HPLC法测定兔眼玻璃体中丝裂霉素C浓度的不确定度评定

目的:评定采用高效液相色谱(HPLC)法测定兔眼玻璃体中丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)浓度的不确定度。方法:对HPLC法测定兔眼玻璃体中MMC浓度的全过程进行分析,对于分析过程中称量、溶液配制、分析仪器以及标准曲线拟和等影响因素引起的不确定度进行了逐层分析,用A类评定程序评价了分析过程中随机效应引起的不确定度,用B类评定程序评价了分析过程的其他因素引起的不确定度,最后根据各分量计算出合成不确定度并进行了扩展。结果:置信概率P为95%时,玻璃体低(0.1μg·mL-1)、中(0.8μg·mL-1)、高(2.5μg·mL-1)浓度MMC的扩展不确定度分别为0.003μg·mL-1、0.02μg·mL-1、0.06μg·mL-1。结论:本方法适用于HPLC法测定兔眼玻璃体中MMC浓度的不确定度评定,该方法的确立对于复杂生物基质分析过程的不确定度研究具有重要意义。

液相色谱串联质谱法测定兔眼玻璃体内二十碳五烯酸的浓度

目的:建立适用于兔眼玻璃体内二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)浓度测定的LC-MS/MS方法,为研究EPA在玻璃体内的药动学提供技术支持。方法:应用Q Trap 4500液质联用仪,采用电喷雾电离源,在负离子方式选择反应监测(MRM)模式下测定兔眼玻璃体内注射EPA后不同时间的药物浓度。50μL玻璃体样品经乙腈沉淀蛋白并浓缩处理后用于定量分析。色谱分离采用XDB C_(18)柱(50 mm×4.6 mm,1.8μm),流动相为甲醇-水-甲酸(90∶10∶0.1,V/V/V),流速:1.00mL·min-1;进样量:2μL。监测的离子反应分别为m/z301.0→m/z257.3(EPA)和m/z526.0→m/z401.0(内标,格列喹酮)。每个样品的分析时间为3 min。结果:玻璃体内EPA在0.02~5.00mg·L^(-1)范围内线性关系良好,最低定量限为0.02mg·L^(-1);提取回收率大于90%;日内和日间精密度(RSD)均小于11.6%;基质效应可忽略;EPA玻璃体样品室温放置6 h、-20℃放置3 d、-70℃一次冻融稳定,处理后样品室温放置20 h稳定。兔眼内注射EPA后的主要药动学参数如下:Cmax为1.05 mg·L^(-1),tmax为0.5 h,t_(1/2)为4.72 h,AUC(0-t)为3.614 mg·L^(-1)·h,AUC(0-∞)为4.296 mg·L^(-1)·h。结论:所建立的EPA浓度测定的LC-MS/MS方法灵敏、准确、简便、稳定,适用于EPA在兔眼内的药动学研究。