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兔自身免疫性干眼模型的建立及泪腺炎症因子研究 被引量:8
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作者 杨丽媛 边领斋 +3 位作者 李雪 粘红 东莉洁 魏瑞华 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2015年第9期810-815,共6页
目的通过静脉回输自体激活的淋巴细胞建立稳定的兔自身免疫性干眼模型,并分析干眼的泪腺炎性因子,探究干眼的泪腺免疫反应。方法通过体外分离、培养兔泪腺上皮细胞和自体外周血淋巴细胞,建立二者的共培养体系。将体外激活的自体外周血... 目的通过静脉回输自体激活的淋巴细胞建立稳定的兔自身免疫性干眼模型,并分析干眼的泪腺炎性因子,探究干眼的泪腺免疫反应。方法通过体外分离、培养兔泪腺上皮细胞和自体外周血淋巴细胞,建立二者的共培养体系。将体外激活的自体外周血淋巴细胞通过耳缘静脉注射的方法诱发自身免疫性泪腺炎。对干眼临床指标及泪腺细胞因子表达进行检测。结果与正常对照组相比,干眼模型组泪液分泌显著减少(t=115.6,P<0.05),泪膜破裂时间缩短(t=92.5,P<0.05)。荧光素钠染色显示角膜弥漫性点状着色,正常对照组基本无着色。泪腺组织HE染色显示淋巴细胞浸润,正常对照组很少。RT-PCR结果显示,干眼模型组泪腺中炎性因子IFN-γ、IL-6、IL-17 mRNA相对表达量显著升高(t=26.2、18.7、8.4;均为P<0.05),抑炎因子IL-10、TGF-βmRNA相对表达量显著降低(t=22.1、14.2;均为P<0.05)。结论经兔泪腺上皮细胞激活的自体外周血淋巴细胞静脉回输后,成功诱发干燥综合征样自身免疫泪腺炎,建立了稳定的兔自身免疫性干眼模型。泪腺组织中细胞因子IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β、IL-10参与泪腺内炎症反应的发生和发展。 展开更多
关键词 自身免疫性泪腺炎 兔自身免疫性干眼模型 细胞因子 IL-10
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间充质干细胞对兔自身免疫性干眼模型病理改变及细胞因子表达的影响 被引量:2
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作者 王希莲 路晓晓 +3 位作者 杨丽媛 粘红 杨丹 魏瑞华 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2017年第8期714-718,共5页
目的建立兔自身免疫性干眼模型,观察间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)治疗后兔自身免疫性干眼的组织病理学变化及泪腺组织中细胞因子表达的变化。方法取健康成年雌性新西兰白兔24只24眼,采用随机数学表法将兔分为正常对照组... 目的建立兔自身免疫性干眼模型,观察间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)治疗后兔自身免疫性干眼的组织病理学变化及泪腺组织中细胞因子表达的变化。方法取健康成年雌性新西兰白兔24只24眼,采用随机数学表法将兔分为正常对照组、干眼模型组和MSCs治疗组,每组各8只8眼。MSCs治疗6周后,观察兔眼组织病理学改变,实时荧光定量PCR检测泪腺组织中Th1、Th17细胞分化相关细胞因子mRNA相对表达量。流式细胞仪检测干眼模型组和MSCs治疗组兔泪腺组织和脾脏组织中调节性T细胞(CD4+Foxp3+细胞)占淋巴细胞的比例。结果 MSCs治疗6周后,取各组兔泪腺并行HE染色显示:正常对照组未见或仅见少量淋巴细胞浸润;干眼模型组泪腺内部分腺体细胞出现萎缩,腺管周围和小血管周围可见散在分布的淋巴细胞汇集区;与干眼模型组相比,MSCs治疗组泪腺内淋巴细胞浸润减轻,腺泡细胞形态较好。与干眼模型组比较,MSCs治疗组结膜组织中淋巴细胞浸润聚集显著减轻,上皮结构完整,变性和萎缩细胞较少见。