兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌复合PCR方法的建立及临床应用

根据Gen Bank中多杀性巴氏杆菌ATP合成酶基因(atp B)的保守序列设计特异性引物,建立巴氏杆菌PCR检测方法,并与已建立的支气管败血波氏杆菌PCR检测方法进行合并,经反应条件的优化,成功建立多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌复合PCR诊断方法。该方法检出的最小多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌菌数分别为40 CFU和4 CFU;对兔源产气荚膜梭菌、大肠杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、猪鼻支原体、链球菌的检测结果均为阴性,说明该方法具有良好的特异性。用该方法对中国4个省份采集的临床鼻拭子样本共712份进行检测,结果显示,多杀性巴氏杆菌阳性率为25.56%,支气管败血波氏杆菌阳性率为34.55%,双阳性率为13.20%。该复合PCR方法能快速、敏感地从家兔鼻拭子样品中检出多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌,为临床疾病检测和流行病学调查提供了技术保障。

兔支气管败血波氏杆菌的分离与鉴定

应用16S rHNA基因测序法对兔支气管败血波氏杆菌标准株和分离的5株波氏杆菌进行了16S rRNA基因序列分析.结果表明,5株分离菌与标准株同源性在99.4%～100%之间.后经Blast分析各分离株与已发表的32株波氏杆菌同源性均在98%以上.进一步的生化试验鉴定表明标准株与分离菌株生化反应结果均符合兔支气管败血波氏杆菌生化反应特征.综合各种试验结果表明5株分离菌株均为兔支气管败血波氏杆菌.

应用16S rRNA基因测序法鉴定兔支气管败血波氏杆菌的研究

应用16S rRNA基因测序法对兔支气管败血波氏杆菌Bb-1株进行了16S rRNA基因序列分析。结果表明,能够扩增出与预期结果相符合的片断。经Blastn比较,分离菌与兔支气管败血波氏杆菌RB50株(BX640449)同源性为99.8%。进一步的生化实验鉴定表明,Bb-1株生化反应结果符合兔支气管败血波氏杆菌生化反应特征。综合各种实验结果表明,分离菌Bb-1株为兔支气管败血波氏杆菌。

安徽省兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及PCR诊断方法的建立

目的:从皖北多个大型兔场无菌采集发病兔肺脏进行兔支气管败血波氏杆菌(Bb)分离鉴定,并建立PCR诊断方法,为养兔场及时了解Bb的流行状况及本病的防控提供依据。方法:用5%绵羊血改良的B-G培养板对无菌采集的兔病变肺脏病料进行细菌培养,对分离菌株的形态、血清、生化特性等进行研究,并利用16S rRNA-PCR扩增技术加以验证;针对Bb表面特有的丝状血凝素(FHA)蛋白基因序列设计1对引物,建立检测Bb的PCR方法,并对反应条件进行优化。结果:本研究所得的Bb菌株在形态学、血清学、生化特性与标准Bb菌株一致,16S rRNA-PCR鉴定方法在1492 bp处扩增出目的条带,基因序列与Bb16S rRNA(E06073)同源性达到99.1%;新建的PCR方法25 mmol/L MgCl_(2)1.0μL、退火温度为58℃、30个循环),可扩增出特异醒目的目的条带(约730 bp);特异性试验显示该方法对兔巴氏杆菌、兔魏氏梭菌、金黄色葡萄球菌和兔大肠埃希氏菌检测均为阴性,敏感性试验显示该方法在Bb菌液浓度仅为7.2×10^(3)CFU/mL时仍能获得目的条带。结论:本研究从兔肺脏病料中分离的菌株经鉴定为Bb,并建立了检测该细菌的PCR方法,可用于临床鉴别和诊断兔支气管败血波氏杆菌病。

