ATP5B兔多克隆抗体制备与功能验证

ATP5B是F1F0 ATP合酶F1部分的β亚基,在许多生物体中负责大部分的ATP合成。本研究利用从公司购买的pET-24a(K+)-ATP5B质粒并转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,在25℃最佳诱导温度条件下以 0.1 mmol/L 异丙基硫代半乳糖苷诱导表达重组蛋白。经SDS-PAGE分析重组表达的融合蛋白,显示分子量约为27 kDa,与预期大小相符。将该重组蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,获得血清,采用间接ELISA测定其效价达1:243000。经 SDS-PAGE验证,此抗体纯度大于90%;利用人脐静脉内皮细胞膜蛋白为抗原,采用WB、ICC和FCM证实了此抗体的高度特异性。研究结果为深入分析ATP5B的结构和功能及进一步探讨ATP5B与肿瘤的相互作用提供了基础。

抗人Ⅰ型干扰素受体亚基1人源化单克隆抗体的制备和鉴定

Ⅰ型干扰素在系统性红斑狼疮(SLE)等自身免疫性疾病的发病机制中发挥重要作用,采用抗体阻断其信号转导通路具有潜在的治疗作用。本研究以人Ⅰ型干扰素受体亚基1(IFNAR1)重组蛋白为抗原免疫新西兰白兔,采用B细胞克隆技术筛选兔抗人IFNAR1单克隆抗体,经过人源化改造获得QX006N。体外研究结果显示,QX006N能特异性地结合人IFNAR1,亲和力约108 pmol/L,可阻断Ⅰ型干扰素信号通路及其介导的生物学效应。本研究为开发靶向干预Ⅰ型干扰素信号途径用于治疗SLE的抗体药物提供了坚实的基础。

兔抗重组穿孔素抗体的制备及特性鉴定

目的:制备兔抗重组穿孔素的抗体,检测其免疫反应性,并用于穿孔素的体外功能定位分析。方法:以纯化的全长穿孔素融合蛋白DsbAfulllength免疫新西兰大白兔制备抗血清,用免疫双扩法检测抗血清的效价,Westernblot检测抗血清与5个穿孔素侯选活性区域重组融合蛋白的免疫反应性。将活性重组穿孔素体外作用HIV1SF33感染的MT4细胞后,用免疫组化染色法显示穿孔素作用的部位。结果:用免疫双扩法检测表明,兔抗穿孔素融合蛋白抗血清的效价为1∶32;Westernblot显示,抗血清可与穿孔素各重组融合蛋白发生特异性结合;免疫组化显示,穿孔素作用的部位位于靶细胞的胞质和胞膜。结论:制备的兔抗重组穿孔素融合蛋白的抗体具有较好的免疫反应性和特异性,为穿孔素的深入研究提供了有力的工具。

应用间接ELISA方法检测兔轮状病毒抗体的初步研究

目的 建立间接ELISA方法对兔轮状病毒抗体进行检测。方法 确定抗原和阴、阳性参考血清的最佳工作浓度 ;进行特异性、敏感性以及中间试验。结果 抗原的最佳工作浓度为 1∶12 0 0 0倍 ;参考血清的最佳工作浓度为 1∶2 0 0倍 ;本次实验建立的ELISA方法具有很好的敏感性和特异性 ;中间实验表明 ,LaRV在兔群中具有很高的感染率。结论 本次试验成功地建立了用于兔轮状病毒抗体检测的ELISA方法。

