盖塔病毒E2结构域蛋白的原核表达及抗血清制备

甲病毒属病毒E2结构蛋白是一种保守的受体结合蛋白,包含与免疫原性、组织噬性及宿主感染范围相关的重要残基。本试验以盖塔病毒(Getah virus,GETV)SD17/09株为模板设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增E2结构域基因(E2d),扩增产物E2d连接至原核表达载体pET-22b(+)融合表达,利用SDS-PAGE及Western blot方法分析表达产物。以His-Bind亲和层析柱纯化E2d蛋白,免疫新西兰兔获得阳性血清,通过血清中和方法检测血清效价,并通过Western blot分析其活性。结果显示,在预期38 kDa处出现目的条带,表明E2d基因成功表达,表达产物以包涵体形式大量存在;免疫后24 d多抗血清中和效价达1∶4096,能与重组蛋白E2d和GETV SD17/09株发生特异性反应。本试验成功应用大肠杆菌表达GETV E2d蛋白,表达的蛋白具有免疫原性,并获得兔源阳性血清,为开展GETV E2蛋白结构域的功能研究、诊断方法的建立和疫苗研发奠定基础。