推拿治疗对急性软组织损伤家兔血清神经递质表达影响的研究

急性软组织损伤是临床上的常见病和多发病,中医推拿疗法是治疗该病的主要疗法,具有操作简便、疗效确切等优势。本研究通过观察推拿疗法对急性软组织损伤家兔血清中5-羟色胺（5-HT）、多巴胺（DA）、去甲肾上腺素（NE）和β-内啡肽（β-EP）表达水平的影响,旨在分析推拿治疗急性软组织损伤疼痛的作用机制,促进推拿疗法在急性软组织损伤治疗中的应用。

中华眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对人肺腺癌细胞株的影响

目的 :了解中华眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对人肺腺癌细胞的影响。方法 :采用体外细胞培养的方法 ,观察蛇毒灌胃后的兔血清对人肺腺癌细胞及人胚肺成纤维细胞的细胞毒作用 ,对细胞生长及分裂数的影响。结果 :蛇毒灌胃后的兔血清能够明显抑制肺腺癌细胞的生长 ,且其抑制效应随剂量的增加而增加 ,但该血清对正常人胚肺成纤维细胞的生长却没有明显影响。结论 :中华眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对肺腺癌细胞的生长有明显的抑制作用 ,且有高度的选择性。

黑胸大蠊免疫兔血清的制备与应用

按常规动物免疫方法用黑胸大蠊不同发育阶段可溶性抗原对新西兰兔进行免疫,并通过SDS-PAGE和酶联免疫印迹(ELIB)技术分析黑胸大蠊不同发育阶段抗原的免疫学特性,同时用黑胸大蠊若虫和雄虫免疫兔血清筛选美洲大蠊若虫cDNA文库,对阳性克隆进行PCR鉴定和序列测定,结果显示:卵抗原、若虫抗原、雄成虫抗原、雌成虫抗原分别可见13,28,26和41条蛋白区带,4种抗原组分相互之间有交叉抗原存在,用黑胸大蠊若虫免疫兔血清筛选出1个新基因,用黑胸大蠊雄虫免疫兔血清筛选出6个新基因.

反相高效液相色谱法测定兔血清中5-氟尿嘧啶的浓度

目的应用反相高效液相色谱法测定兔血清中5-氟尿嘧啶的浓度。方法兔血清样品经乙酸乙酯/异丙醇(84/16)萃取后,水浴氮气吹干,流动相定容后进样。色谱柱为kromasil-C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为20mM醋酸铵/乙腈(体积比98.2∶1.8,pH8.05),流速0.8mL/min,紫外检测波长为270nm。结果5-氟尿嘧啶在5～80μg/L浓度范围内呈良好的线性关系。10、20、40μg/L三个浓度的批内RSD分别为11.6%、5.6%、5.4%;批间RSD分别为12.8%、2.7%、6.2%;平均回收率分别为106.7±11.7%、98.0±5.3%、99.3±5.3%。结论本方法可靠、重复性好,具有特异性强、灵敏、精密度与准确度高等特点,满足5-氟尿嘧啶药代动力学研究的要求。

HPLC法测定兔血清中海洋硫酸多糖聚甘古酯的浓度

建立了测定兔血清中硫酸多糖药物聚甘古酯的高效液相-柱后衍生荧光色谱方法。以盐酸胍为衍生试剂，采用离子排阻柱Aminex HPX-87H（300mm×7．8mm），0．005mol·L^-1H2SO4为流动相，流速为0．5mL·min^-1，荧光检测，外标峰高法定量。方法线性范围为10～100μg·mL^-11。高、中、低3种浓度的日内及日间精密度的RSD分别为4．28％，4．05％，5．97％。6．78％，5．32％，7．68％。高、中、低3种浓度的相对及绝对回收率平均值分别为92．32％，94．76％，94．44％，72．07％。73．42％，70．77％。本方法可准确、快速测定兔血清中聚甘古酯的浓度，为其药物动力学研究提供了1个灵敏、可靠的分析方法。

