螺杆菌热休克蛋白60(Hsp60)抗体与消化性溃疡的关系。方法 :检测胃溃疡、十二指肠球部溃疡、慢性浅表性胃炎患者Hp感染及血清抗幽门螺杆菌Hsp60抗体表达情况。结果 :(1)血清抗幽门螺杆菌Hsp60抗体阳性表达仅见于Hp阳性患者。Hp阳性胃溃疡、十二指肠球部溃疡患者血清抗幽门螺杆菌Hsp抗体阳性率明显高于慢性浅表性胃炎患者 (均P<0.05)。(2)26例血清抗幽门螺杆菌Hsp抗体阳性的消化性溃疡患者在Hp根除及洛赛克疗程结束后4周 ,其中7例抗体转为阴性。结论 :血清抗幽门螺杆菌Hsp60抗体可能与Hp感染所致消化性溃疡的发生有关 ;血清抗幽门螺杆菌Hsp60抗体不能作为近期判断Hp根除与否的标准。

血清抗S100B蛋白自身抗体的检测法及初步应用

目的 建立一种检测血清抗S10 0B蛋白自身抗体的方法 ,探讨抗S10 0B自身抗体对精神及神经系统疾病的意义。方法用间接ELISA检测 112例健康人及 10 1例精神病及神经系统疾病患者血清抗S10 0B自身抗体。结果 建立的ELISA有较高的特异性。批内与批间平均变异系数分别为 5 6 %和 12 1%。抗S10 0B自身抗体阳性率 ,癫痫为 4 6 .6 7% (14 / 30 ) ,多发性硬化为4 5 .83% (11/ 2 4 ) ,帕金森病为 6 3.6 4 % (14 / 2 2 ) ,抑郁症为 4 0 .0 % (12 / 2 5 )。结论 该法可有效地检测抗S10 0B自身抗体 ;某些精神病患者或神经系统疾病患者血清中抗S10

子宫内膜异位症患者血清和腹腔液中CA125和抗转铁蛋白抗体水平测定

目的:探讨CA125和抗转铁蛋白抗体(TFAb)在子宫内膜异位症(EMT)患者血清和腹腔液中的表达水平及其诊断价值。方法:采用ELISA法检测52例EMT(Ⅰ、Ⅱ期25例,Ⅲ、Ⅳ期27例)患者及40例对照血清和腹腔液中CA125和TFAb的水平。结果:3组血清和腹腔液中CA125的水平差异有统计学意义(F=21.997和45.551,P<0.001);EMTⅢ、Ⅳ期患者血清和腹腔液中CA125水平高于Ⅰ、Ⅱ期患者(P<0.05)。3组血清、腹腔液中CA125和TFAb阳性率的比较,差异有统计学意义(χ2=18.945、40.926和59.916、59.919,P<0.05)。采用CA125和TFAb串联试验对EMT诊断的特异性可达到100.0%,CA125和TFAb并联试验中腹腔液对EMT诊断的灵敏性为94.2%。结论:CA125和TFAb均有助于EMT的诊断,联合测定血清或腹腔液中CA125和TFAb可提高诊断的准确性。

VZV糖蛋白E基因胞外域的原核表达及其兔抗血清的制备

目的采用原核表达系统表达水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白E(g E)基因的胞外域,将纯化后的目的蛋白免疫新西兰家兔,制备该蛋白特异性抗血清。方法构建原核表达质粒g E-p ET-32a(+),测序后将其转化至E.coli BL21,以异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,获得VZV g E融合蛋白。采用SDS-PAGE电泳、Western blot法鉴定其特异性,利用Ni2+-NTA柱对g E蛋白进行纯化,复性后免疫新西兰家兔,获得兔抗VZV g E血清;采用间接免疫荧光、Western blot法和ELISA法检测该血清的特异性和效价。结果成功诱导表达出VZV g E融合蛋白,SDS-PAGE鉴定提示其主要为包涵体表达,浓度约为3.01 mg/ml。蛋白经Ni2+-NTA柱纯化后,纯度约为90%。Western blot法显示,经变性、复性后的该融合蛋白有良好的免疫反应性。用该蛋白免疫新西兰家兔后获得兔抗VZV g E血清。ELISA分析显示,该兔抗血清的效价为1∶6 400。结论成功构建了高效表达VZV g E蛋白的原核表达系统,获得较高纯度的g E蛋白,可以作为VZV亚单位疫苗的候选抗原,制备了特异性及效价均较高的兔抗VZV g E多克隆抗体,为VZV感染的临床诊断及治疗提供了重要的实验工具。

