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全内反射荧光显微镜的使用研究
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作者 方三华 杨丹 +3 位作者 刘丽 肖桂凤 尹伟 刘双双 《现代科学仪器》 2023年第6期195-199,共5页
全内反射荧光显微镜利用隐逝波激发临界面下200纳米范围内荧光物质成像,具有信噪比高、速度快和对生物样本损伤小等优点,是常用的单分子荧光成像技术。本文在介绍全内反射荧光显微镜原理、组成、类型和优劣势的基础上,充分挖掘本单位在... 全内反射荧光显微镜利用隐逝波激发临界面下200纳米范围内荧光物质成像,具有信噪比高、速度快和对生物样本损伤小等优点,是常用的单分子荧光成像技术。本文在介绍全内反射荧光显微镜原理、组成、类型和优劣势的基础上,充分挖掘本单位在全内反射荧光显微镜使用方面的经验,以荧光蛋白标记的网格蛋白(Clathrin)为研究对象,阐述了全内反射荧光显微镜在细胞膜相关分子检测中的应用,讨论了仪器的最新进展,并对未来发展提出展望,希望为全内反射荧光显微镜的管理者和使用者提供借鉴和参考。 展开更多
关键词 全内反射荧光显微镜 原理 操作规程 应用
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全内反射荧光显微术 被引量:6
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作者 王琛 王桂英 徐至展 《物理学进展》 CSCD 北大核心 2002年第4期406-415,共10页
全内反射荧光显微技术是当今世界上最具前途的新型生物光学显微技术之一 ,可以用来实现对单个荧光分子的直接探测。它利用全内反射产生的隐失波照明样品 ,使照明区域限定在样品表面的一薄层范围内 ,因此具有其它光学成像技术无法比拟的... 全内反射荧光显微技术是当今世界上最具前途的新型生物光学显微技术之一 ,可以用来实现对单个荧光分子的直接探测。它利用全内反射产生的隐失波照明样品 ,使照明区域限定在样品表面的一薄层范围内 ,因此具有其它光学成像技术无法比拟的高的信噪比和对比度。近年来 ,已被生物物理学家们广泛应用于单分子的荧光成像中。本文系统的介绍了全内反射荧光显微技术的原理、国内外的发展和现状及其在生物学上的应用 ,并对其未来做了展望。 展开更多
关键词 单分子探测 荧光分子 全内反射荧光显微术 隐失波 生物光学显微镜 发展 荧光成像
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拉直的单个DNA分子的全内反射荧光实时成像研究 被引量:2
3
作者 林丹樱 刘晓晨 +1 位作者 王鹏飞 马万云 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第5期1266-1270,共5页
全内反射荧光(TIRF)成像技术利用穿透深度仅200nm左右的隐失波来激发诱导荧光,探测灵敏度和图像信噪比大大提高,成为单分子研究的有力工具。分子梳技术利用DNA末端与固体表面的结合力和周围流体流动产生的侧向力将DNA分子拉伸并平铺在... 全内反射荧光(TIRF)成像技术利用穿透深度仅200nm左右的隐失波来激发诱导荧光,探测灵敏度和图像信噪比大大提高,成为单分子研究的有力工具。分子梳技术利用DNA末端与固体表面的结合力和周围流体流动产生的侧向力将DNA分子拉伸并平铺在表面上。结合这两种技术,对分子梳拉直的单个DNA分子进行了清晰的实时荧光成像,发现TIRF成像条件下DNA分子与荧光探针YOYO-1组成的复合体可自然避免发生光敏断裂现象;实时监测了单个DNA-YOYO-1复合体的光漂白过程,通过对激发光照射时间与探测器曝光时间进行同步控制,可大幅降低光漂白程度,为拉直的单个DNA分子的长时间实时观察和成像研究优化了实验条件,为实时、可视化地研究其与蛋白质相互作用的动力学过程奠定了基础。 展开更多
