神经生长因子对兔牙髓干细胞体外增殖、成骨分化影响的实验研究

目的:探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对兔牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)体外增殖及成骨分化的影响,为牙髓组织的损伤修复提供新线索。方法:采用酶解组织块法分离培养健康新西兰兔的DPSCs,光镜下观察其形态学及生长变化。将培养的第3代DPSCs分为3组:空白组(只有DPSCs)、实验组(DPSCs混合100μg/L NGF)和对照组(DPSCs混合矿化液)。观察实验7 d和14 d时3组的细胞形态及碱性磷酸酶活性结果,RT-qPCR检测各组Runx-2、COL-1以及OCN的基因表达水平。结果:体外培养的DPSCs生长良好,贴壁生长,大多为多角形或长梭形,呈巢式或集落生长;3组的碱性磷酸酶活性在实验14 d时均高于实验7 d时的数值,且7 d和14 d时实验组与空白组、对照组差异均有统计学意义(P<0.05);RT-qPCR结果显示培养14 d时实验组中Runx-2、COL-1和OCN基因的表达量均高于空白组(P<0.05)。结论:NGF可以提高DPSCs的增殖和成骨分化能力,两者的联合应用修复效果优于DPSCs单独应用。

转化生长因子β3促进兔牙髓干细胞成骨向分化的体外实验研究

目的:探讨转化生长因子β3(TGF-β3)体外诱导兔牙髓干细胞(rDPSCs)骨向分化的效果及其作用机制。方法:酶解组织块法分离的rDPSCs分为实验组(rDPSCs+80 ng/ml TGF-β3),对照组(rDPSCs+矿化液)和空白组(rDPSCs),免疫细胞化学染色法行COL-I、OCN, Runx-2染色;RT-qPCR检测各组ALP、COL-I、OCN、Runx-2表达水平;茜素红(ARS)染色观察矿化结节。结果:免疫细胞化学染色结果示实验组成骨蛋白表达明显强于其余2 组;RT-qPCR结果显示实验组中成骨基因的表达均高于其余2 组(P<0.05);实验组矿化结节形成数高于其余2组(P<0.05)。结论:TGF-β3能促进rDPSCs骨向分化。

兔牙髓干细胞与雪旺细胞体外间接共培养对增殖和兔牙髓干细胞成神经向分化的研究

目的:体外间接共培养兔牙髓干细胞(rabbit dental pulp stems cells,rDPSCs)与兔雪旺细胞(rabbit Schwann cells,rSCs),研究两种细胞对彼此增殖的影响以及rSCs诱导rDPSCs神经向分化的可能性。方法:通过Transwell间接共培养系统构建rSCs/rDPSCs间接共培养体系,采用MTT法检测两种细胞对彼此增殖的影响;通过免疫荧光染色和Western bolt检测S-100β和NF-H的表达,研究rSCs诱导rDPSCs神经向分化的可能性。结果:将rDPSCs与rSCs以1∶2比例间接共培养5 d时,rDPSCs能够促进rSCs的增殖(P<0.05),同时rSCs对rDPSCs的增殖也有明显的促进作用(P<0.05);在与rSCs间接共培养7 d与14 d后,rDPSCs形态与神经细胞类似,并表达S-100β和NF-H,并且14 d时两种蛋白表达更高(P<0.01)。结论:将rDPSCs与rSCs间接共培养,5 d时rDPSCs与rSCs能显著促进彼此的增殖,且rSCs能诱导rDPSCs神经向分化。

转化生长因子β3促进兔牙髓干细胞成骨向分化机制的初步研究

目的探讨转化生长因子β3(transforming growth factorβ3,TGF-β3)体外联合兔牙髓干细胞(rabbit dental pulp stem cells,r DPSCs)诱导其成骨向分化的作用机制。方法酶解组织块法分离获得r DPSCs;将r DPSCs分为实验组(r DPSCs+80μg/L TGF-β3)、对照组(r DPSCs+矿化液)和空白组(r DPSCs),3组细胞分别培养7、14 d后行ALP活性定量检测; RT-qPCR检测COL-1A1、Runx-2、OPN、BSP和Smad4基因的表达; Western blot法检测COL-1A1和Runx-2蛋白的表达情况;茜素红染色观察矿化结节形成情况。结果成功分离获得r DPSCs;实验组ALP含量明显高于对照组和空白组(P<0.05); COL-1A1、Runx-2、OPN、BSP、Smad4基因的表达均高于空白组(P<0.05); COL-1A1、Smad4基因的表达高于对照组(P<0.05); Western blot结果示实验组COL-1A1和Runx-2蛋白的表达均强于其余两组(P<0.05);实验组矿化结节较其余两组明显。结论 TGF-β3体外促进r DPSCs成骨向分化; TGF-β3促进r DPSCs成骨向分化可能通过激活Smad通路来实现。

牙髓干细胞来源外泌体修复兔颞下颌关节软骨损伤后软骨组织修复的实验研究

目的:研究牙髓干细胞来源外泌体在兔体内对颞下颌关节软骨损伤的修复能力。方法:由兔前牙及磨牙获取牙髓干细胞,差速离心法分离外泌体并利用透射电子显微镜、纳米颗粒追踪分析,免疫印迹法鉴定。将获得的外泌体种植到兔的损伤软骨组织中,实验组为外泌体组,阳性对照组为透明质酸钠组,对照组为常规手术组,在4、8、12周处死,HE染色观察软骨组织再生情况。结果:成功提取兔牙髓干细胞并提取鉴定外泌体,将外泌体种植到兔损伤软骨组织中,发现其可有效促进损伤软骨组织的修复。结论:牙髓干细胞的外泌体能够有效促进兔颞下颌关节软骨损伤后软骨组织修复能力,为外泌体对组织再生的调控提供依据。