MSCs治疗组泪腺组织中Th1特征性细胞因子IFN-γ以及转录因子T-bet mRNA表达水平较干眼模型组明显下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05);Th17细胞分化相关细胞因子IL-17表达水平有下降趋势,但两组差异无统计学意义(P>0.05);其转录因子RORrt mRNA的表达水平较干眼模型组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。MSCs治疗组泪腺组织中炎症因子TNF-α表达较干眼模型组显著降低,而抑炎因子TGF-β的表达较干眼模型组显著升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。泪腺组织中干眼模型组调节性T细胞(CD4+Foxp3+细胞)占淋巴细胞的比例为10.0%,而MSCs治疗组中调节性T细胞占淋巴细胞的比例为27.8%,MSCs治疗组调节性T细胞较干眼模型组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MSCs可以减轻自身免疫性干眼的组织病理学改变,对自身免疫性干眼具有一定的免疫调节及治疗作用,其免疫调控作用可能与调节抑炎因子和促炎因子平衡有关。 展开更多
关键词 间充质细胞 自身免疫性 组织病理学 细胞因子
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人脐带间充质干细胞对兔自身免疫性干眼的疗效研究 被引量:3
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作者 王希莲 杨丽媛 +4 位作者 粘红 路晓晓 李雪 刘勋 魏瑞华 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2017年第1期19-23,共5页
目的通过建立稳定的兔自身免疫性干眼模型,观察人脐带来源的间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)对自身免疫性干眼的作用并初步探讨其机制。方法体外分离、培养hUC-MSCs并对其进行鉴定;采用静脉回输自... 目的通过建立稳定的兔自身免疫性干眼模型,观察人脐带来源的间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)对自身免疫性干眼的作用并初步探讨其机制。方法体外分离、培养hUC-MSCs并对其进行鉴定;采用静脉回输自体激活的淋巴细胞建立兔自身免疫性干眼模型,将兔分为正常对照组、干眼模型组和h UCMSCs治疗组,h UC-MSCs治疗组于回输淋巴细胞后输注1 mL 1×10~7个·mL^(-1)hUCMSCs,连续输注5 d,对照组输注等体积的PBS。三组分别在术后2周、4周、6周检测泪液分泌量、泪膜破裂时间和角膜荧光素钠染色,6周后行组织病理学观察,并检测泪腺组织中细胞因子的表达水平。结果术后2周、4周、6周h UC-MSCs治疗组较干眼模型组泪液分泌量、泪膜破裂时间显著升高(均为P<0.05);角膜荧光素钠染色着色显著减轻,组织病理学观察泪腺组织淋巴细胞浸润较干眼模型组显著减少。hUC-MSCs治疗组和干眼模型组相比,泪腺组织中炎性因子IFN-γ、IL-17表达显著降低(F=50.48、18.13;均为P<0.05),而抑炎因子IL-10、TGF-β的表达显著升高(F=31.06、21.40;均为P<0.05)。结论h UC-MSCs减轻兔自身免疫性干眼,对其发挥免疫调控作用。 展开更多
关键词 间充质细胞 自身免疫性 细胞因子 白细胞介素-10
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局部滴用阿托品建立兔干眼模型的评价 被引量:17
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作者 肖启国 刘祖国 +5 位作者 张梅 张志红 罗丽辉 姚勇 蒋爱华 林健贤 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2005年第4期340-343,共4页