关键词 全内反射荧光(TIRF) 实时 单分子 DNA 分子梳
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全内反射荧光光谱法研究水溶性卟啉在正己烷/水界面的吸附行为 被引量:2
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作者 黎朝 唐尧基 +3 位作者 陈莹 陈静怡 李海燕 李耀群 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1543-1546,共4页
在自行组装的全内反射荧光测定装置上实现了液/液界面全内反射荧光光谱的测绘,比较了水溶性的m eso-四(对磺酸基苯基)卟啉(TPPS)在正己烷/水界面上与在水相中荧光性质的差异,研究了全内反射荧光强度随表面活性剂种类、浓度及溶液pH值的... 在自行组装的全内反射荧光测定装置上实现了液/液界面全内反射荧光光谱的测绘,比较了水溶性的m eso-四(对磺酸基苯基)卟啉(TPPS)在正己烷/水界面上与在水相中荧光性质的差异,研究了全内反射荧光强度随表面活性剂种类、浓度及溶液pH值的变化情况,探索了TPPS的界面吸附行为,着重考察了阳离子表面活性剂CTMAB对TPPS界面荧光性质的影响。结果表明,在阳离子表面活性剂存在的条件下,未质子化的TPPS能够选择性地吸附在正己烷/水界面上,静电力在TPPS界面吸附过程中应起重要作用。 展开更多
关键词 液/液界面 meso-四(对磺酸基苯基)卟啉 全内反射荧光 水溶性卟啉 荧光光谱法 全内反射 吸附行为 水界面 正己烷 阳离子表面活性剂
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大鼠原代脂肪细胞中单个GLUT4囊泡的成像——全内反射荧光显微成像技术的应用 被引量:1
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作者 许迎科 李届悦 +1 位作者 许科帝 郑筱祥 《浙江大学学报(工学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第12期2112-2116,共5页
本研究采用高斯拟合算法与全内反射荧光显微技术(TIRFM),通过实时动态的单粒子追踪拍摄来分析原代培养大鼠脂肪细胞基础条件及胰岛素刺激下细胞膜附近绿色荧光蛋白(GFP)标记的GLUT4囊泡的运动变化.使用高斯拟合来消除光学成像系统中发... 本研究采用高斯拟合算法与全内反射荧光显微技术(TIRFM),通过实时动态的单粒子追踪拍摄来分析原代培养大鼠脂肪细胞基础条件及胰岛素刺激下细胞膜附近绿色荧光蛋白(GFP)标记的GLUT4囊泡的运动变化.使用高斯拟合来消除光学成像系统中发生的原始样品中单像素点荧光强度值的污染,重建出囊泡真实的中心点荧光强度值.通过对序列图像中的囊泡点应用高斯拟合和相应的搜索算法,得到所有囊泡的高斯中心点荧光强度值序列,继而描绘出囊泡的动态转运路径.结果表明,基础条件下膜附近的多数GLUT4囊泡处于沿同一路径的快速长距离转运状态;胰岛素刺激后,长距离转运的GLUT4囊泡数量减少,多数GLUT4囊泡固定成团或者在原地摆动呈限制性的运动.当GLUT4囊泡锚定至膜上后,即迅速与膜融合.说明高斯拟合算法及全内反射荧光显微技术的结合可以很好地实现囊泡纳米尺度的三维实时追踪. 展开更多
关键词 脂肪细胞 GLUT4囊泡 胞吐 单粒子追踪 全内反射荧光显微技术
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基于全内反射荧光显微镜的单个心肌细胞内钙信号斑图的介观表征 被引量:1
6