脑梗死患者血清抗β2-糖蛋白1抗体水平变化与颈动脉粥样硬化的相关性

目的探讨脑梗死患者血清抗β2-糖蛋白1(β2-GP1)抗体水平与颈动脉粥样硬化(CAS)斑块及其危险因素的相关性。方法选取303例前循环脑梗死患者,应用血管多普勒超声仪进行颈部血管超声检测,根据有无CAS斑块及狭窄程度将患者分为三组,其中无斑块无狭窄组79例,有斑块无狭窄组98例,有斑块有狭窄组126例,有斑块有狭窄组中1级狭窄41例,2级狭窄34例,3级狭窄30例,4级狭窄21例。采用ELISA检测患者血清抗β2-GP1抗体水平,用酶法测量血糖、甘油三酯及总胆固醇水平,用直接法测量血清低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)及高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)水平。结果无斑块无狭窄组、有斑块无狭窄组、有斑块有狭窄组患者血清抗β2-GP1抗体水平分别为16.02±16.23 kRU/L、21.43±16.15 kRU/L、34.89±19.15 kRU/L;有斑块无狭窄组、有斑块有狭窄组患者血清抗β2-GP1抗体水平明显高于无斑块无狭窄组(P<0.05或P<0.01),有斑块有狭窄组患者血清抗β2-GP1抗体水平明显高于有斑块无狭窄组(P<0.01);血清抗β2-GP1抗体水平随CAS狭窄程度的增加而增高。Logistic回归分析显示,抗β2-GP1抗体水平与LDLC水平密切相关。结论血清抗β2-GP1抗体参与动脉粥样硬化的形成、发展,LDLC是血清抗β2-GP1抗体增高的独立危险因素,血清抗β2-GP1抗体可作为CAS的血清生化指标之一。

不同免疫程序制备兔抗牛血清白蛋白抗血清的效价比较

目的比较两种免疫程序制备牛血清白蛋白(BSA)抗血清的效价,以获取能满足实验教学需要的高效价可溶性抗血清。方法采用2天短期间隔免疫程序和1周间隔免疫程序,以牛血清白蛋白(BSA)免疫家兔,对流免疫电泳和双向琼脂扩散试验检测并比较其血清抗体效价。结果BSA浓度在5 mg/mL时,双向琼脂扩散试验和对流免疫电泳测得的2天间隔免疫程序所制备的BSA抗血清几何平均滴度(GMT)分别为1∶6.50和1∶4.2,1周间隔免疫程序的BSA抗血清GMT分别为1∶10.56和1∶8.00。结论1周间隔免疫程序所制备的牛BSA抗血清效价高于2天短周期间隔的免疫程序所制备抗血清效价,BSA短周期免疫家兔可获取符合教学实验要求的抗血清效价。

血清胃蛋白酶原、血清胃泌素-17与抗幽门螺杆菌IgG抗体在萎缩性胃炎及胃癌筛查中的应用价值

近年来研究发现，血清胃蛋白酶原、血清胃泌素-17与抗幽门螺杆菌抗体在萎缩性胃炎及胃癌筛查中具有应用价值，甚至认为这些指标是胃黏膜血清学活检，现将有关进展简述如下。

冠心病患者血清抗G-蛋白偶联受体自身抗体的分布特性

目的探讨冠心病患者血清中抗G-蛋白偶联受体自身抗体的分布特征。方法选择冠心病患者131例,正常健康体检者100名,采用链酶亲和素-酶联免疫吸附试验(SA-ELISA)测定其血清中抗G-蛋白偶联型β1AR、Μ2R、α1AR自身抗体。结果①冠心病患者血清抗G-蛋白偶联型β1AR、Μ2R、α1AR自身抗体的阳性率分别为20.6%(27/131)、16.8%(22/131)、39.7%(52/131),明显高于正常对照组的7.0%(7/100)、8.0%(8/100)、15.0%(15/100)(P<0.05);②冠心病组抗β1AR、Μ2R、α1AR自身抗体阳性患者的平均抗体滴度分别为1:(87.3±3.1)、1:(92.5±2.4)、1:(101.2±2.6),明显高于正常对照组的1:(14.6±2.7)、1:(21.4±2.2)、1:(26.6±3.8)(P<0.01)。结论冠心病患者血清中不仅存在抗G-蛋白偶联型β1AR、Μ2R和α1AR自身抗体,而且抗体阳性率和滴度也明显高于正常对照组,提示这些自身抗体的出现及其介导的自身免疫反应可能参与冠心病的病理生理过程。