目的评价滴用阿托品建立兔干眼模型的优劣。方法新西兰大白兔16只,随机选1眼滴用1%硫酸阿托品滴眼液,对侧眼作对照。用药前及用药后不同时间点对实验组及对照组行Schirmer试验、结膜角膜虎红染色、角膜荧光素染色、结膜印迹细胞检查。第... 目的评价滴用阿托品建立兔干眼模型的优劣。方法新西兰大白兔16只,随机选1眼滴用1%硫酸阿托品滴眼液,对侧眼作对照。用药前及用药后不同时间点对实验组及对照组行Schirmer试验、结膜角膜虎红染色、角膜荧光素染色、结膜印迹细胞检查。第35d取结膜、角膜及泪腺组织行光学显微镜检查,泪腺组织同时行电镜检查并采用酶标仪检测其中的乙酰胆碱浓度。结果滴用阿托品后第1d,实验组Schirmer试验值下降,荧光素染色及虎红染色积分上升(P<0·05),至用药后第1周表现最明显,之后逐渐减轻。用药前后杯状细胞密度未出现差异(P>0·05)。滴药后第35d,实验组结膜、角膜、泪腺组织光镜及电镜检查未见异常,泪腺中乙酰胆碱浓度[(18·99±9·79)μmol/mg]比对照组明显增高[(13·10±7·34)μmol/mg](P=0·0318)。结论滴用阿托品可以使兔很快出现干眼,但随时间延长而减轻,因而这种干眼模型不够理想。 展开更多
关键词 阿托品 动物模型
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减少瞬目频率建立的蒸发过强型兔干眼模型 被引量:9
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作者 刘盛春 吴晓梅 《国际眼科杂志》 CAS 2009年第7期1265-1268,共4页
目的:通过减少瞬目频率建立蒸发过强型兔干眼模型。方法:新西兰大白兔12只随机分为实验组A,B和对照组C,每组4只。两实验组模拟荧屏终端(video display termi-nals,VDT)操作者的瞬目特点,用铁夹固定兔眼睑将其瞬目频率减少为实验前的1/3,... 目的:通过减少瞬目频率建立蒸发过强型兔干眼模型。方法:新西兰大白兔12只随机分为实验组A,B和对照组C,每组4只。两实验组模拟荧屏终端(video display termi-nals,VDT)操作者的瞬目特点,用铁夹固定兔眼睑将其瞬目频率减少为实验前的1/3,8h/d。造模前和造模后3,7,10,14d行Schirmer试验、角膜荧光素染色和泪膜破裂时间(break-uptime,BUT)检查,造模前后自身对照。对照组置于相同环境下不进行干预。14d处死A,C组兔取结膜、角膜和泪腺组织行光学显微镜观察及杯状细胞计数对照;B组停止干预,于17,21,28d观察指标,28d处死取相同组织行光学显微镜观察及杯状细胞计数。结果:除A组7d和B组3d外,两实验组其余时间点Schirmer试验值与实验前相比都无明显改变(P>0.05)。从3d起,两实验组的角膜荧光素染色评分显著升高,BUT显著减少(P<0.05),随着时间推移变化程度逐渐加重。14dB组停止干预后上述差异仍存在。光镜下两实验组的角结膜上皮层以增生性改变为主,泪腺组织无明显变化。14dA组4个方位球结膜的杯状细胞数量都比对照组C组少,差异显著(P<0.01),以鼻侧和颞侧球结膜差别更明显。28dB组各方位球结膜杯状细胞数量仍明显低于对照组C组(P<0.01)。结论:减少瞬目频率能成功地建立蒸发过强型兔干眼模型。 展开更多
关键词 瞬目频率 动物模型 荧屏终端
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自身免疫相关性干眼动物模型的研究进展 被引量:1
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作者 魏瑞华 郝永娜 赵少贞 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2012年第7期690-693,共4页
干眼是最常见眼病之一,损伤眼表和视力,影响生活质量,其发病机制尚未完全明了,这严重限制了对干眼的有效治疗。值得关注的是,较为严重的干眼类型多见于自身免疫相关性干眼。近年来,随着转基因小鼠和敲除基因小鼠的出现及分子遗传学和免... 干眼是最常见眼病之一,损伤眼表和视力,影响生活质量,其发病机制尚未完全明了,这严重限制了对干眼的有效治疗。值得关注的是,较为严重的干眼类型多见于自身免疫相关性干眼。近年来,随着转基因小鼠和敲除基因小鼠的出现及分子遗传学和免疫学等学科的飞速发展,人们已经成功建立了许多新的干眼动物模型,对自身免疫相关性干眼的研究有重大价值。 展开更多