作者 白永强 朱星 《吉林大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期672-675,共4页
利用基于近场光学原理组建的全内反射荧光显微镜研究单个大鼠心肌细胞内钙离子信号的斑图.结果表明:存在于盖玻片表面约100nm区域的隐失场可较好地照射活体细胞,并能清晰地显示胞内信号;心肌细胞内钙信号包括钙火花、钙靶波、钙平面波... 利用基于近场光学原理组建的全内反射荧光显微镜研究单个大鼠心肌细胞内钙离子信号的斑图.结果表明:存在于盖玻片表面约100nm区域的隐失场可较好地照射活体细胞,并能清晰地显示胞内信号;心肌细胞内钙信号包括钙火花、钙靶波、钙平面波和钙螺旋波等形式,钙信号各形式间存在相互作用;在钙诱导钙释放机制作用下,心肌细胞具有较强的可激发特性. 展开更多
关键词 全内反射荧光显微镜 钙火花 钙螺旋波 钙诱导钙释放 可激发特性
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全内反射荧光显微技术实时观察人偏肺病毒感染
7
作者 谭彬 易勤 赵耀 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期692-696,共5页
目的利用显微成像技术拍摄并分析人偏肺病毒(human metapneumovirus,hMPV)的入胞过程,以探讨hMPV的感染免疫方式。方法使用全内反射荧光技术(total internal reflection fluorescence,TIRF)连续拍摄带有绿色荧光蛋白的病毒影像,并逐帧... 目的利用显微成像技术拍摄并分析人偏肺病毒(human metapneumovirus,hMPV)的入胞过程,以探讨hMPV的感染免疫方式。方法使用全内反射荧光技术(total internal reflection fluorescence,TIRF)连续拍摄带有绿色荧光蛋白的病毒影像,并逐帧分析病毒的感染过程。结果感染开始后邻近培养介质的细胞膜上hMPV数量缓慢增多并在15~20 min时大量进入细胞。黏附于细胞上的病毒大部分做小振幅的无规律运动,偶见快速移动。感染12 h后hMPV在细胞膜阴影处、两细胞交界面大量聚集。结论本研究探讨了使用TIRF实时观察病毒入胞的可行性,结果表明TIRF技术能够连续观察病毒的运动规律和分布状况,为进一步揭示hMPV的感染免疫机制以及疫苗研制奠定了实验基础。 展开更多
关键词 全内反射荧光技术 人偏肺病毒 病毒感染免疫
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宽场-共振能量转移全内反射荧光的显微技术及其应用
8
作者 张少华 曹福元 +1 位作者 胡茂琼 王建枝 《微循环学杂志》 2005年第2期67-69,共3页
关键词 全内反射荧光 显微技术 能量转移 光学显微镜 共振 蛋白质分子 动力学特征 成像质量 相互作用 生命科学 空间分辨 极限
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全内反射荧光显微术原理及其应用 被引量:2
9
作者 刘进 《中国现代教育装备》 2009年第4期52-54,共3页
全内反射荧光显微术,利用全内反射时产生的隐失波照明样本,仅激发样本表面薄层范围内的荧光基团,与传统的荧光显微镜相比,使显微成像在Z轴上的空间分辨率得到了显著改善,大大提高了图像的信噪比和对比度。近年来,该技术已被生物学家们... 全内反射荧光显微术,利用全内反射时产生的隐失波照明样本,仅激发样本表面薄层范围内的荧光基团,与传统的荧光显微镜相比,使显微成像在Z轴上的空间分辨率得到了显著改善,大大提高了图像的信噪比和对比度。近年来,该技术已被生物学家们广泛地应用于单分子荧光成像中。本文介绍了全内反射荧光显微术的原理及其在生物学研究中的应用,并对其未来发展前景作了展望。 展开更多
关键词 全内反射荧光显微术 隐失波 单分子荧光成像 生物学研究
