益气养阴合剂对兔睾丸切除术后血清β-淀粉样蛋白的影响

目的:探讨中药、雄激素对β-淀粉样蛋白(Aβ)的作用。方法:选择45只3年老龄健康雄性兔,实验组30只切除双侧睾丸,其中15只术后第1天服益气养阴合剂浓缩液(黄芪、何首乌、枸杞子、淫羊藿),2次/d,持续半年;对照组15只行假手术。分时间段对实验服药组、实验未服药组、对照组取外周静脉血,放射免疫方法监测Aβ水平的变化。结果:实验组术后Aβ上升明显,术后5周达最高峰,以后逐渐下降;实验服药组Aβ下降明显,术后半年较术前稍高;实验未服药组Aβ下降慢,术后半年仍较术前明显为高。假手术对Aβ无影响。结论:雄激素对Aβ生成或降解有影响,可能是通过向雌激素转化减少而起作用;益气养阴合剂对血清Aβ降低有作用。

基于mt DNA cyt b基因兔睾丸鉴定方法的建立及检测试剂盒的研制

目的:建立兔睾丸DNA指纹鉴定方法,研发出兔睾丸DNA检测试剂盒。方法:以穴兔线粒体DNA(mt DNA)细胞色素b(cyt b)基因作为靶基因,设计兔睾丸特异性引物,利用现代DNA指纹技术,研制兔睾丸DNA提取及检测试剂,并对试剂的特异性、重复性及稳定性进行考察;应用分子克隆及测序技术,克隆兔睾丸DNA检测的标准品;进而建立兔睾丸DNA指纹鉴定方法,制定质量标准,开发出兔睾丸DNA检测试剂盒。结果:自主研发的试剂提取的兔睾丸DNA结构完整性较好,DNA浓度与纯度均较高;59℃时引物的特异性最强;兔睾丸正品均在326 bp处出现1条特异性扩增条带,而阴性及空白对照均未出现扩增条带;克隆测序后的兔睾丸DNA序列与穴兔mt DNA特异指纹区段同源性100%。结论:本研究建立的兔睾丸DNA指纹鉴定方法特异、准确、可靠,研发的DNA检测试剂盒操作简便,结果稳定,适于普及推广使用。

病毒保护剂在猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞苗中的研究

将病毒保护剂运用于猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞疫苗生产中,结果表明:20%的病毒保护剂对产毒有轻微损伤作用,10%的病毒保护剂要略好于对照组,通过蛋白浓度测定证实提高22%。试验组和对照组的反复冻融试验表明对照组冻融六次即为临界点,病毒保护剂组达10次。冷冻保存期试验表明对照组保存三个月合格,而病毒保护剂组可达五个月。37℃耐热试验表明对照组在8 h内合格,病毒保护剂组达10 h。细胞毒电镜观察试验及主要保护性抗原基因E2、E0测序比对结果表明,病毒保护剂不改变病毒粒子形态,且不产生基因突变。抗体水平和免疫攻毒试验结果表明,病毒保护剂能刺激机体早期抗体的产生,且免疫保护力坚强。

不同饲养层对兔原始生殖细胞传代培养的影响

为了探讨不同饲养层细胞对兔原始生殖细胞体外培养与传代的影响,从14-18 d的兔胎儿生殖嵴中分离得到原始生殖细胞（PGCs）,分别培养在小鼠胎儿成纤维细胞（MEF）、兔胎儿成纤维细胞（REF）饲养层上或与同源兔胎儿生殖脊成纤维细胞（HEFgr）、兔睾丸支持细胞（RSC）共培养。观察兔类EG集落的生长状态,并检测其碱性磷酸酶活性。结果表明：4种方法均能分离克隆出兔类EG集落,碱性磷酸酶染色均呈阳性,但是采用共培养的模式分离得到的集落明显多于传统的饲养层模式。与RSCs共培养得到的EG集落数最多,保持未分化的时间最长,并传了8代,与HEFgr共培养得到的EG集落数与RSCs相比差异不明显,但最高只传了6代。培养在MEF上的兔类EG也能较好的保持未分化状态,传了4代。培养在REF上的兔类EG集落数目较少,出现分化时间较早,只传了3代。因此可以用与RSCs或HEFgr共培养的方法传代培养兔PGCs。

精子介导转基因动物的制备

采用直接注射的方法,将脂质体包裹的含人乳铁蛋白基因的重组质粒pLNCXHLF注入兔睾丸组织和羊输精管中,一个月后分别与正常雌兔及正常的母羊交配。所产仔兔均为活体,经PCR和Southern检测,转基因仔兔阳性率平均为35%(11/31);羔羊经引物F1/R1系统PCR检测阳性率为33.3%(4/12),F2/R2系统PCR检测阳性率为25%(3/12)。将流产羔羊组织解剖后提取舌、肺、肝脏、肌肉、皮肤、脑、生殖腺、脾脏、小肠、心脏、肾脏共11种组织的总DNA进行PCR检测,发现:F1/R1和F2/R2系统PCR检测出阳性信号存在于不同组织;F2/R2PCR系统检测阳性信号较F1/R1PCR系统少;而且各种组织的外源DNA存在的拷贝数不等,造成阳性信号的强弱程度不同。结果表明:1)脂质体包裹外源基因转染精子的方法,可将外源基因导入受精卵,并得到了较高的转基因阳性率;2)精子携带外源DNA的整合过程是随机的,在受精过程和胚胎早期分化过程中可能发生了片段丢失、不完全整合或游离于基因组存在而产生嵌合体。本文的研究结果证明了该方法是一种简捷有效的新途径,为进一步深入探讨精子介导转基因动物制备可行性奠定了基础,给精子载体法制备转基因哺乳动物研究提供了有价值的参考。

新生儿先天性梅毒检测与预防研究进展

梅毒是目前临床常见的性传播疾病之一,是由梅毒螺旋体（TP）感染引起的慢性、系统性传播疾病。该病的传染性强,危害极大,可侵犯全身各组织器官。早期梅毒主要侵犯皮肤黏膜,晚期可侵犯心血管、神经等系统,造成心血管梅毒和神经性梅毒,严重危害患者身心健康。

猪瘟细胞苗与犊牛血清中BVD/MD抗体的检测

猪瘟兔化牛睾丸细胞苗在生产中,常出现疫苗毒价不达标的问题。其主要的原因是在生产中使用了含BVD/MD抗体的犊牛血清。试验过程中,采用合格的疫苗与标准的BVD/MD抗血清中和,然后再加入标准BVD/MDV,接种BT细胞,结果出现CPE。证实了疫苗中的HCV与BVD/MD抗体发生了结合。故生产前对血清中BVD/MD抗体的检测是不可忽视的。