关键词 燥性角结膜炎 自身免疫性泪腺炎 动物模型
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润燥合剂治疗去势雄兔干眼模型实验研究 被引量:2
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作者 刘莉 何慧琴 《长春中医药大学学报》 2013年第3期396-397,共2页
目的:观察去势雄兔前后泪液分泌量的改变及泪膜稳定性的变化,比较润燥合剂与必嗽平治疗去势雄兔干眼症疗效上的差异。方法:取健康雄兔18只,随机分为空白对照组、必嗽平组和润燥合剂组,每组6只。空白对照组和治疗组制作成干眼模型。分别... 目的:观察去势雄兔前后泪液分泌量的改变及泪膜稳定性的变化,比较润燥合剂与必嗽平治疗去势雄兔干眼症疗效上的差异。方法:取健康雄兔18只,随机分为空白对照组、必嗽平组和润燥合剂组,每组6只。空白对照组和治疗组制作成干眼模型。分别于去势前和去势后第1、2、3、4、6、8周检查造模组的泪液分泌量、泪膜破裂时间(BUT)情况。必嗽平组与润燥合剂组在去势4周后开始给予药物治疗。结果:去势2周后,造模雄兔出现干眼症状;去势6周后,必嗽平组和润燥合剂组2组雄兔泪液分泌量比较于治疗前明显增加,泪膜破裂时间延长;去势8周后,统计表明润燥合剂组雄兔治疗效果优于必嗽平组,必嗽平组与润燥合剂组组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:润燥合剂和必嗽平都能够缓解干眼症状,但润燥合剂对该病因引起的干眼针对性更强,疗效优于必嗽平。 展开更多
关键词 模型 润燥合剂 鬼针草 赤芍 川芎 地龙 茯苓
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烧灼睑板腺开口制作兔干眼模型的评价 被引量:3
8
作者 肖启国 刘祖国 +3 位作者 张梅 张志红 姚勇 蒋爱华 《南华大学学报(医学版)》 2005年第4期510-513,537,共5页
目的观察烧灼兔睑板腺开口后干眼的形成与发展过程,探索新的干眼模型制作方法。方法健康新西兰大白兔16只,每只随机选择一眼,采用烧灼睑板腺开口的方法制作干眼模型,术后定期检查睑缘肿胀、睑缘充血、睑缘痂皮、睑板腺开口数目、角膜荧... 目的观察烧灼兔睑板腺开口后干眼的形成与发展过程,探索新的干眼模型制作方法。方法健康新西兰大白兔16只,每只随机选择一眼,采用烧灼睑板腺开口的方法制作干眼模型,术后定期检查睑缘肿胀、睑缘充血、睑缘痂皮、睑板腺开口数目、角膜荧光素染色、虎红染色、羊齿状试验、SchirmerⅠ试验、结膜杯状细胞密度等的变化情况。结果术后第1天,实验眼眼睑肿胀,睑缘充血、大量黄白色痂皮,术后第7天至第9天眼睑反应明显减轻,睑板腺开口未见重新开放。术后第7天及第28天以后实验眼角膜荧光素染色、虎红染色积分较对照眼同一时间积分有明显升高(P<0.05),术后42 d实验眼羊齿状试验Ⅲ、Ⅳ级结晶增多(P=0.000),结膜杯状细胞密度下降(P=0.0087),术后45 d病理检查实验眼可见睑板腺导管轻度扩张。结论烧灼兔睑板腺开口是一种简单可行的兔干眼模型制作方法。 展开更多
关键词 模型
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缝线法睑外翻手术建立兔干眼模型的实验研究 被引量:3
9
作者 韩臻 郭滨 +1 位作者 任丛 代云海 《国际眼科杂志》 CAS 2012年第5期832-835,共4页
目的:探讨经缝线法行睑外翻手术建立"蒸发过强型"兔干眼模型的有效性和可行性。方法:新西兰大白兔6只(12眼),每只兔随机选1眼行睑外翻手术(实验眼),对侧眼作空白对照(对照眼)。分别于手术前及手术后1,3,5,7,14,28d行泪液分泌... 目的:探讨经缝线法行睑外翻手术建立"蒸发过强型"兔干眼模型的有效性和可行性。方法:新西兰大白兔6只(12眼),每只兔随机选1眼行睑外翻手术(实验眼),对侧眼作空白对照(对照眼)。分别于手术前及手术后1,3,5,7,14,28d行泪液分泌试验、荧光素钠染色、1%虎红染色检查,术后第28d处死实验兔,取结膜、角膜、泪腺组织行眼科病理检查。