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全内反射荧光光谱在蛋白质材料相互作用领域的应用(英文)
10
作者 邴乃慈 田震 +5 位作者 乔炜 祝向荣 张烨 沈娇雯 陈钦 周玉林 《上海第二工业大学学报》 2011年第3期214-218,共5页
蛋白质表面相互作用对药物释放、生物传感器、亲和色谱和离子色谱以及仿生材料在生物环境中均起到关键作用。许多技术可用来研究不同材料界面间的蛋白质密度、结构和取向。全内反射技术由于具有快速、无损、灵敏以及灵活等特点,在研究... 蛋白质表面相互作用对药物释放、生物传感器、亲和色谱和离子色谱以及仿生材料在生物环境中均起到关键作用。许多技术可用来研究不同材料界面间的蛋白质密度、结构和取向。全内反射技术由于具有快速、无损、灵敏以及灵活等特点,在研究分子水平蛋白质界面耦合过程发挥着重要的作用。描述了全内反射的原理、技术以及在检测和控制生物分子间作用等方面的应用,主要包括蛋白质—蛋白质,蛋白质-DNA,DNA-DNA以及蛋白质—膜等界面体系。这些研究有助于进一步加强对蛋白质表面相互作用的理解。近年来全内反射技术在蛋白质领域的应用,为其在生物物理和生物化学方面的应用提供了依据和可能。 展开更多
关键词 全内反射荧光光谱 蛋白质—材料 相互作用 综述
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全内反射荧光成像技术及其在单分子检测中的研究进展 被引量:4
11
作者 何化 任吉存 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期445-449,454,共6页
全内反射荧光显微镜技术是当今最灵敏的生物成像和检测方法之一,可以直接探测单个荧光分子。这种方法已成功地用于生命科学、化学、物理学等研究领域,获得了常规方法无法得到的重要信息。本文介绍了全内反射荧光显微镜的工作原理和实验... 全内反射荧光显微镜技术是当今最灵敏的生物成像和检测方法之一,可以直接探测单个荧光分子。这种方法已成功地用于生命科学、化学、物理学等研究领域,获得了常规方法无法得到的重要信息。本文介绍了全内反射荧光显微镜的工作原理和实验技术,总结了近年来这种单分子检测方法在生命科学、化学等领域的重要应用,并对其发展前景进行了展望。 展开更多
关键词 单分子检测 全内反射荧光显微镜 评述
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全内反射荧光免疫传感器用于微囊藻毒素-LR的在线检测 被引量:1
12
作者 吕清 宋保栋 +4 位作者 盛建武 何苗 顾俊强 杨海洋 徐诗琴 《给水排水》 CSCD 北大核心 2015年第8期116-120,共5页
利用自行研制的全内反射荧光免疫传感器,研究了水中微囊藻毒素-LR(MC-LR)的检测方法,包括MC-LR免疫芯片的制备方法,传感器系统检测MC-LR的流程优化等,并在太湖某饮用水源地水质在线监测站开展了长期连续运行研究。结果表明,传感器系... 利用自行研制的全内反射荧光免疫传感器,研究了水中微囊藻毒素-LR(MC-LR)的检测方法,包括MC-LR免疫芯片的制备方法,传感器系统检测MC-LR的流程优化等,并在太湖某饮用水源地水质在线监测站开展了长期连续运行研究。结果表明,传感器系统对微囊藻毒素抗体的检出限为1.0ng/mL;在间接竞争免疫检测模式下,传感器测定MC-LR共需要5个步骤,且单个周期的检测时间为15min;传感器对MC-LR的检出限为0.10μg/L,定量检测区间为0.20~4.0μg/L;加标回收试验结果显示,传感器对MC-LR的回收率为(100±20)%,且平行测定的相对标准偏差小于5%;此传感器长期连续运行稳定,监测数据可靠,揭示了太湖水体中MC-LR浓度季节变化规律,可满足饮用水源地中MC-LR的检测要求。 展开更多
关键词 微囊藻毒素 免疫传感 全内反射荧光 在线监测