单克隆抗体与多克隆抗体的混合在胱抑素C测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)中的应用

为优化兔抗人胱抑素C多克隆抗体和人胱抑素C单克隆抗体的混合比例,将不同比例混合的抗体制备成胱抑素C(胶乳免疫比浊法)测定试剂盒,对试剂盒的灵敏度进行测定,从而筛选出最适的混合比例,与进口抗体和市面上较为认可的试剂盒进行应用比较。结果表明,兔抗人胱抑素C多克隆抗体和人胱抑素C单克隆抗体最适的混合比例为70%:30%;将国产兔抗人胱抑素C多克隆抗体、进口胱抑素C多克隆抗体与最适混合比例的抗体相同质量投量料同时包被成试剂,分别命名为试剂1、试剂2、试剂3,三种试剂校准后同时进行临床样本测定及相关性分析、线性实验及抗原过剩测定,数据显示,试剂3与试剂1及试剂3与试剂2之间均具有很强的临床相关性,线性实验和抗原过剩测定数据无明显差异,都可以满足应用要求;将试剂3与市场上口碑较好的的胱抑素C试剂盒进行临床样本测定比对,实验数据显示,两者在临床应用上无明显差异;通过胱抑素C单克隆抗体和多克隆抗体混合,减少了交叉反应的可能性,实现了较好的批间和批内一致性,具备更广泛的识别范围,提供了更全面、准确的识别和检测结果。

制备兔抗人IgG抗体的一种简便方法

我们采用中等剂量抗原免疫法，用加佐剂的纯化人IgG抗原对家兔足掌、皮下和肌肉多点注射进行基础免疫，用不加佐剂的单独人IgG抗原肌肉和皮下多点注射后，再经耳缘静脉注射进行加强免疫相配合，制备成高效价（1：32）兔抗人IgG抗血清。

兔抗甲胺磷多克隆抗体的制备

采用水溶性碳化二亚胺法 (EDC) ,将MTP与牛血清蛋白 (BSA)、人血清蛋白 (HSA)和鸡卵清蛋白(OVA)共价偶联 ,分别合成免疫抗原MTP BSA、MTP HSA和包被抗原甲胺磷 鸡卵清蛋白 (MTP OVA) ,用合成的免疫抗原对新西兰大白兔进行免疫 ,制得抗血清经鉴定确证为兔抗MTP多克隆抗体 (polyclonalantibody ,PAB) ,效价分别为 1∶15 0 0 0和 1∶12 0 0 0。

兔抗鸡IgG-HRP酶标抗体的制备与检测

将经多种方法提纯的鸡IgG与从美国Sigma公司购买的纯鸡IgG产品进行对比研究证实 ,用辛酸沉淀 50 %SAS 离子交换层析方法可获得纯度很好的鸡IgG产物。运用该产物成功制备了兔抗鸡IgG抗血清以及抗鸡IgG重链抗血清。用辛酸沉淀 50 %SAS 35 %SAS盐析提纯的兔抗鸡IgG与用NaIO4 作用 1 6～ 2 0min的已氧化辣根过氧化物酶 (HRP)结合 6h,获得了优质可靠的兔抗鸡IgG

一种制备兔抗人IgG抗体的简易方法

目前，制备兔抗人ＩｇＧ的方法很多，但没有一个统一的具体方案，难以制备出理想的高效价抗体。我们根据抗体产生的基本原理，参照有关文献，探索出一种能得到高效价抗体的简易的方法，介绍如下：材料和方法１抗原制备参照文献［１、２］进行。选取多份健康人混合血清，新...

兔抗M13噬菌体酶标抗体的制备

M13噬菌体已被广泛地应用于噬菌体展示技术.M13的酶标抗体,是在噬菌体展示技术筛选结果ELISA检测中不可缺少的试剂.我们制备了兔抗M13抗血清,其效价高于1:6000;经两步饱和硫酸铵沉淀,初步纯化了兔抗M13抗体;用过碘酸钠法对抗体进行了辣根过氧化酶的标记,酶标记抗体活性为1:6400.

教学用纯化水疱性口炎病毒抗原制备兔多克隆抗体结果分析

目的用纯化水疱性口炎病毒抗原制备兔抗VSV多克隆抗体,经免疫学方法检测并分析其结果。方法纯化VSV抗原免疫家兔后收集免疫血清,采用双向琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)和中和试验测定效价。结果兔抗VSV多克隆抗体双向琼脂扩散试验最高效价为1∶32,ELISA法最高效价为1∶320,中和试验最高效价为1∶256。结论纯化VSV抗原制备的兔抗VSV多克隆抗体特异性好、敏感性高,可为课堂教学、VSV科研及流行病学调查提供可靠依据和技术保障。