结果:泪液分泌试验结果显示:除实验前和实验后第1d,其余各时间点实验眼与对照眼相比,结果均有不同程度降低,且有统计学差异(P<0.05)。实验眼术后第5d角膜开始出现荧光素钠着色,在术后第5d着色最重,之后出现不同程度的好转。实验眼术后第1d角结膜即出现轻度虎红着染,术后第14d着色最重,至28d时略有好转。组织病理学检查示:实验眼与对照眼相比,角膜上皮层次增加,表层扁平细胞不规则缺失,细胞排列紊乱;结膜上皮表面凹凸不平,细胞扁平增大,杯状细胞代偿性增生;泪腺组织光镜下未见明显异常改变。结论:缝线法睑外翻手术制备兔干眼模型效果稳定、操作简便、成本低廉,是一种值得推广的干眼模型制作方法。 展开更多
关键词 动物模型 睑外翻
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黄芪免煎颗粒对兔干眼模型泪液及角膜、结膜黏蛋白1表达的影响 被引量:4
10
作者 储俐 曹文富 马素红 《中国中医眼科杂志》 2022年第10期762-766,共5页
目的观察益卫固表药物黄芪免煎颗粒对兔干眼模型泪液及角膜、结膜黏蛋白1(MUC1)表达的影响。方法选取健康成年家兔30只,随机分为对照组(CG)、模型组(MG)、黄芪组(AM),每组10只。MG组和AM组建立兔黏蛋白缺乏型干眼模型,AM组以黄芪免煎颗... 目的观察益卫固表药物黄芪免煎颗粒对兔干眼模型泪液及角膜、结膜黏蛋白1(MUC1)表达的影响。方法选取健康成年家兔30只,随机分为对照组(CG)、模型组(MG)、黄芪组(AM),每组10只。MG组和AM组建立兔黏蛋白缺乏型干眼模型,AM组以黄芪免煎颗粒口服溶液8.0 mL/kg灌胃28 d,CG组和MG组以等量0.9%氯化钠注射液灌胃。于造模后第0、28、56 d取家兔泪液,酶联免疫吸附法检测MUC1表达情况。第56 d取角膜、结膜行免疫荧光法检测MUC1表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MUC1基因表达。结果(1)泪液MUC1:与CG组比较,MG组兔第28、56 d泪液MUC1表达降低(t_(28 d)=26.739,t_(56 d)=15.268,均P=0.000);与MG组比较,AM组兔第56 d泪液MUC1表达升高(t=8.031,P=0.000),差异均有统计学意义。(2)角膜、结膜MUC1基因:与CG组比较,MG组MUC1基因表达降低(t=19.261,P=0.000);与MG组比较,AM组MUC1基因表达升高(t=6.008,P=0.000),差异均有统计学意义。(3)角膜、结膜MUC1蛋白:与MG组比较,AM组角膜、结膜MUC1蛋白表达均升高(t_(角膜)=4.582,t_(结膜)=6.354,均P=0.000),差异有统计学意义。结论黄芪免煎颗粒可通过提高干眼模型兔的泪液及角膜、结膜MUC1蛋白表达,发挥补益卫气作用,缓解黏蛋白缺乏型干眼症状。 展开更多
关键词 黏蛋白1 黄芪免煎颗粒 模型
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兔干眼细胞模型的建立与生物学特征评价 被引量:2
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作者 李玲 朱梦晨 +3 位作者 李点 杨婷婷 邱婷 王健 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2021年第2期217-221,共5页
目的:通过体外分离及培养泪腺上皮细胞,建立干眼细胞模型,分析相关炎症因子,为进一步探究干眼治疗的有效药物奠定基础。方法:体外分离培养兔泪腺上皮细胞,并采用细胞增殖实验和免疫荧光实验对原代细胞活性和纯度进行鉴定。根据脂多糖(L... 目的:通过体外分离及培养泪腺上皮细胞,建立干眼细胞模型,分析相关炎症因子,为进一步探究干眼治疗的有效药物奠定基础。方法:体外分离培养兔泪腺上皮细胞,并采用细胞增殖实验和免疫荧光实验对原代细胞活性和纯度进行鉴定。根据脂多糖(LPS)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的IC50值,采用两者的0.5倍IC50刺激兔泪腺上皮细胞,构建干眼细胞模型即LPS组和TNF-α组,并通过细胞增殖实验、ELISA和流式方法对比两种构建干眼细胞模型的相关生物学特征。