兔轮状病毒VP8*蛋白原核表达、基因序列及蛋白特性分析

为深入研究兔轮状病毒VP8*蛋白的结构和功能,本研究利用生物信息学软件DNAStar对兔轮状病毒Z3171株的VP8*基因序列进行核苷酸和氨基酸同源性分析,运用生物信息学方法对该蛋白的理化性质、亲/疏水性、磷酸化及糖基化位点、结构域、中和表位及三维结构等进行了分析。设计合成引物,采用PCR方法扩增VP8*蛋白编码基因,并将目的片段克隆到pET28a(+)原核表达载体,经体外原核表达,采用亲和层析纯化获得VP8*目的蛋白。结果显示:Z3171株的VP8*基因与国内外参考序列对比,核苷酸序列同源性为32.8%~90.3%,氨基酸序列同源性为39.2%~91.9%。生物信息学分析显示该蛋白理化性质稳定,无跨膜结构域,不含有信号肽,主要定位于细胞骨架中。其中1个中和表位区域内有2个氨基酸插入,该区域三维构象亦发生变化。PCR扩增的VP8*基因条带大小为558 bp,经测序与目的基因完全一致;经SDS-PAGE和Western blot鉴定,重组VP8*蛋白以可溶形式表达,血凝性试验结果表明该蛋白无血凝性。本研究为VP8*免疫原性分析及研制兔轮状病毒疫苗提供了参考。

兔轮状病毒的分离与鉴定

目的 从疑似病料中分离免轮状病毒。方法 从形态学、血清学、分子生物学等几个方面对其进行鉴定。结果 从几个方面鉴定的结果显示 ,疑似病料中含有兔轮状病毒 (LaRV)病毒粒子。结论 本次实验成功地分离得到了LaRV病毒。

兔轮状病毒的分离及生物学特性的研究

１９９０～１９９１年，从云南腹泻死亡幼兔，选用ＥＭ、Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ、ＲＮＡ－ＰＡＧＥ检测皆为ＲＶ阳性的４份肠内容物，通过ＭＡ－１０４和Ｖｅｒｏ细胞培养，分到２株致细胞病变的ＲＲＶ（ＡＮ１和ＡＮ２）。经形态学、培养特性、理化特性、基因组分析和血清学特性鉴定，为Ａ群血清３型ＲＶ。这在我国属首次报道。

应用间接ELISA方法检测兔轮状病毒抗体的初步研究

目的 建立间接ELISA方法对兔轮状病毒抗体进行检测。方法 确定抗原和阴、阳性参考血清的最佳工作浓度 ;进行特异性、敏感性以及中间试验。结果 抗原的最佳工作浓度为 1∶12 0 0 0倍 ;参考血清的最佳工作浓度为 1∶2 0 0倍 ;本次实验建立的ELISA方法具有很好的敏感性和特异性 ;中间实验表明 ,LaRV在兔群中具有很高的感染率。结论 本次试验成功地建立了用于兔轮状病毒抗体检测的ELISA方法。

兔轮状病毒研究进展

兔轮状病毒(LaRN)是呼肠病毒科(Reoviri-dase)轮状病毒属(Kotaviras)中的一个成员。是引起1～2月龄幼兔腹泻的主要病原之一,世界各地均有发生,给养兔业造成严重的经济损失。自1976年Brydern等首先发现和分离LaRV以来,各国学者就LaRV的生物学特性、基因组结构、致病性、流行病学、抗原性与血清型、诊断与免疫等做了大量研究。但总括起来可分两大阶段:一是LaRV的分离培养及一般检测方法的建立;二是基因组结构的分析等分子生物学与生物工程苗的研究。

兔轮状病毒VP7基因在重组杆状病毒中的表达

目的利用Bac—to-Bac杆状病毒表达系统表达兔轮状病毒VP7基因。方法根据Gen Bank发表的LaRV308／01VP7基因序列（AF5028201），设计一对特异性引物，RT—PCR扩增获得VP7基因，将目的片段克隆入pFastBacHTa中，构建重组转移载体pFastBHa-VP7。将重组转移载体转化DH10Bac感受态细菌，与Bacmid发生位点特异性转座作用，获得重组穿梭载体Bacmid-VP7，通过脂质体将其转染昆虫细胞Sf9。结果获得了重组杆状病毒Bacmid—VP7，Western blot和IFA分析表明VP7蛋白在昆虫细胞中获得正确表达且表达产物具有抗原性。结论本研究利用Bac—to-Bac杆状病毒表达系统成功表达兔轮状病毒VP7蛋白，为进一步建立诊断学方法奠定了实验基础。