HPLC法测定兔血清中盐酸沙拉沙星含量的研究

建立了HPLC(高效液相色谱 )法测定兔血清中盐酸沙拉沙星的含量。固定相 :色谱柱 ,HypersilC18柱 ,1 0 μm ,Φ4.6× 2 0 0mm。保护柱 ,HypersilC18柱 ,1 0 μm ,Φ4.6× 30mm。均由大连依利特科学仪器有限公司购进。流动相 :0 .0 1 %三氟乙酸———乙腈——— 3%四丁基溴化铵 (6 0∶2 5∶1 5v/v/v)流速 :1 .0ml/min。保留时间 :3.2～ 3.8min。荧光检测器检测波长 :激发波长Ex为 2 98nm ,发射波长Em为 46 0nm。在这个系统中 ,盐酸沙拉沙星的色谱峰没有受到杂质的干扰。在0 .1～ 1 0 μg/ml范围内 ,浓度与峰面积具有良好的线性关系 (r=0 .997) ,盐酸沙拉沙星的平均回收率为 90 .7% (n =6 ) ,精密度CV % 2 .0 2 % (n =4) ,最低检测限为 0 .0 1 μg/ml。

新型pH敏感高分子相分离荧光免疫分析法测定兔血清中IgG

通过将N-异丙基丙烯酰胺(NIP)、甲基丙烯酸丁酯(BMA)和甲基丙烯酸(MAA)共聚得到了一种新型的pH敏感高分子,其相转变pH (pHtr) 在37℃下为6.0;当溶液pH>6.0时,高分子溶解;pH<6.0时,高分子很快从溶液中沉淀出来.在竞争型免疫测定中,偶联在高分子上的兔免疫球蛋白G(IgG)和标准兔IgG在溶液中竞争性地与有限量的异硫氰酸荧光素标记抗体反应,根据pHtr以下免疫复合物沉淀的特性进行分离,建立了均相免疫反应、异相分离的兔IgG新型测定方法,线性范围为100～1000 μg/L;检出限为10 μg/L.方法灵敏、快速且操作简便,由于pHtr较之以前合成的敏感高分子更接近于中性,分离时可降低对抗原-抗体免疫复合物造成的损坏.用于兔血清中兔IgG的测量,结果令人满意.

兔血清中过氧化物酶同工酶在兔分类中的研究

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)对中国白兔、新西兰兔、獭兔血清中的过氧化物酶同工酶进行研究。研究结果表明:这三种兔在血清中的过氧化物酶有着明显的区别,可以利用过氧化物酶的区别对兔种进行分类鉴定。本方法可为过氧化物酶同工酶在动物分类鉴定中提供参考依据。

脱乙酰几丁对兔血清胆固醇和甘油三酯水平的影响

高脂血症是人动脉粥样硬化的主要因素之一,而动脉粥样硬化可引起心和脑血管疾病。高脂血症的发病与机体的脂质代谢紊乱有密切关系,调整脂质代谢,降低过高的血脂,是防治心血管病的重要手段。近年报道,几丁能抑制肠道吸收胆固醇、胆酸及甘油三酯,从而降低人或实验动物的血脂水平。

复合免疫增强剂对兔血清杀菌功能的影响

家兔于注射免疫增强剂前４ｄ和注射后第１、３、７、１０ｄ分别心脏采血，分离血清，进行血清杀菌试验。结果表明，注射免疫增强剂后，血清杀菌率逐渐提高，第７ｄ达到高峰，即由注射前的６６．４７％升至９２．４２％，第１０ｄ有所下降。注射后第３、７、１０ｄ分别与注射前相比，差异极显著（Ｐ＜０．０１）。

兔血清唾液酸含量的测定

唾液酸（Sialicacid，SA）又称N一乙酰神经氨酸（N—acetylneuraminic acid，NANA），是一族化合物的总称。sA是一类含有9个碳原子并具有吡喃糖型结构的酸性氨基糖。早在1936年Blix等首次从牛颌下腺分离出sA以来，人们对sA的结构、分布、代谢、生化特性、免疫学特性、生物学功能等作了大量的研究，发现SA的分子结构不同于一般的戊糖或己糖，