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微囊藻毒素-LR的全内反射荧光免疫传感器研究 被引量:5
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作者 宋保栋 盛建武 +3 位作者 廖志民 蔡强 杨海洋 万金保 《环境污染与防治》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期50-54,共5页
在开发全内反射荧光免疫传感器的基础上,研究水中微囊藻毒素-LR(MC-LR)的检测方法.建立了基于MC-LR平面波导免疫芯片的制备方法,并结合流动分析和荧光检测开发检测系统,针对MC-LR的免疫检测条件进行优化.结果表明,全内反射荧光免疫传... 在开发全内反射荧光免疫传感器的基础上,研究水中微囊藻毒素-LR(MC-LR)的检测方法.建立了基于MC-LR平面波导免疫芯片的制备方法,并结合流动分析和荧光检测开发检测系统,针对MC-LR的免疫检测条件进行优化.结果表明,全内反射荧光免疫传感器对MC-LR抗体的检测限为0.001μg/mL;在间接竞争免疫检测模式下,最优检测条件是预反应时间5 min、预反应温度37℃、进样停留时间500 s;在最优检测条件下,对MC-LR的检测限为0.100 μg/L,线性区间为0.200~4.000 μg/L;全内反射荧光免疫传感器检测MC-LR的加标回收率均在100.0%±20.0%,平行测定的相对标准偏差小于5%. 展开更多
关键词 免疫传感器 全内反射荧光 微囊藻毒素-LR 环境监测
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全内反射荧光技术在病毒成像中的应用和比较
14
作者 陈倩 漆洪波 +1 位作者 赵耀 谭彬 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期61-62,共2页
目的:建立以激光为光源的全内反射荧光技术在活体病毒观察示踪的新方法。方法:分别使用普通荧光,激光共聚焦和全内反射荧光显微镜拍摄非洲绿猴肾上皮细胞上的人偏肺病毒,并对图像进行比较。结果:TIRF成像分辨率和时间分辨率上均优于传... 目的:建立以激光为光源的全内反射荧光技术在活体病毒观察示踪的新方法。方法:分别使用普通荧光,激光共聚焦和全内反射荧光显微镜拍摄非洲绿猴肾上皮细胞上的人偏肺病毒,并对图像进行比较。结果:TIRF成像分辨率和时间分辨率上均优于传统荧光以及激光共聚焦,但只能观察到邻近培养介质的病毒,使用条件受到一定的限制。结论:全内反射荧光显微技术可以用于病毒成像,为研究病毒、细菌等病原微生物感染机制提供了直观有效的技术手段。 展开更多
关键词 全内反射荧光 隐失波 病毒成像
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膜片钳技术结合全内反射荧光成像技术在单细胞胞吐活动研究中的应用
15
作者 维力斯 《内蒙古科技与经济》 2012年第19期96-98,共3页
介绍了膜片钳和全内反射荧光成像的工作原理、实验技术,以及这两种技术的结合在单细胞胞吐研究中的应用,并对其发展前景进行了展望。
关键词 生物物理学 膜片钳技术 全内反射荧光成像技术
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全内反射荧光法的发展及其应用
16
作者 姚闽娜 李耀群 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第z1期317-320,共4页
全内反射荧光法是空间分辨荧光分析技术中重要的部分,该技术突破了传统荧光分析的局限,为获得空间定位信息提供了技术保障.该文系统地综述了全内反射荧光法的原理,特点,发展进程及其应用.引用文献37篇.