兔轮状病毒病的诊治

某肉兔养殖场幼兔发生了一起以水样腹泻为主要特征的疫病,通过对病死兔的临床症状和病理剖检观察、RT-PCR检测、动物回归试验等确诊为该兔场发生了兔轮状病毒的感染,通过采取一系列治疗措施,疫情得到了控制。

兔轮状病毒、兔肠冠状病毒双重RT-PCR检测方法的建立及初步应用

兔轮状病毒(lapine rotavirus,LaRV)和兔肠冠状病毒(rabbit enteric coronavirus,RECV)是引起兔腹泻的重要病原,2种病毒引起的仔兔腹泻症状极为相似。为建立能同时鉴别LaRV、RECV的方法,根据LaRV和RECV基因组的保守区段设计2对特异性引物,预期特异性扩增LaRV和RECV的片段大小分别为291 bp和163 bp,经优化反应条件,成功建立了LaRV和RECV的双重RT-PCR检测方法。特异性检测结果显示,能特异性的扩增出LaRV和RECV的目的条带,与兔瘟、大肠杆菌、魏氏梭菌、沙门菌、泰泽菌、巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、链球菌、支气管败血波氏杆菌均无交叉反应;LaRV和RECV的最低检出限分别为2.73×10^(5),1.22×10^(4)拷贝/μL,在相同条件下重复可获得一致的结果。对采自山东部分地区的107份兔腹泻样品的检测结果显示,LaRV和RECV的阳性率分别为10.28%和7.48%,两者与单一RT-PCR检测结果相一致。结果表明,所建立的双重RT-PCR方法能够快速、准确的对LaRV和RECV单一或混合感染的样品进行检测,为LaRV和RECV的鉴别诊断和流行病学调查提供新的技术手段。

家兔出现轮状病毒感染症的应对措施研究

兔轮状病毒感染症又名兔轮状病毒病或兔轮状病毒性腹泻,是由兔轮状病毒所引起的一种家兔,尤其是断奶仔兔的急性、病毒性肠道传染病,也是一种人兽共患病.在临床上,以腹泻和脱水为主要特征.本文分析了本病的发生原因以及应对措施,希望能够为广大养殖户提供借鉴和参考.

兔场三种严重腹泻病的鉴别诊断与防治

在大规模饲养条件下,饲养管理不当、疫病预防不到位、疾病治疗不及时等诸多因素,可致兔场疾病发病率上升,其中兔腹泻病发病率占80%左右,且多为传染性。兔轮状病毒病、产气荚膜梭菌病和泰泽氏菌病均为家兔严重性腹泻传染病,死亡率分别约为40%、10%、90%,一旦发生,可大面积感染,造成严重的经济损失。本文就这三种疾病的流行特点、临床症状、剖检变化、实验室诊断及防治进行概述,为此类病的快速诊断、早期治疗提供参考。

用Dot—ELISA检测家兔魏氏梭菌病效果好

中国农科院哈兽研所的科研人员用纯化A型魏氏梭菌毒素抗原,以混合纤维索酯微孔滤膜为固相载体,制备检测兔魏氏梭菌抗毒素的快速诊断膜,Dot—ELISA检查6只魏氏梭菌人工感染兔血清,感染前均呈阴性反应,感染7天后阳转。对抗兔轮状病毒、大肠杆菌、巴氏杆菌、波氏菌、葡萄球菌抗体阳性兔及健康兔血清检查均为阴性反应。A型魏氏梭菌阳性血清可被特异抗原所阻断,对10份兔血清三次重复试验,证明重复性很好。

单抗一步快速诊断技术检测LaRV抗原

最近,哈尔滨兽医研究所硕士研究生崔尚金在导师王西川研究员的精心指导下,将由腹泻兔分离到的兔轮状病毒（LaRV）在MA104细胞上由第17代继代至27代,病毒滴度由107PFU lml增至1010～11PFU lml,并对培养的病毒进行了纯化与分析;用提纯的病毒免疫BALB/C小鼠,按常规方法建立11株分泌抗LaRV的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其中2B4株分泌的单抗特异性地针对病毒外壳蛋白VP7上的某一保守序列;用2B4诱生的腹水提纯液包被聚苯乙烯微量反应板,将酶标抗体和处理后的粪样加于包被孔内。