流式细胞仪检测兔血清对shope肿瘤细胞的影响

目的：兔血清对ｓｈｏｐｅ肿瘤细胞具有杀伤作用，其作用机理之一是诱导该细胞凋亡。用流式细胞仪检测兔血清对ｓｈｏｐｅ肿细胞的细胞周期及细胞ＤＮＡ的影响。方法：运用流式细胞仪检测。结果：实验结果表明兔血清引起ｓｈｏｐｅ肿瘤细胞的细胞周期及细胞ＤＮＡ发生变化，以ＳＣＢ－６ａ细胞变化最为显著。结论：本文利用流式细胞仪证实了兔血清对ｓｈｏｐｅ肿瘤细胞影响。

兔血清白蛋白及其耐热肠毒素偶联物的制备

耐热肠毒素(STa)是产肠毒素大肠杆菌(ETEC)引起仔猪黄白痢的关键毒力因子,但其本身在动物体内无免疫原性。本试验为制备基于STa的完全抗原,首先采用利凡诺沉淀法纯化兔血清白蛋白(RSA),以RSA为载体,以戊二醛为交联剂,采用两步交联法制备STa与RSA的共价偶联物,再经凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定偶联效果,测定偶联物分子量及偶联比。电泳结果显示RSA及其STa偶联物制备获得成功,偶联物呈单一条带,分子量约为108.5 KDa,STa与RSA偶联比(摩尔比)为20.5∶1。本试验结果可为制备抗STa特异性抗体、研发STa检测试剂盒、筛选STa减毒突变体及发展仔猪黄白痢类毒素疫苗提供必需的实验材料。

正加速度暴露时兔血清超敏C反应蛋白的变化与心血管损伤风险预测的关系

目的 探讨重复正加速度(+Gz)暴露时兔血清超敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)的变化与心血管损伤风险预测的关系. 方法 将24只动脉粥样硬化实验兔随机分为对照组和+Gz暴露4周、8周、12周组,每组4只.各组兔实验结束后留取静脉血,测定hs-CRP含量,并用电镜观察兔主动脉组织切片. 结果 +Gz暴露对兔静脉血hs-CRP含量的影响差异有统计学意义(F+Gz(1,23)=22.37,P=0.0001);但暴露时间对兔hs-CRP含量不产生影响(F暴露时间(1,23)=0.82,P=0.4550);+Gz暴露与持续时间之间的交互效应对hs-CRP表达量的影响差异无统计学意义(F+Gz×暴露时间(1,1)=1.10,P=0.3540).主动脉电镜观察结果 也给予支持. 结论 重复、长期+Gz暴露可致兔血清hs-CRP长期处于高水平状态,提示应重视飞行员心血管损伤风险的预测.

醋酸纤维素薄膜电泳法分离兔血清蛋白质

目的:采用醋酸纤维素薄膜电泳法确定分离兔血清蛋白质的最佳实验条件,并测定蛋白各组分的含量。方法:对醋酸纤维素薄膜电泳法的电压和时间进行筛选,随机组合确定实验条件。结果:应用醋酸纤维膜电泳法可将兔血清蛋白质分为五条区带,其中,清蛋白含量最高,α1球蛋白>β球蛋白>α2球蛋白,而γ球蛋白的含量高于α和β球蛋白。结论:应用醋酸纤维膜电泳法分离兔血清蛋白质,在电压120 V或150 V、时间50 min(夏季40 min)条件下进行。该方法对蛋白分离效果好、结果稳定,适用于实验教学。

离子对反相高效液相色谱法测定兔血清中的头孢曲松

目的建立一种快速、准确测定兔血清中头孢曲松浓度的高效液相色谱方法。方法在兔血清中加入含有内标甲硝唑的甲醇沉淀蛋白后取上清液,用微孔滤膜过滤后,直接进样测定。使用Agilent1100色谱系统。ThermoHpersilODS2色谱柱,流动相:CH3OH:H2O:29.8mmol·L-1K2HPO3:14.7mmol·L-1KH2PO3:87.7mmol·L-1C6H5Na3O7=214:440:27.5:27.5:5,其中含有3.1mmol·L-1的四丁基溴化铵,缓冲盐部分用0.95mol·L-1的C6H8O4调PH值=3.0±0.1;流速为1ml·min-1;柱温:28℃;检测波长254nm。结果头孢曲松在兔血清中浓度在31.5～1008mg·L-1范围内线性良好。最低检测浓度为4mg·L-1。血清中日内差≤0.90%,日间差≤1.41%。回收率95.85%～102.54%。结论本方法快速、准确,可为头孢曲松在体内血清药物浓度分析提供有意义的方法学参考。

