兔胸腺HMGN2的分离纯化鉴定

目的:分离纯化鉴定兔高迁移率非组蛋白N2(High mobility group chromosomal protein N2,HMGN2)。方法:利用液氮研磨和5%高氯酸从新鲜兔胸腺组织获得酸溶性萃取物,经反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离得到HMGN2,经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western-blotting对HMGN2进行分子量测定和特异性鉴定。并利用琼脂糖弥散抑菌实验对其杀菌活性进行鉴定。结果:利用上述方法分离纯化出高纯度的兔HMGN2。对大肠埃希菌临床分离株54080、大肠埃希菌ATCC25922有明显杀菌活性。结论:建立简单分离高纯度的HMGN2的方法。

兔胸腺组织传感器酶促反应机理探讨

作者利用组织化学与电位测定方法,对兔胸腺组织结构与组织电极性能进行观察,结果表明:粗略研磨并经戊二醛固定的兔胸腺组织,细胞结构仍较完整,细胞膜脂质双分子屏障通道较自然细胞有所扩大,利用该组织制备的敏感膜电极性能优于自然状态的组织电极。并提出了“固定化粗略研磨组织膜上的活性酶系包埋于细胞框架中”的新设想。

兔抗人胸腺/淋巴细胞免疫球蛋白药代动力学检测方法的建立

目的建立兔抗人胸腺/淋巴细胞免疫球蛋白(rabbit anti-human thymus/lymphocyte immunoglobulin, r-ATG)药代动力学检测方法并验证, 用于检测临床用药后患者血清中r-ATG的浓度。方法采用鼠抗兔IgG包被酶标板, 辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG作为二抗, 建立双抗体夹心ELISA检测人血清中r-ATG的含量, 并对该方法进行线性范围、平行性、重复性、中间精密度、准确性、专属性及不同时间参考品标准曲线浓度的回收率稳定性验证。用建立的方法对5例患者的临床血清样本(血样)进行检测并进行药代动力学分析。结果以0.25 μg/ml为起始浓度, 稀释倍数在21~29之间的参考品浓度与吸光度值呈S曲线, 决定系数(R^(2))>0.99, 回收率在90%~110%;参考品与3份血样的线性方程斜率的变异系数(coefficient of variation, CV)<10%, R^(2)>0.99, R^(2)的CV<5%, 平行性较好;重复性和中间精密度CV<15%, 回收率均在90%~110%;准确性验证结果平均回收率均在80%~120%;注射药物的患者血清与健康人血清以及未注射药物的患者血清之间的差异有统计学意义, t值分别为32.607、21.949, P<0.01;参考品在2~8 ℃放置16个月时标准曲线各浓度的回收率均值均在90%~110%, 且各浓度不同时间点回收率相对标准偏差<15%;5例患者均在给药第5天血药浓度达到最高值, 平均半衰期为(6.5±5.3) d。结论建立的方法具有良好的稀释线性和样本间的平行性、重复性、中间精密度、准确性、专属性, 且参考品标准曲线各浓度在不同时间点的回收率稳定性良好, 可以用于r-ATG临床用药后血清浓度的检测。

Jo-1抗原的制备及其抗体的测定

用兔胸腺丙酮粉(Pel Freeze),通过离心和硫酸铵层析处理提取出一种能与多发性肌炎(PM)、皮肌炎(DM)患者血清中的抗体起反应的Jo 1抗原。用此抗原及抗Jo 1抗体的标准血清与正常人和各种自身免疫病患者进行免疫双扩散法检测,结果在多发性肌炎、皮肌炎患者血清中出现抗Jo 1抗体的沉淀线,并与标准血清完全吻合。说明抗Jo 1抗体的特异性很强。实验中出现其他非抗Jo 1抗体的沉淀线,经鉴定系由于此抗原中尚含Sm、RNP、SSA、SSB抗原所致。

Jo-1抗原的提取和纯化

目的改进从兔胸腺中纯化能用于斑点印迹法检测抗-Jo-1抗体、Jo-1抗原的方法。方法用PBS提取兔胸腺匀浆中的ENA,经丙酮沉淀上清中的总蛋白制成兔胸腺丙酮粉,再经以特异性抗-Jo-1抗血清中的IgG为配体制备的亲和色谱柱对Jo-1抗原纯化,得到高比活的制品。结果100g兔胸腺可制得5～7g丙酮粉,其中的蛋白质含量为19%～24%。经亲和色谱分离的洗脱峰组分约可富集Jo-1抗原1900倍,抗原活性回收率为2.5%,并只对抗-Jo-1抗血清有特异性反应。虽然在SDS-PAGE上洗脱峰组分并非单一条带,但免疫印迹只发现50ku处有阳性条带。在含有MgCl2的水溶液中,高纯度的Jo-1抗原能长时间保持高活性。结论亲和色谱法可从兔胸腺中纯化出满足斑点印迹法检测抗-Jo-1抗体要求的抗原,并有可能成为大量获取高纯度Jo-1抗原的方法。

肾移植患者应用即复宁期间会导致降钙素原显著升高

探讨肾移植患者应用即复宁(ATG)期间会导致降钙素原显著升高。方法:收集2019年1月至2020年12月来自中山大学附属第五医院(简称中大五院)泌尿外科肾脏移植病区收治的患者148人,在我院接受完成肾移植手术患者42人,其中使用即复宁(ATG)患者35人,为ATG组;未使用即复宁患者7人,为非ATG组。回顾分析42例肾移植患者术后PCT检测结果。结果:应用即复宁(ATG)治疗组PCT明显高于非ATG组,差异有统计学意义(P值<0.0001)。结论:肾移植患者应用即复宁(ATG)期间会导致降钙素原显著升高。对于使用即复宁的肾移植患者而言,用PCT预测患者术后感染情况的价值并不明确。