子宫内膜异位症患者血清抗转铁蛋白抗体的表达及意义

目的建立一种ELISA方法 ,检测患者血清中抗转铁蛋白抗体 ,评价其对子宫内膜异位症诊断的价值。方法用转铁蛋白抗原包被 ,间接ELISA方法检测患者血清中抗转铁蛋白抗体。采集患者血清 ,分 3组 :盆腔内异症组 38例 ,Ⅰ、Ⅱ期 2 0例 ,Ⅲ期 9例 ,Ⅳ期 9例 ;妇科良性疾病对照组 30例 ;正常对照组 4 0例。结果内异症患者血清中抗转铁蛋白抗体阳性率高达 94 .7% ,正常对照组阳性率为 2 .5 % ,良性疾病对照组阳性率为 0 % ,内异症组与两对照组比较差异有显著意义 (P均 <0 .0 1 )。间接ELISA法诊断内异症临床敏感性为 94 .7% ,特异性为 98.6 % ,诊断符合率为 96 .5 %。内异症各组阳性率比较差异无显著意义 (P >0 .0 5 )。结论用转铁蛋白抗原包被的间接ELISA法检测血清中抗转铁蛋白抗体诊断内异症敏感性、特异性强 ,诊断符合率高 。

人血清白蛋白单克隆抗体的制备、鉴定与初步应用

目的制备人血清白蛋白(HSA)单克隆抗体(单抗)并以之制备亲和层析柱去除甘露聚糖结合凝集素(MBL)制剂中污染的HSA。方法采用杂交瘤技术制备单抗,通过ELISA、Western-blotting鉴定其特性;制备亲和层析柱去除MBL制剂中的污染HSA。结果筛选出4株稳定分泌HSA单抗的杂交瘤细胞株1C11、2E9、3A5和4H1,单抗亚类均为IgG1,亲和常数分别为7.19×109、1.46×109、6.94×109和2.28×1010;1C11与3A5的识别位点相似或相同,其他单抗识别位点均不同;4H1可与兔血清发生交叉反应,余者与其他种属血清均无交叉反应。结论所制备的HSA单抗1C11、2E9、3A5能特异结合HSA且与其他种属血清无交叉反应,抗HSA单抗亲和层析柱可用于去除人血清蛋白制剂中的污染HSA。

黄鳝血清白蛋白的纯化及抗体制备

通过阴离子交换层析和凝胶过滤层析,从黄鳝血清中得到其血清白蛋白,命名为MAA-serum,分子量为67kDa,为单链非糖蛋白,其N末端氨基酸序列为GHKKW。用0.5mg/只MAA-serum作为免疫源免疫大白兔,经3次免疫后,抽取大白兔血液,分离血清,饱和硫酸氨沉淀,获得抗MAA-serum的多克隆抗体。经ELISA方法测定该抗体与黄鳝血清白蛋白的免疫反应,抗体滴度为1∶100000。经初步研究发现黄鳝皮肤中也有大量血清白蛋白分布,该抗体为进一步研究MAA-serum在皮肤中的分布及生物学功能打下基础。

超敏C反应蛋白、类风湿因子、抗环瓜氨酸肽抗体联合血清淀粉样蛋白A检测在类风湿性关节炎诊断中的应用价值

目的探讨超敏C反应蛋白(hs-CRP)、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)联合血清淀粉样蛋白A(SAA)检测诊断类风湿性关节炎的价值。方法以该院2018年1月至2018年12月收治的102例类风湿性关节炎患者作为实验组,同期82例健康体检者作为对照组,使用特种蛋白分析仪OTTMAN-1及配套试剂盒检测全血hs-CRP和SAA,使用日立7600生化分析仪及配套试剂检测抗CCP抗体及RF,比较四项指标水平。结果实验组患者的hs-CRP、RF、抗CCP抗体和SAA平均水平均明显高于对照组(P<0.05);实验组患者hs-CRP、RF、抗CCP抗体和SAA阳性检出率分别为88.24%、91.18%、81.37%和91.18%,高于对照组的1.22%、0.00%、57.32%和0.00%(P<0.05);实验组患者hs-CRP、RF、抗CCP抗体联合SAA检测阳性检出率为98.04%,高于单一指标检出率(P<0.05)。结论hs-CRP、RF、抗CCP抗体联合SAA检测有利于提高类风湿性关节炎诊断准确性。