兔支气管败血波氏杆菌病的实验室诊断

本试验从新西兰病兔肝脏中分离出一株优势菌,根据其形态学特性、培养特性、生化特性等,诊断为兔支气管败血波氏杆菌感染。

兔支气管败血波氏杆菌病的诊断与治疗

兔支气管败血波氏杆菌病是家兔常见的慢性呼吸道传染病,其特征是慢性鼻炎、咽炎和支气管肺炎,成年兔多为散发性支气管肺炎型,仔兔与青年兔多为急性支气管败血型。

三种材料缝合气管吻合口愈合中的生物力学特征与气管重塑

背景:研究表明气管及支气管吻合材料的选用对吻合口愈合质量可产生不同影响。目的:以3种缝合材料建立兔气管重建模型,分析气管吻合口愈合过程中生物力学特征与气管重塑的关系。方法:将18只新西兰大白兔随机分为3组,分别以丝线、涤纶线和人工合成可吸收缝线建立气管重建模型。结果与结论:①吻合口处气管抗拉强度:术后2周,3组气管在一定外力下于接近吻合口处断裂,缝线本身并未断裂;术后4,8周,吻合气管在远离吻合口部位破裂,均未从吻合口处断裂。②吻合口处气管顶破强度:术后2,4,8周,3组均在气管膜部破裂。③吻合口Ⅰ型胶原蛋白水平:术后2周涤纶线组低于较其他两组(P<0.05),术后4,8周3组间差异无显著性意义。表明不论使用何种缝线均不影响气管吻合口的稳定性,但不同缝线在不同时期引起的气管狭窄有一定差别。

兔巴氏杆菌-波氏杆菌二联灭活疫苗的基础菌种研究

通过毒力测定、最小致死剂量测定,用交互免疫保护试验方法,从多株兔多杀性巴氏杆菌(Pm)和兔支气管败血波氏杆菌(Bb)中筛选出制苗用菌种各1株,并对这2株菌种的生物学特性、传代稳定性及保存期进行了研究,从而为研制安全高效的Pm-Bb二联疫苗奠定了基础。

兔巴氏杆菌-波氏杆菌二联蜂胶疫苗的研制及安全、效力试验

本试验以免疫原性良好的兔多杀性巴氏杆菌Pm90株以及兔支气管败血波氏杆菌Bb82株作为菌种,选择蜂胶乙醇提取液的水溶物作为佐剂,研制兔巴氏杆菌-波氏杆菌二联蜂胶灭活苗,并进行了该疫苗的安全、效力试验。实验室生产的4批疫苗对巴氏杆菌和波氏杆菌的攻毒保护率均在90%以上。

快速检测兔支气管败血波氏杆菌环介导等温扩增(LAMP)方法的建立及应用

利用Primer ExplorerV4软件,针对兔波氏杆菌16SrRNA基因设计4条LAMP引物,优化反应条件,检测特异性、敏感性并对临床样品进行检测。结果显示,LAMP反应在62℃恒温扩增1h即可完成,操作简便,不需要PCR仪等复杂仪器,结果可经电泳检测及肉眼观察;具有良好的特异性;敏感性为普通PCR的100倍,最低可检测到1.65×10-6 mg/L的细菌基因组DNA。用建立LAMP检测方法对32份疑似兔支气管败血波氏杆菌(Bb)样品检测呈阳性,与PCR检测结果相符。该方法的建立为Bb的临床快速检测提供了新的思路。

槐花多糖对支气管败血波氏杆菌的免疫增强作用

在兔支气管败血波氏杆菌灭活疫苗中加入不同剂量的槐花多糖,制备兔波氏杆菌槐花多糖灭活苗。选取体质量1kg左右的健康獭兔72只,随机分为6组,其中Ⅰ～Ⅲ组为槐花多糖疫苗组(槐花多糖含量分别为60,40,20g/L),Ⅳ组为兔波氏杆菌蜂胶疫苗对照组,Ⅴ组为无多糖的兔波氏杆菌疫苗对照组,Ⅵ为空白对照组,各组分别于免疫后0,3,7,14,21,28,35,42d采血,用平板凝集试验检测血清抗体效价,全自动血细胞分析仪测定淋巴细胞比率,试剂盒检测血清中IL-2的含量。结果显示,Ⅰ～Ⅳ组各指标均高于Ⅴ组,其中Ⅰ、Ⅳ组显著高于Ⅴ组(P<0.05);Ⅱ组与Ⅲ组总体差异不显著(P>0.05);Ⅳ组总体水平略低于Ⅰ组。由此表明,槐花多糖能提高獭兔对支气管败血波氏杆菌的免疫作用,60g/L剂量的效果最佳,这为开发槐花多糖作为新型免疫佐剂和免疫增强剂奠定了基础。