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鸭圆环病毒全基因组克隆与序列分析 被引量:41
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作者 傅光华 程龙飞 +3 位作者 施少华 彭春香 陈红梅 黄瑜 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期138-143,共6页
为研究鸭圆环病毒全基因组的分子生物学特性,运用重叠PCR技术从鸭组织脏器提取的DNA中扩增出2条核苷酸序列,拼接后对其核酸组成、基因组结构及病毒的遗传变异进行分析。结果表明所获病毒核酸为大小1995nt的环型DNA,包含6个ORF,与登录在G... 为研究鸭圆环病毒全基因组的分子生物学特性,运用重叠PCR技术从鸭组织脏器提取的DNA中扩增出2条核苷酸序列,拼接后对其核酸组成、基因组结构及病毒的遗传变异进行分析。结果表明所获病毒核酸为大小1995nt的环型DNA,包含6个ORF,与登录在GenBank中克隆株MuDCV(AY228555)的同源性高达97·4%,可见所扩增的核酸序列为鸭圆环病毒基因组序列。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒 全基因组克隆 序列分析
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猪Ⅱ型圆环病毒豫A株的全基因组克隆与序列分析 被引量:14
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作者 曹胜波 陈焕春 +3 位作者 肖少波 赵俊龙 吕建强 钱平 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期137-141,共5页
参照国外发表的猪Ⅱ型圆环病毒 (porcinecircovirustype 2 ,PCV - 2 )全基因组序列 ,设计一对PCV - 2特异性引物 ,用该室分离的PCV - 2豫A株感染PK - 15细胞 ,从中提取PCV - 2复制型基因组DNA ,并以之为模板进行PCR扩增。回收PCR产物 ,... 参照国外发表的猪Ⅱ型圆环病毒 (porcinecircovirustype 2 ,PCV - 2 )全基因组序列 ,设计一对PCV - 2特异性引物 ,用该室分离的PCV - 2豫A株感染PK - 15细胞 ,从中提取PCV - 2复制型基因组DNA ,并以之为模板进行PCR扩增。回收PCR产物 ,构建重组测序质粒T -PCV - 2。测序结果表明 ,猪Ⅱ型圆环病毒豫A株的全基因组为 176 7bp ,与GenBank收录的PCV - 2国外分离株核苷酸的同源性可高达 97%。序列分析表明 ,复制型豫A株的基因组包含 10个读码框架 ,其中ORF1、ORF2是其两个最主要的读码框架 ,分别编码 314、2 34个氨基酸。豫A株和PCV - 1间的ORF1、ORF2的氨基酸序列同源性分别为 85 %、6 6 % ,与其它PCV - 2毒株间的ORF1氨基酸同源性均在 98%以上 ,而ORF2的氨基酸同源性为 92 %~ 97%。 展开更多
关键词 猪Ⅱ型圆环病毒豫A株 全基因组克隆 序列分析 PCV-2
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在MDCK细胞上高产的乙型流行性感冒病毒株的筛选及其全基因组克隆 被引量:9
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作者 齐立 吴昆昱 +4 位作者 李梓 张烨 董婕 张立国 张智清 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期195-199,共5页
流行性感冒(流感)病毒可引起世界范围的大流行,因此需要及时地生产流感疫苗来预防流感的流行。乙型流感病毒是疫苗的重要组成部分。传统制备疫苗的方法是使用鸡胚生产,存在很多缺陷,应用哺乳动物细胞生产流感疫苗是个更好的选择。但是,... 流行性感冒(流感)病毒可引起世界范围的大流行,因此需要及时地生产流感疫苗来预防流感的流行。乙型流感病毒是疫苗的重要组成部分。传统制备疫苗的方法是使用鸡胚生产,存在很多缺陷,应用哺乳动物细胞生产流感疫苗是个更好的选择。但是,乙型流感病毒感染MDCK细胞后,很难得到持续的高产。此实验筛选到的乙型流感病毒在MDCK细胞连续传代15代后,PFU值从第1代的8×104到第15代2×109,TCID50从第1代6 5到第15代的8 0。将筛选到的毒株进行全基因组克隆,用两套引物获得乙型流感病毒的全部8个节段。此结果为利用反向遗传技术将高产毒株与流行毒株重配,进而在哺乳动物细胞上生产基因工程流感疫苗打下基础。 展开更多
关键词 流行性感冒 病毒 乙型流感 毒株 通用引物 哺乳动物细胞 疫苗 全基因组克隆
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猪圆环病毒2型分离毒株全基因组克隆与序列分析
4
作者 罗玉均 张桂红 +4 位作者 陈建红 杨林 廖明 任涛 罗开健 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第5期14-16,共3页
