兔抗鸡IgG-HRP酶标抗体的制备与检测

将经多种方法提纯的鸡IgG与从美国Sigma公司购买的纯鸡IgG产品进行对比研究证实 ,用辛酸沉淀 50 %SAS 离子交换层析方法可获得纯度很好的鸡IgG产物。运用该产物成功制备了兔抗鸡IgG抗血清以及抗鸡IgG重链抗血清。用辛酸沉淀 50 %SAS 35 %SAS盐析提纯的兔抗鸡IgG与用NaIO4 作用 1 6～ 2 0min的已氧化辣根过氧化物酶 (HRP)结合 6h,获得了优质可靠的兔抗鸡IgG

制备兔抗人IgG抗体的一种简便方法

我们采用中等剂量抗原免疫法，用加佐剂的纯化人IgG抗原对家兔足掌、皮下和肌肉多点注射进行基础免疫，用不加佐剂的单独人IgG抗原肌肉和皮下多点注射后，再经耳缘静脉注射进行加强免疫相配合，制备成高效价（1：32）兔抗人IgG抗血清。

一种制备兔抗人IgG抗体的简易方法

目前，制备兔抗人ＩｇＧ的方法很多，但没有一个统一的具体方案，难以制备出理想的高效价抗体。我们根据抗体产生的基本原理，参照有关文献，探索出一种能得到高效价抗体的简易的方法，介绍如下：材料和方法１抗原制备参照文献［１、２］进行。选取多份健康人混合血清，新...

酶联免疫双抗体夹心法检测牛初乳素中免疫球蛋白IgG

〔目的〕建立检测牛初乳素为原料的保健食品中免疫球蛋白IgG的常用酶联免疫双抗体夹心法。〔方法〕分离纯化小牛血清中IgG,以牛IgG免疫新西兰兔,获得抗牛IgG的血清,分离纯化,制备兔抗牛IgG。〔结果〕1000ng/孔兔抗牛IgG饮被酶联板,3倍比稀释牛IgG,夹心法检测。〔结果〕在牛IgG0.031mg/ml-2.50mg/ml范围,浓度与吸光度值线性相关,方程为:y=0.358+0.767x,相关系数为r=0.995,当添加50mmIgG时,回收率为88.4％,变异系数为6.1％。〔结论〕该方法具有特异性强、快速、灵敏和分析成本低等特点。

酶标兔抗鸡IgG的制备

无菌采健康鸡心脏血 ,辛酸—硫酸铵法提取血清IgG ,SephadexG2 5柱层析 ,SDS -PAGE电泳检测IgG纯度 ,分光光度计测定含量 ,透析袋浓缩。与福氏完全佐剂和不完全佐剂乳化后 ,免疫 4只雄性健康家兔 ,1 0d心脏采血。用同样方法纯化兔IgG。过碘酸钠氧化法标记辣根过氧物酶 ,即得酶标兔抗鸡IgG。

猫血清IgG的纯化及酶标兔抗猫二抗的制备

采用辛酸-硫酸铵法和Sephadex G-150分子筛层析法纯化猫血清IgG,SDS-PAGE电泳检测;用纯化的IgG免疫新西兰兔,制备兔抗猫IgG抗血清,并用上述方法提纯兔抗猫IgG,改良过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶,即获得兔抗猫IgG的酶标抗体。

异硫氰酸荧光素标记抗体的固体基质室温磷光性质研究

研究了异硫氰酸荧光素 (FITC)标记的羊抗人抗体 (GAHAb FITC)和兔抗羊抗体 (RAGAb FITC) ,及其以三种免疫方式与人免疫球蛋白 (IgG)反应所得免疫复合物在多种固体薄膜基质上发射室温磷光 (RTP)的适宜条件及其光谱、强度和寿命等性质。研究发现 ,标记抗体及其免疫复合物保留了FITC优良的固体基质室温磷光性质 ,λ(max)ex λ(max)em =5 2 5 6 5 0nm ,其RTP强度与其浓度线性相关 ,并有很高的灵敏度。更为重要的是 ,免疫反应及其RTP检测能结合于同一基质 ,方便地相继完成。在聚酰胺膜 (PM )上 ,以Pb(Ac) 2 为重原子微扰剂 ,稀释比为 1∶10 (φ)的GAHAb FITC ,RAGAb FITC及其与人IgG形成的免疫复合物均能发射较强的RTP信号并有较长的RTP寿命。本结果为建立相应的固体基质室温磷光免疫分析 (SS RTP IA)新方法奠定了相应的实验基础。

Fe_3O_4/P(AA-MMA-GMA)磁性复合微球的制备及其偶联抗体的性能

采用新型的无皂乳液聚合法制备磁性复合微球,即以丙烯酸(AA)、甲基丙烯酸甲酯(MMA)和甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)为单体,1,1-二苯基乙烯为自由基控制剂,无皂乳液聚合制备了一种磁性复合微球Fe3O4/P(AA-MMA-GMA)。以所制备的Fe3O4/P(AA-MMA-GMA)微球为载体,通过共价偶联山羊抗兔IgG抗体,得到了一种免疫磁性复合微球。研究表明,Fe3O4/P(AA-MMA-GMA)微球表面带有环氧基,粒径为626nm,具有超顺磁性。0.5mgFe3O4/P(AA-MMA-GMA)微球与200μg山羊抗兔IgG抗体在pH=7.4的磷酸盐缓冲液中于25℃反应16h,可得到一种免疫磁性复合微球,其山羊抗兔IgG的偶联量为124μg,且该免疫磁性复合微球可特异性结合兔抗肌动蛋白α。

