CDK2蛋白质分子结构与其入核转运过程关系的初步分析(英文)

应用重组技术构建野生型及缺失型CDK2基因的真核表达载体 ,分别使野生型及缺失型CDK2蛋白与增强型绿色荧光蛋白 (Enhanced greenFluorescentProtein ,EGFP)形成融合蛋白。通过脂质体介导的方法将载体转染人宫颈癌细胞系HeLa和中华仓鼠卵巢细胞系CHO ,经过细胞周期同步化处理后于荧光显微镜下观察EGFP的亚细胞定位以示踪野生型及缺失型CDK2基因的表达。结果表明 ,野生型CDK2基因的表达产物定位于细胞核 ,而两种缺失型CDK2基因分别编码的CDK2蛋白N 端 1～ 2 0 1及 98～ 2 98多肽均主要定位于细胞质。以上结果提示 ,CDK2蛋白序列中不含有与核定位直接相关的信号 ,其入核过程可能是由其N 端 1～ 97及 2 0 2～ 2 98多肽范围内的部分氨基酸共同形成高级结构 ,并依赖此高级结构与其他含有入核信号的蛋白形成复合物 ,从而被带动进入细胞核的。

植物细胞质介导GFP-NLS蛋白入核转运的HeLa细胞系统的建立

细胞核作为细胞中重要的遗传物质存储、复制和转录的结构,涉及大量信息和物质的传输活动,尤其是蛋白质的入核转运一直以来都是研究的热点问题之一。本研究证明,植物细胞质可以有效应用于动物细胞体系研究蛋白质入核转运。本文利用病毒SV40抗原蛋白中的核定位信号(nuclear localization signal,NLS)标记绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),通过拟南芥细胞质的介导,利用He La细胞核建立研究蛋白质入核转运的半细胞体系。结果显示,植物细胞质结合NLS片段能改变GFP在He La细胞核内外的分布,实现对目标蛋白入核过程的介导,使GFP-NLS最后定位于细胞核内。这也意味着通过He La细胞建立起的半细胞体系能为蛋白质入核转运研究提供一个有效的研究体系。

Importin β1介导的病毒蛋白入核转运在病毒复制中作用的研究进展

核转运受体蛋白importinβ1是输入蛋白importinβ家族重要成员之一,它是一种相对保守的、广泛分布于真核生物细胞内的核转运受体蛋白。许多研究表明,importinβ1能直接识别和结合含有不同类型核定位信号的病毒蛋白并转运其入核,此过程对病毒的整个复制和致病进程起着十分重要的作用。该文主要从importinβ1的结构特征、介导的病毒蛋白入核转运机制以及在病毒复制中的作用、药物阻断importinβ1参与的病毒复制等研究方面进行综述,以期为后续研究病毒蛋白细胞核定位的分子机制和功能以及抗病毒治疗提供参考。

核定位信号在JC病毒样颗粒入核转运中的作用

目的探讨JC病毒（JCV）主要外壳蛋白VP1所含核定位信号（NLS）在JCV病毒样颗粒（VLP）入核转运中的作用。方法应用位点诱变法将JCV野生型VP1（wtVP1）氨基末端3个氨基酸：第5位赖氨酸、第6位精氨酸、第7位赖氨酸分别置换为丙氨酸、甘氨酸、丙氨酸，制备成NIS变异的VP1（△NIS-VP1）。编码△NLS-VP1的基因克隆到原核表达质粒pET-15b中，体外表达、重组VP1 NLS变异的病毒样颗粒（△NLS-VLP），异硫氰基荧光素（FITC）标记后感染地高辛渗透或未渗透的SVG细胞，荧光显微镜观察VLP入核转运。结果wtVP1组成的病毒样颗粒（mtVLP）可以进入地高辛渗透或未渗透的SVG细胞核，而△NLS-VLP只能进入细胞浆，不能进入细胞核；体外转染后，wtVP1主要在SVG细胞核表达，而△NLS-VP1主要在细胞浆表达；包裹外源性DNA的VLP感染SVG细胞后，则wtVLP包裹的DNA在细胞浆和细胞核内均可检测到，而△NLS-VLP包裹的DNA只能在细胞浆检测到，不能在细胞核内检测到。VLP体外结合分析发现，wtVLP与胞浆转运因子（impomn）α、β均可结合，而△NLS-VSP与importin α、β不能结合。结论、VP1 NLS对于VLP入核转运是必需的，VLP的入核转运是由VP1 NIS与importin相互作用介导的。