关键词 猪圆环病毒2型 分离毒株 全基因组克隆 序列分析 断奶猪多系统衰竭综合征 PCV2 DNA病毒 细胞培养物
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1株圆环病毒3型美国毒株全基因组克隆与遗传演化分析 被引量:1
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作者 郑晶 郝桂英 +8 位作者 谢礼 安微 杨苗 陈瑛琪 张婧 郑巧 陈溪 陈孝宇 林华 《中国动物检疫》 CAS 2022年第1期116-123,共8页
为了解进口美国种猪中获取的猪圆环病毒3型(PCV3)毒株全基因组序列及遗传变异情况,根据GenBank中收录的PCV3基因组序列,设计2对特异性引物,对确诊感染PCV3的病死猪组织进行全基因组序列扩增、拼接、测序和序列分析。结果显示,获得的PCV... 为了解进口美国种猪中获取的猪圆环病毒3型(PCV3)毒株全基因组序列及遗传变异情况,根据GenBank中收录的PCV3基因组序列,设计2对特异性引物,对确诊感染PCV3的病死猪组织进行全基因组序列扩增、拼接、测序和序列分析。结果显示,获得的PCV3美国毒株(命名为PCV3_USA2021,GenBank登录号OL799306)全基因组序列长度约为2000 bp,与国内外不同地区的38个PCV3参考毒株同源性为98.7%~99.8%。其中,PCV3_USA2021株开放阅读框ORF1和ORF2与国内外38个参考毒株同源性分别为99.1%~99.9%和98.0%~100%。构建的全基因组系统进化树显示,该毒株为PCV3a亚型,与美国毒株(PCV3-US_SD2016)亲缘关系最近。本研究为PCV3的遗传变异、流行病学分析提供了参考,也为相关疫苗的研制打下了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 全基因组克隆 遗传演化分析 CAP蛋白 美国毒株
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BVDV Singer_Arg株全基因组克隆及其感染性RNA制备
6
作者 秦春雪 宋现梅 +3 位作者 王洪梅 丁乃峥 何洪彬 何成强 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第5期43-49,共7页
克隆牛病毒性腹泻病毒Singer_Arg株全长cDNA,并获得其感染性RNA。将病毒基因组分段克隆后再拼接成全长cDNA;通过巨细胞病毒即早期启动子控制病毒cDNA转录,5'-UTR上游的锤头状核酶和3'-UTR下游的丁肝病毒核酶控制转录产物5'-... 克隆牛病毒性腹泻病毒Singer_Arg株全长cDNA,并获得其感染性RNA。将病毒基因组分段克隆后再拼接成全长cDNA;通过巨细胞病毒即早期启动子控制病毒cDNA转录,5'-UTR上游的锤头状核酶和3'-UTR下游的丁肝病毒核酶控制转录产物5'-UTR和3'-UTR的完整性和准确性,以获得不经体外转录,直接转染细胞产生病毒感染性RNA的反向遗传操作系统;并通过Western blot、RT-PCR技术、免疫荧光等方法对子代病毒进行了一系列鉴定与遗传稳定性分析。获得了Singer_Arg株全基因组序列并通过反向遗传拯救出该毒株。成功构建了基于Singer_Arg株的BVDV反向遗传操作系统,为BVDV疫苗研发和基础研究提供了技术平台。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 反向遗传学 全基因组克隆
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IBDV全基因组克隆、反向遗传系统的建立及基因缺失疫苗研究
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《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期229-229,共1页
传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)是传染性法氏囊病的病原,该病是目前危害世界养禽业的主要传染病之一。
关键词 全基因组克隆 基因缺失疫苗 IBDV 遗传系统 传染性法氏囊病病毒 virus 传染病 养禽业
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九株猪圆环病毒Ⅱ型流行毒株全基因组克隆及序列分析
8
作者 秦春圃 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第2期217-217,共1页
广西大学动物科技学院严业师、黄伟坚和屈素洁等科研工作者参考GenBank发表的猪圆环病毒Ⅱ型Porcine circovirus2.PCV2全基因组序列.设计一对引物.通过反向PCR技术扩增出9株PCV2流行株的全基因,并进行了序列测定与分析。结果发现9株... 广西大学动物科技学院严业师、黄伟坚和屈素洁等科研工作者参考GenBank发表的猪圆环病毒Ⅱ型Porcine circovirus2.PCV2全基因组序列.设计一对引物.通过反向PCR技术扩增出9株PCV2流行株的全基因,并进行了序列测定与分析。结果发现9株PCV2的基因组全长为1768bp或1767bp,同源性比较发现.这9株PCV2之间的核苷酸同源性为95.6%~100%, 展开更多
