大黄酸兔源多克隆抗血清的制备与鉴定

目的合成大黄酸人工抗原,制备敏感性高、特异性强的大黄酸兔源多克隆抗血清。方法采用碳二亚胺法制备大黄酸人工抗原,将大黄酸分别与牛血清白蛋白和卵清蛋白相偶联。用紫外扫描法鉴定大黄酸人工抗原是否偶联成功,免疫新西兰兔,制备多抗血清,通过间接竞争ELISA测定抗血清效价,通过间接竞争ELISA鉴定抗血清的敏感性和特异性,并分别用间接竞争ELISA和HPLC检测大黄中大黄酸的含量。结果 2只新西兰兔产生的多抗血清效价在1∶64 000以上,其中,2号兔多抗血清敏感性最好,半数抑制浓度为0.09 ng/mL,且具有良好的特异性。兔抗血清测得大黄中大黄酸含量为(0.026±0.001)%,HPLC测得大黄中大黄酸含量为(0.027±0.000)%。结论本研究制备了敏感性高、特异性强的大黄酸兔源多克隆抗体血清,为建立大黄酸免疫亲和色谱分析技术和快速检测方法奠定了基础。

兔源性Ⅱ型prM多抗对Ⅰ型登革病毒无增强活性的中和作用

目的从Ⅰ型登革病毒(dengue virus,DENV)感染患者血清中分离病毒,并探究Ⅱ型登革病毒prM多抗对该病毒体外感染细胞的影响。方法用C6/36细胞分离并扩大培养Ⅰ型登革患者血清中的登革病毒,根据细胞病变收取病毒,空斑实验测定病毒滴度。免疫荧光、流式细胞术及qRT-PCR检测病毒对细胞的感染,空斑减少中和实验和抗体依赖增强感染实验测定Ⅱ型登革病毒prM抗体对病毒的中和及增强活性。结果分离扩大培养了一株Ⅰ型登革病毒,滴度达到8×10~7pfu/m L。登革病毒可以在K562细胞复制增值,ana-1细胞可以主动吞噬病毒但病毒在此细胞内不复制。0.1、1μg/m L的多抗与病毒孵育后感染BHK细胞产生的空斑数与未加入抗体的空斑数相比,差异有统计学意义(P<0.001)。另外,prM多抗并没有增加登革病毒对K562细胞的感染。结论成功扩大培养DENVⅠ毒株,体外实验结果证明兔源性prM多抗是一种无增强活性的中和型抗体。

猪caspase-1 p20多克隆抗体制备及其在猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染中的初步应用

为研究猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)在感染细胞中对半胱氨酸蛋白水解酶Ⅰ(caspase-1)的激活作用,本研究以PRRSV HuN4株感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)的cDNA为模板,构建caspase-1 p20蛋白的重组表达质粒,以表达的重组蛋白p20为抗原制备了兔抗猪p20的多克隆抗体。利用制备的多抗对PRRSV HuN4株(0.1 MOI)感染的PAM进行western blot检测,结果表明在PRRSV感染PAM 24 h后胞内caspase-1被大量诱导表达,同时caspase-1被水解激活并释放出p20。该研究结果为进一步阐明PRRSV感染细胞后引起IL-1β升高的分子机制研究奠定了基础。

伏马菌素B1兔源多克隆抗血清的制备与鉴定

目的:合成伏马菌素B1(FB1)人工抗原,制备敏感性高、特异性强的FB1兔源多克隆抗血清。方法:采用EDC法制备人工抗原,将FB1分别偶联于载体蛋白牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上。通过免疫新西兰兔制备多抗血清,间接ELISA方法测定抗血清效价,间接竞争ELISA鉴定敏感性和特异性。结果:2只新西兰兔生产的多抗血清效价在1∶1.28×105以上,其中,2号多抗血清敏感性最好,半数抑制浓度IC50为17 ng/mL,且具有良好的特异性。结论:成功制备了敏感性高、特异性强的FB1兔源多克隆抗体血清,为建立FB1免疫学快速检测方法提供了理论基础。

2,4-二氯苯氧乙酸人工抗原合成及多克隆抗体的制备

采用碳化二亚胺法,将2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)分别与牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联,得到完全免疫原2,4-D-BSA和包被原2,4-D-OVA,采用紫外扫描法判定偶联结果 ;用2,4-D-BSA免疫新西兰大耳白兔,采用间接酶联免疫吸附测定法测定多抗血清效价、阻断酶联免疫吸附测定法测定其抑制曲线。结果表明:BSA与2,4-D偶联后,波峰出现右移,且具有2,4-D特征峰,表明偶联成功;2只新西兰大耳白兔血清效价均达到了1∶5.12×105,且B号兔子多抗血清敏感性最好,半数抑制浓度IC50为47.64 ng/m L,表明成功获得了高效价、特异性好、亲和力较高的兔源抗2,4-D多克隆抗体血清,为2,4-D残留免疫学检测方法的建立奠定了良好基础。