关键词 全内反射荧光 空间分辨荧光 综述
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浅谈全内反射荧光显微术在DNA复制研究中的应用
17
作者 卓月 《中国新通信》 2019年第7期241-242,共2页
传统生物学方法的研究结果来自于集群平均,但生物化学反应是一个动态的过程,因此反应过程中很多瞬时的中间过程往往被传统的生物学研究方法所忽略。单分子技术在生物学中的应用,使得对反应过程进行实时观测成为了可能。本文以全内反射... 传统生物学方法的研究结果来自于集群平均,但生物化学反应是一个动态的过程,因此反应过程中很多瞬时的中间过程往往被传统的生物学研究方法所忽略。单分子技术在生物学中的应用,使得对反应过程进行实时观测成为了可能。本文以全内反射荧光显微术在DNA复制研究中的应用为例,来探讨单分子技术在生物学研究中的重要作用。 展开更多
关键词 单分子技术 全内反射荧光显微术 DNA复制 实时 动态
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全内反射荧光显微术应用于单分子荧光的纵向成像 被引量:9
18
作者 王琛 王桂英 徐至展 《物理学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2004年第5期1325-1330,共6页
在模拟荧光分布的高帽形 (top hat)模型的基础上提出了隐失场中模拟荧光分子球体的数学方法 .基于此模型 ,提出了将全内反射荧光显微术应用于单分子荧光成像中 ,利用这种显微术中激发场的纵向强度呈指数衰减的分布特性 ,测得的荧光强度... 在模拟荧光分布的高帽形 (top hat)模型的基础上提出了隐失场中模拟荧光分子球体的数学方法 .基于此模型 ,提出了将全内反射荧光显微术应用于单分子荧光成像中 ,利用这种显微术中激发场的纵向强度呈指数衰减的分布特性 ,测得的荧光强度将强烈依赖渗透深度 (强度衰减到 1 e时的距离 ) ,从而快速直接的确定单分子荧光团间的纵向间隔、每个荧光团的纵向绝对位置和荧光团的半径大小 ,即实现荧光分子三维分布的重构 .在整个重构的过程中 ,只需要改变一次入射角的大小 ,即只需探测两幅荧光分子的全内反射成像 . 展开更多
关键词 全内反射荧光显微术 单分子荧光 纵向重构 高帽形模型 隐失场 纵向强度 渗透深度
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全内反射荧光显微术在活细胞单分子检测中的应用 被引量:1
19
作者 周璇 王磊 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2010年第4期662-667,共6页
全内反射荧光显微术(total internal reflection fluorescence microscopy,TIRFM)是一种灵敏、快速的单分子成像和检测技术,近年来得到迅猛发展。该技术已广泛应用于生命科学、化学、物理学等领域。本文综述了全内反射荧光显微术的原理... 全内反射荧光显微术(total internal reflection fluorescence microscopy,TIRFM)是一种灵敏、快速的单分子成像和检测技术,近年来得到迅猛发展。该技术已广泛应用于生命科学、化学、物理学等领域。本文综述了全内反射荧光显微术的原理及其在活细胞单分子检测中的应用,并对其发展前景进行了展望。 展开更多
关键词 单分子检测 全内反射荧光显微术 活细胞
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全内反射双通道观察双标记荧光染色的非洲绿猴肾细胞
20
作者 刘晓晨 关立照 +1 位作者 马页云 张宏权 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第10期2676-2679,共4页
在像增强型电荷耦合器件(ICCD)荧光显微成像装置上用双通道成像方法观察了非洲绿猴肾细胞(COS-7)中由EGFP转染的肌球蛋白Myosin 15a,以及Rhodamine标记的细胞微丝。为观察微丝尖端的肌球蛋白Myosin 15a,采用了高灵敏、低损伤的全内反射... 在像增强型电荷耦合器件(ICCD)荧光显微成像装置上用双通道成像方法观察了非洲绿猴肾细胞(COS-7)中由EGFP转染的肌球蛋白Myosin 15a,以及Rhodamine标记的细胞微丝。为观察微丝尖端的肌球蛋白Myosin 15a,采用了高灵敏、低损伤的全内反射激发荧光显微成像技术,并在双通道中选用合适滤光片组合消除两种荧光染料间的光谱串扰。实验观测到非洲绿猴肾细胞内过表达的肌球蛋白Myosin 15a和伸长的微丝的分布情况,尤其是清晰观察到Myosin 15a在微丝上的分布。为全内反射双通道荧光成像技术在生命科学中的应用展示了广阔的前景。 展开更多
关键词 全内反射荧光(TIRF) 双通道 肌球蛋白 微丝
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