Wnt/β-catenin通路介导的cSN50.1对高糖诱导HK-2细胞转分化的影响

目的研究多肽cSN50.1对HK-2细胞转分化的影响作用。方法CCK-8检测不同浓度cSN50.1(0、10、30、50μmol/L)对细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察各组对照组、HO组、HG组、cSN50.1各剂量组(10、30、50μmol/L):细胞形态变化;Western印迹检测对照组、HO组、HG组、XAV939组和cSN50.1组肾小管上皮细胞-间充质转分化(EMT)相关因子和胞质胞核中β-连环蛋白(catenin)表达情况。结果CCK-8结果:与0μmol/L组相比,10μmol/L组和30μmol/L组吸光度值无明显变化(P>0.05),而50μmol/L组吸光度值明显下降(P<0.05)。对照组与HO组细胞均呈典型上皮样细胞形态;HG组细胞变为长梭形,大小和形态不一;cSN50.1干预后,长梭形细胞均明显减少。与对照组相比,HO组α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、波形蛋白(Vimentin)和E-钙黏蛋白(cadherin)表达均无明显变化(P>0.05),HG组α-SMA和Vimentin表达均明显升高,E-cadherin明显下降(P<0.05);与HG组相比,XAV939组和cSN50.1组α-SMA和Vimentin表达均明显降低,E-cadherin均明显增高(P<0.05)。与对照组相比,HO组胞质和胞核β-catenin表达均无明显变化(P>0.05),而HG组表达均明显增高(P<0.05);与HG组相比,XAV939组胞质和胞核中表达均明显下降(P<0.05),而cSN50.1组胞质中无明显变化(P>0.05),胞核中明显降低(P<0.05)。结论cSN50.1能够改善高糖诱导HK-2细胞转分化,且该作用可能是通过调控β-catenin入核转运,进而影响EMT相关因子表达实现的。

Importin α1与HIV-1整合酶相互作用及其对病毒复制的影响(英文)

目的研究HIV-1整合酶与细胞蛋白Importinα1(Impα1)的相互作用及其对HIV-1复制的影响。方法采用化学发光免疫共沉淀系统定量检测细胞内HIV-1整合酶与Impα1蛋白的相互作用,同时利用基因沉默技术下调CD4+C8166 T细胞中Impα1的表达,以研究Impα/β入核转运途径对HIV-1复制的影响。结果当T细胞内Impα1表达下降时,HIV-1对其感染性显著减弱。Real-time PCR分析结果显示,尽管病毒逆转录未受到影响,但其2-LTR DNA(入核指标)及整合DNA的形成受到了抑制,提示Impα1的下调明显影响HIV-1入核转运过程。结论该研究为HIV-1整合酶与Impα1蛋白之间的相互作用及其在病毒感染中的影响提供了重要的实验依据。

人体核孔蛋白50的生物学特性及与病毒感染关系的研究进展

核孔蛋白50 (nucleoporin 50, Nup50)参与构成核孔复合体的核篮结构, 主要包括N结构域(连接importin α)、F结构域(连接importin β)和R结构域(连接Ran), 其中N结构域包括两个importin α结合片段。目前关于Nup50在入核转运中的作用机制存在两种解释:"三相开关"模型和解聚回收模型。Nup50不仅参与物质运输, 还可调控基因组结构和基因表达。此外, Nup50参与病毒感染与复制过程, 临床研究表明, Nup50与乙型肝炎病毒和人类免疫缺陷病毒1的感染有关。目前关于Nup50与病毒感染的关系尚无深入研究, 本综述旨在通过总结Nup50生物学特性及其与病毒感染关系的研究进展, 为今后研究Nup50与病毒感染的关系提供线索和思路。