利用五特征转基因小鼠制备全人源血管内皮生长因子165单克隆抗体

目的:利用转入人免疫球蛋白基因的五特征小鼠制备全人源血管内皮生长因子165(VEGF165)单克隆抗体,并初步探讨该单抗的抗肿瘤活性。方法:采用常规杂交瘤细胞融合技术,利用间接ELISA效价测定方法筛选能稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株;比较了五特征小鼠和BALB/c小鼠的免疫效果;亲和色谱法从腹水中纯化单抗;利用分泌VEGF的人膀胱癌细胞系T24细胞考察单抗的体外抗肿瘤活性。结果:成功获得了4株能稳定分泌表达单抗的杂交瘤细胞株(V2,V50,V71,V75),建立了间接ELISA效价测定方法,发现同样方法免疫的BALB/c鼠血清效价约为五特征小鼠的10倍。采用甘露糖结合蛋白(MBP)亲和色谱柱从腹水中获得了纯化的单抗样品,经SDS-PAGE和Western blotting检测,证实该单抗为全人源VEGF165IgM单抗。体外抗肿瘤活性结果显示,V2、V75单抗对人类膀胱癌细胞系T24细胞的增殖有较好的抑制作用。结论:可利用五特征小鼠制备全人源抗VEGF单抗,该单抗具有潜在的抗肿瘤活性。

单克隆抗体人源化技术研究进展

随着分子生物学技术的发展，应用DNA重组技术、抗体库技术及转基因技术对鼠源性单抗进行人源化改造，先后出现了嵌合抗体、互补决定区移植抗体和全人源抗体，它们从不同角度克服了鼠源性单抗临床应用的不足，为单克隆抗体在临床诊断及治疗中的应用带来了新的曙光，该文对单克隆抗体人源化技术的研究进展作一综述。