幽门螺杆菌免疫兔血清抗体特异性分析

对幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）抗原、抗体的研究是Hp分型、检测及疫苗开发的基础。Hp免疫血清的制备已成为常规技术，但血清制备过程中的各种因素均可能影响免疫血清的抗体谱，从而引起同类研究间因所用Hp抗体不同导致的结果的差异。本研究对Hp全菌免疫的兔血清抗体谱加以分析，讨论Hp免疫血清制备中存在的一些问题和应对方法。

黄鳍棘鲷血清IgM的纯化及兔抗血清的制备

分别采用Sepharose-6B凝胶过滤层析、Phenyl Sepharose FF疏水作用层析和rProtein A Sepharose亲和层析技术纯化黄鳍棘鲷(Acanthopagrus latus)血清IgM,并将这3种层析纯化方法进行了比较。纯化产物进行SDS-PAGE,电泳结果扫描后经Band Scan5.0软件分析显示,单独使用Sepharose-6B凝胶过滤层析或Phenyl Sepharose FF疏水作用层析得到的IgM纯度只有56%左右;二者联合使用纯度可以达到69%,而rProtein A Sepharose亲和层析一步就可以达到89%的纯度;纯化得到的黄鳍棘鲷血清IgM的重链和轻链分子量分别为73.6kD和26.5kD。本研究还以rProtein A Sepharose亲和层析纯化的黄鳍棘鲷血清IgM为抗原,制备其兔抗血清,采用WesternBlot和双向琼脂扩散检测抗血清免疫学活性,并用间接ELISA检测其效价达到1∶25600,为进一步开展黄鳍棘鲷免疫学方面的研究奠定了基础。

自体血清与胎牛血清培养兔关节软骨细胞的生物学特性

背景:目前培养软骨细胞多使用胎牛血清。但近年异种血清培养组织向临床应用的安全性受到质疑,因此自体血清培养越来越受到重视。目的:比较体积分数10%兔自体血清与体积分数10%胎牛血清培养兔关节软骨细胞生物学特性的差异。方法:兔自体血清培养液制备后,分离培养兔关节软骨细胞,分别在体积分数10%自体血清和体积分数10%胎牛血清中进行单层传代培养至1,3,5代,采用光镜观察细胞形态变化,绘制生长曲线评估细胞增殖速度,观察甲苯胺蓝染色、Ⅰ,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色结果,以流式细胞仪分析细胞Ⅰ,Ⅱ型胶原以及CD26,CD44的表达变化。结果与结论:①在细胞形态上自体血清和胎牛血清培养的软骨细胞差异不大。②自体血清培养的软骨细胞较胎牛血清培养的软骨细胞生长速度更快。③甲苯胺蓝染色结果示,无论是自体血清还是胎牛血清所培养的细胞,染色随代龄的增加逐渐变浅,细胞传至第5代时两组几乎均无异染。对于1代和3代细胞而言,自体血清培养的软骨细胞较胎牛血清所培养的软骨细胞较为深染。④Ⅰ型胶原的表达随代数的增加而增加,而Ⅱ型胶原的表达则随代数的增加而减少。在3代时自体血清培养的软骨细胞Ⅰ型胶原的表达水平低于胎牛血清培养的软骨细胞(P<0.05);在1代和3代时自体血清培养的软骨细胞Ⅱ型胶原的表达水平高于胎牛血清培养的软骨细胞(P<0.05)。⑤CD26表达呈现先升高后降低的趋势,而CD44的表达不随传代数的增加而改变。提示同异体体积分数10%的胎牛血清相比,体积分数10%的自体血清培养的兔软骨细胞生长速度快,且在大部分指标上可以较好地保持细胞表型。