鸽毛滴虫感染Dot-ELISA检测方法的建立

为了制备兔抗鸽IgG抗体-HRP,建立斑点酶联免疫吸附试验定性检测鸽毛滴虫抗原的检测方法,将纯化的鸽IgG加入佐剂免疫兔子,获取纯化的兔抗鸽IgG抗体;采用简易过碘酸钠法标记兔抗鸽IgG,获取兔抗鸽IgG抗体-HRP;同时将鸽毛滴虫用超声波粉碎加入佐剂后多次免疫健康鸽获取鸽抗鸽毛滴虫高免血清(一抗);然后在2×106个/mL的鸽毛滴虫抗原量下,用不同浓度的一抗抗体、兔抗鸽IgG抗体-HRP进行试验;并对70个临床样品进行检测。结果显示,在2×106个/mL的鸽毛滴虫抗原量下,一抗与兔抗鸽IgG-HRP最佳工作浓度分别为1∶100和1∶500;70个样品中,48个镜检为阳性的样品用Dot-ELISA检测有44个呈阳性,阳性符合率为91.7%;22个镜检为阴性的样品用Dot-ELISA检测有12个呈阴性,阴性符合率为54.5%;Dot-ELISA检测与镜检结果的总符合率为80%。结果表明,本试验成功地建立了鸽毛滴虫感染的Dot-ELISA检测方法。

两种病理类型肾病患者尿IgG对人肾小管上皮细胞表达巨噬细胞移动抑制因子的影响

目的分离纯化表现为肾病综合征(NS)的微小病变型(MCD)及膜性肾病(MN)患者尿IgG,比较它们对人近端小管上皮细胞(HK-2)表达巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的影响。方法采用硫酸铵沉淀、蛋白G亲和层析纯化尿中IgG,并经SDS-PAGE、Western印迹分析鉴定。用不同浓度(0、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0mg/ml)的上述两种患者的尿IgG分别刺激HK-2细胞6h,应用RT-PCR检测细胞表达。MIFmRNA的变化:应用Western印迹检测细胞中MIF的蛋白水平。结果纯化的尿IgG经SDS—PAGE分析显示其分解为4个片段,以兔抗人IgG抗体进行免疫印迹鉴定,证实这些蛋白条带均为IgG成分。两种不同病理类型NS患者的尿IgG均可上调HK-2细胞MIF的基因及蛋白表达,并呈剂量依赖性。MN患者的尿IgG0.1mg/ml即可明显上调HK-2细胞.MIFmRNA和蛋白表达(P<0.01);而MCD患者的尿IgG需达到2.5mg/ml才具有显著上调效应。结论呈NS的MCD和MN患者尿IgG可上调HK-2细胞表达MIF。MN患者尿IgG的作用强于MCD患者,提示这两种不同病理类型患者尿IgG可能存在结构或功能上的差异。

组织工程化小口径血管在体移植的研究

我们通过体外构建、体内培养的方法构建组织工程化血管，然后植入动物的股动脉，探讨利用小口径组织工程化血管进行血管移植的可能性。一、材料和方法1．材料：血管内皮细胞生长因子（VEGF）、全转维甲酸（AT—RA）、双丁酰环磷酸腺苷（db—cAMP）、细胞外基质凝胶（ECMgel，美国Sigma公司）；兔抗人八因子相关抗原（vWF）多克隆抗体、兔抗人B肌动蛋白（B—actin）单克隆抗体、异氢酸荧光素（FITC）标记羊抗兔IgG、鼠抗Brdu抗体、FITC标记羊抗鼠IgG（武汉博士德生物工程有限公司）；

梅花鹿结核病间接ELISA方法的建立

为了建立鹿结核病的快速检测方法,试验采用亲和层析方法纯化梅花鹿血清IgG,并免疫兔,制备兔抗梅花鹿IgG抗体,辣根过氧化物酶(HRP)进行标记,通过ELISA和Western-blot对HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体进行鉴定。同时合成结核分枝杆菌38 ku基因,并与pET-22b(+)质粒连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,诱导表达和纯化38 ku蛋白,以38 ku蛋白作为包被抗原,以HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体作为二抗,建立间接ELISA方法。利用建立的间接ELISA方法对结核菌素皮肤试验检出的20份阴性血清和10份阳性血清进行验证。结果表明:对梅花鹿血清IgG进行纯化,得到大小分别约为50 ku和25 ku的蛋白质;制备的HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体可特异性识别梅花鹿血清IgG,在抗体浓度稀释比例为1∶20000时仍有很好的结合效果;38 ku蛋白作为抗原的最佳包被浓度为1μg/mL,被检梅花鹿血清的最佳稀释比例为1∶100,HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体的最佳稀释比例为1∶10000;间接ELISA方法能够准确区分结核菌素皮肤试验确定的阳性和阴性梅花鹿血清。说明试验建立的间接ELISA方法能够作为鹿结核病血清学快速检测的有效方法,弥补了传统方法的不足。