免疫亲和层析法从兔杂交瘤培养上清液中纯化兔抗烟草花叶病毒的单克隆抗体

报道一种较为简易的免疫亲和层析技术,从兔杂交瘤培养上清中分离纯化单克隆抗体。先用过碘酸钠活化层析柱填料Sepharose4B,然后加入碱性碳酸钠缓冲液与羊抗兔IgG于4℃偶联过夜,冲洗后加硼氢化钠使偶联稳定,经1%BSA-PBS溶液封闭,冲洗后即得到免疫亲和层析柱。将兔抗烟草花叶病毒(TMV)杂交瘤细胞2E2和3C6的培养上清加入亲和柱中,37℃下吸附1h,冲洗后用pH3稀盐酸溶液洗脱,洗脱液用Tris溶液调至pH中性,供SDS-PAGE分析和Western blot实验。洗脱液中存在分子量约为60000与52000的二条蛋白条带。Western blot结果显示,纯化抗体对纯化TMV样品,以及TMV侵染的烟草病叶中的TMV都具有非常好的识别能力。利用所报道的免疫亲和层析技术,从兔杂交瘤培养上清中成功分离纯化到兔抗TMV的单克隆抗体。

人肝脏凝血因子Ⅺ的原核表达及其兔多克隆抗体的制备

目的利用原核表达系统表达人肝脏凝血因子Ⅺ(coagulation factorⅪ,F11)蛋白,并制备F11的兔多克隆抗体。方法从cDNA文库中筛选并扩增F11基因,将其分别与带有HIS标签的pET-32a及GST标签pGEX-4T-1载体连接,获得表达质粒,将表达质粒转入BL21菌中表达F11融合蛋白(分别含有HIS、GST-Tag),通过SDS-PAGE进行鉴定。获得的F11融合蛋白经纯化后作为免疫原及检测原,制备兔多克隆抗体,Western blot分析获得的兔多克隆抗体的特异性。结果成功构建pET-32a-F11、pGEX-4t-1-F11表达质粒,获得两种标签的融合蛋白。将重组蛋白纯化后作为免疫原免疫兔,取得了能与重组蛋白特异性结合的兔血清。结论成功制备了F11重组蛋白及F11兔多克隆抗体,为进一步研发F11诊断试剂打下了基础。

兔单克隆抗体的发展及应用前景

单克隆抗体药在所有医药生物技术产品中很重要。目前单克隆抗体药物主要用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病和感染性疾病,尤其在癌症治疗方面疗效突出。本文结合当前单克隆抗体技术的发展状况,重点论述了兔单克隆抗体技术的发展状况、技术优势及研究进展,并展望了兔单克隆抗体在临床诊断和治疗方面的应用前景。

母兔兔出血症免疫抗体效价与仔兔母源抗体水平的相关性研究

为了掌握母兔兔出血症免疫抗体效价对仔兔母源抗体水平影响的规律性，从而确定仔兔合适的初免时间，并为其制定科学合理的免疫程序。选择10只妊娠母兔，于其产前5～10d进行耳静脉采血，检测兔出血症免疫抗体效价；将兔出血症免疫抗体效价分别为3log2、4log2、5log2、6log2和7log2的待产母兔分为5组，每组2只（母兔与其所产仔兔在同一组）；待各组母兔所产仔兔达30、40、45和55日龄时分别进行耳静脉采血，检测仔兔母源抗体水平；最后将母兔免疫抗体效价与仔兔母源抗体水平进行比较。结果显示：5组仔兔的母源抗体水平与母兔免疫抗体效价均呈正相关。表明可根据回归方程，依据检测得到的母兔免疫抗体效价来推算仔兔母源抗体水平，构建免疫程序。

Fe_3O_4/P(AA-MMA-GMA)磁性复合微球的制备及其偶联抗体的性能

采用新型的无皂乳液聚合法制备磁性复合微球,即以丙烯酸(AA)、甲基丙烯酸甲酯(MMA)和甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)为单体,1,1-二苯基乙烯为自由基控制剂,无皂乳液聚合制备了一种磁性复合微球Fe3O4/P(AA-MMA-GMA)。以所制备的Fe3O4/P(AA-MMA-GMA)微球为载体,通过共价偶联山羊抗兔IgG抗体,得到了一种免疫磁性复合微球。研究表明,Fe3O4/P(AA-MMA-GMA)微球表面带有环氧基,粒径为626nm,具有超顺磁性。0.5mgFe3O4/P(AA-MMA-GMA)微球与200μg山羊抗兔IgG抗体在pH=7.4的磷酸盐缓冲液中于25℃反应16h,可得到一种免疫磁性复合微球,其山羊抗兔IgG的偶联量为124μg,且该免疫磁性复合微球可特异性结合兔抗肌动蛋白α。

