独活寄生汤含药血清对PLGA/Fibrin复合支架培养兔髓核细胞代谢影响的研究

目的探讨独活寄生汤含药血清对兔髓核细胞在PLGA/Fibrin复合支架培养代谢的影响。方法应用冻干法制备PLGA/Fibrin支架培养兔髓核细胞,按照不同浓度独活寄生汤含药血清分为A组(100μg/ml)、B组(200μg/ml)、C组(500μg/ml)及D组(空白对照)。通过MTT分析细胞增殖分化,DMMB法检测硫酸糖胺多糖(GAG),qRT-PCR检测COLⅡ、aggrecan差异,组织学观察髓核细胞在PLGA/Fibrin复合支架微孔环境生长形态学改变。结果培养1、7及14d后A、B、C3组髓核细胞活性、GAG水平、COLⅡ及Aggrecan mRNA表达均高于D组,且随着独活寄生汤含药血清浓度递增,细胞活性及基质表达有显著增加。培养2周后HE染色显示A、B、C3组较D组微孔支架吸附、积聚更多髓核细胞生长。结论PLGA/Fibrin复合支架能满足兔髓核细胞的黏附、伸展及繁殖要求,并为维持细胞的体外增殖和代谢活动提供适宜的微环境。独活寄生汤能够更好提高髓核细胞分化增殖能力,促进细胞基质分泌,从而减缓了椎间盘的退变。

TGF-β3对PLGA支架3-D培养兔髓核细胞影响的体外研究

目的评价转化生长因子β3(transforming growth factor-β,TGF-β3)对兔髓核细胞在聚乳酸-羟基乙酸共聚物(polylacticco-glycolic acid,PLGA)支架3-D培养的影响。方法应用粒子沥滤法制备多孔PLGA支架培养兔髓核细胞(1×106/PLGA),分为100ng/m L TGF-β3/PLGA,500 ng/m L TGF-β3/PLGA,1μg/m L TGF-β3/PLGA,PLGA对照组。通过MTT分析细胞增殖分化,1,9-二甲基亚甲蓝(DMMB)法检测糖胺多糖(GAG),q PCR检测Ⅱ型胶原(COLⅡ)、Aggrean差异,组织学观察TGF-β3对兔髓核细胞在PLGA支架微孔环境生长形态学改变。结果培养7、14、21 d后TGF-β3/PLGA组的髓核细胞活性、GAG产量、COL II及Aggrecan mRNA表达均高于PLGA对照组(P<0.05)。随着TGF-β3浓度递增,细胞活性及基质表达有显著增加(P<0.05)。21 d组织学HE染色显示TGF-β3/PLGA组较PLGA对照组中微孔支架吸附、积聚更多髓核细胞生长。结论 TGF-β3对PLGA三维培养髓核细胞更好提高分化增殖能力,促进细胞基质分泌。TGF-β3/PLGA支架可作为生物学治疗退变椎间盘病变潜在选择方法。