结果:兔泪腺上皮原代细胞培养12h后细胞基本贴壁,48h可见细胞形态舒展,呈长三角形。兔泪腺上皮原代细胞活性为92%以上,标志角化蛋白(Pan-cytoeratin)阳性率>90%,符合实验要求。LPS和TNF-α12h的IC50分别为20μg/mL、4.996ng/mL,采用LPS(10μg/mL)和TNF-α(2.5ng/mL)干预细胞12h后:两组细胞凋亡率明显高于空白对照组(P<0.01),组间比较,TNF-α组细胞凋亡率高于LPS组(P<0.01);两组细胞上清液中IL-1β和IL-6的含量均明显高于空白对照组(P<0.01),组间比较,TNF-α组IL-1β和IL-6的含量明显高于LPS组(P<0.01)。提示TNF-α模拟干眼的炎症反应效果优于LPS。结论:本研究成功建立了一种细胞纯度较高、相对简便、快速,模型稳定的兔干眼细胞模型,为兔泪腺上皮细胞功能及干眼的基础研究提供了更稳定的体外实验模型。 展开更多
关键词 泪腺上皮细胞 原代培养 细胞模型 脂多糖 肿瘤坏死因子-Α
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密蒙花滴眼液对去势兔干眼模型泪腺细胞凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-8的干预作用 被引量:14
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作者 覃艮艳 张又玮 +3 位作者 彭晓芳 周亚莎 彭清华 彭俊 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1072-1077,共6页
目的通过建立去势兔干眼模型,观察密蒙花滴眼液对其泪腺细胞凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-8的干预作用。方法将35只新西兰白兔随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、0.3、0.5、1.0 mg/mL、1.5、3.0 mg/mL密蒙花滴眼液(C、D、E、F、G组)... 目的通过建立去势兔干眼模型,观察密蒙花滴眼液对其泪腺细胞凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-8的干预作用。方法将35只新西兰白兔随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、0.3、0.5、1.0 mg/mL、1.5、3.0 mg/mL密蒙花滴眼液(C、D、E、F、G组)。A、B组不予处理,C、D、E、F、G组分别予以相应密蒙花滴眼液局部滴眼,3次/日。疗程为4周。造模前、用药前及用药后检测各组基础泪液分泌试验(Schirmer′s test I,SIT)水平,免疫组化检测各组泪腺组织中Caspase-3、Caspase-8的表达情况,Real-time PCR法检测各组泪腺组织中Caspase-3、Caspase-8 mRNA的相对表达情况。结果与A比较,用药前及用药后B组SIT值降低(P<0.01);与B组比较,各治疗组用药后SIT值升高(P<0.01);各治疗组用药后与本组用药前比较,SIT值升高(P<0.01)。与A组比较,B组Caspase-3、Caspase-8表达及mRNA相对表达量升高(P<0.01)。与B组比较,D、F、G组Caspase-3及C、D、E、F、G组Caspase-8表达降低(P<0.01);C、D、E、F、G组Caspase-3及D、E、F、G组Caspase-8 mRNA相对表达量降低(P<0.01)。与C组比较,Caspase-3表达降低(P<0.05);D、E、F、G组Caspase-8 mRNA相对表达量降低(P<0.01)。除D与G组比较外,其他各浓度组间Caspase-3 mRNA相对表达量比较均有统计学意义(P<0.01)。结论密蒙花滴眼液可以通过下调去势兔干眼模型泪腺细胞凋亡因子Caspase-3和Caspase-8的表达,达到维持泪腺基础分泌量和保护泪腺的作用。 展开更多
关键词 密蒙花滴 去势模型 泪腺
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