异硫氰酸荧光素标记抗体的固体基质室温磷光性质研究

研究了异硫氰酸荧光素 (FITC)标记的羊抗人抗体 (GAHAb FITC)和兔抗羊抗体 (RAGAb FITC) ,及其以三种免疫方式与人免疫球蛋白 (IgG)反应所得免疫复合物在多种固体薄膜基质上发射室温磷光 (RTP)的适宜条件及其光谱、强度和寿命等性质。研究发现 ,标记抗体及其免疫复合物保留了FITC优良的固体基质室温磷光性质 ,λ(max)ex λ(max)em =5 2 5 6 5 0nm ,其RTP强度与其浓度线性相关 ,并有很高的灵敏度。更为重要的是 ,免疫反应及其RTP检测能结合于同一基质 ,方便地相继完成。在聚酰胺膜 (PM )上 ,以Pb(Ac) 2 为重原子微扰剂 ,稀释比为 1∶10 (φ)的GAHAb FITC ,RAGAb FITC及其与人IgG形成的免疫复合物均能发射较强的RTP信号并有较长的RTP寿命。本结果为建立相应的固体基质室温磷光免疫分析 (SS RTP IA)新方法奠定了相应的实验基础。

法氏囊活性肽对兔瘟灭活疫苗免疫效果影响的研究

采用超滤浓缩技术制备纯化的鸡法氏囊活性肽(分子量1kDa以下,主要成分为法氏囊活性肽),以不同的剂量肌肉注射45日龄母兔,同时颈部皮下接种兔瘟灭活疫苗,观察法氏囊活性肽对兔瘟疫苗免疫效果的影响。结果表明:纯化的法氏囊活性肽能够加快兔瘟抗体产生的速度,缩短诱生抗体时间,提高抗体水平,延长抗体维持时间。实验期间,4mL法氏囊活性肽组的兔瘟HI抗体水平比对照组平均高2～3个滴度。淋巴细胞转化试验结果表明:禽法氏囊活性肽可以短暂地促进T-淋巴细胞的活化。因此,法氏囊活性肽主要对体液免疫具有增强作用。

日粮中添加不同水平的黄芪多糖对獭兔免疫力的影响

为研究日粮中添加不同水平的黄芪多糖对獭兔免疫力的影响,试验选取50日龄、健康、体重相近的青年獭兔64只,随机分为4个组,每组16只,公母各半,对照组饲喂基础日粮,试验1~3组在饲喂基础日粮的基础上分别添加0. 10%、0. 15%、0. 20%的黄芪多糖,试验獭兔常规饲养管理及免疫,试验期28 d,第7,14,21,28采血清检测兔瘟抗体水平,第28天检测血液免疫细胞数、血清免疫球蛋白(Ig)含量。结果表明:试验1组血液免疫细胞数量除淋巴细胞数略高于对照组外,其他均低于对照组,但差异不显著(P>0. 05);试验2,3组免疫细胞数量除中性粒细胞外均高于对照组,但差异均不显著(P>0. 05)。试验1组除IgM含量与对照组相比稍有下降外,Ig G、Ig A含量均比对照组高,但差异不显著(P>0. 05);试验2,3组IgG、IgM、Ig A含量均高于对照组,且IgM、IgA含量与对照组相比差异显著(P<0. 05)。与对照组相比,免疫后试验1~3组兔瘟HI抗体效价上升速度快,高峰维持水平高,其中试验2,3组獭兔免疫两周后,效价均超过10. 0,达到高保护状态。说明日粮中添加黄芪多糖可以显著提高獭兔免疫水平,改善獭兔健康状态,适宜添加量为0. 15%~0. 20%。