关键词 猪圆环病毒Ⅱ型 全基因组克隆 序列分析 流行毒株 GENBANK PCV2 动物科技学院 基因组序列
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百合无症病毒大连分离物全基因组克隆及其序列分析 被引量:3
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作者 徐品三 吕文霞 +2 位作者 夏秀英 李焕改 贾娟 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期641-644,共4页
百合无症病毒(Lily symptomless virus,LSV)属于香石竹潜隐病毒属(Carlavirus),是严重影响百合生长的主要病毒之一。LSV由美国Brierley和Smith首次从俄勒冈州带有坏死斑点的百合中分离得到。此后,在世界各地均有报道,我国江南... 百合无症病毒(Lily symptomless virus,LSV)属于香石竹潜隐病毒属(Carlavirus),是严重影响百合生长的主要病毒之一。LSV由美国Brierley和Smith首次从俄勒冈州带有坏死斑点的百合中分离得到。此后,在世界各地均有报道,我国江南、江北以及东北各地也有发生。LSV不会引起百合植株产生明显症状,但会使鳞茎变小,严重退化。 展开更多
关键词 百合无症病毒 全基因组克隆 分离物 序列分析 大连 VIRUS SMITH 潜隐病毒
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HIV-1 B′亚型CNHN24毒株5′端和3′端长末端重复序列的测定及全基因组克隆的构建
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作者 王铮 李韩平 +4 位作者 李林 董华凰 鲍作义 刘思扬 李敬云 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2005年第6期512-515,共4页
目的:对我国H IV-1B′亚型CNHN24毒株5′端和3′端长末端重复序列(LTR)进行扩增及测序并构建全基因组克隆。方法:利用PCR扩增出5′LTR和3′LTR片段;并利用高保真DNA聚合酶分别扩增出病毒全基因组的5′半分子和3′半分子DNA,然后依次将... 目的:对我国H IV-1B′亚型CNHN24毒株5′端和3′端长末端重复序列(LTR)进行扩增及测序并构建全基因组克隆。方法:利用PCR扩增出5′LTR和3′LTR片段;并利用高保真DNA聚合酶分别扩增出病毒全基因组的5′半分子和3′半分子DNA,然后依次将其克隆入低拷贝载体pLG338。结果与结论:完成CNHN24毒株5′LTR和3′LTR的测序并提交至GenBank,其登录号分别为AY860947和AY894352,使CNHN24株成为具有完整全序列的H IV毒株;获得可以稳定传代的全基因组克隆质粒pCN24,利用此克隆转染293T细胞后可以产生恢复病毒。 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒 长末端重复序列 全基因组克隆
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中国首次分离的辛德毕斯病毒XJ-160病毒株感染性全基因组cDNA克隆的构建与分析 被引量:10
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作者 杨益良 梁国栋 +6 位作者 付士红 何海怀 李晓宇 邓娟 苏乃伦 王力华 侯云德 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期173-180,共8页
报告了中国首次分离的辛德毕斯病毒XJ-160株的感染性全基因组cDNA克隆的构建与鉴定.利用RT-PCR方法获得覆盖病毒全长基因组的cDNA片段,以低拷贝质粒pBR322作为骨架,将基因组cDNA置于SP6 RNA聚合酶启动子之后,基因组3'末端带有35个... 报告了中国首次分离的辛德毕斯病毒XJ-160株的感染性全基因组cDNA克隆的构建与鉴定.利用RT-PCR方法获得覆盖病毒全长基因组的cDNA片段,以低拷贝质粒pBR322作为骨架,将基因组cDNA置于SP6 RNA聚合酶启动子之后,基因组3'末端带有35个连续的A,通过DNA重组技术组装成病毒基因组全长cDNA克隆.该克隆可在大肠杆菌DH5a中稳定扩增.经体外转录,RNA转录体转染BHK-21细胞,细胞发生病变,恢复病毒滴度达到107~108pFU/ml.全基因组cDNA克隆构建过程中引入的沉默突变(8 453位核苷酸由C变为T)产生Xba Ⅰ酶切位点作为遗传标记,在子代恢复病毒的基因组中稳定存在.从细胞病变的特征、BHK-21细胞的空斑形态、病毒的抗原性、病毒在细胞中的生长动力学特征以及对乳鼠的致病性等方面比较,恢复病毒和亲本病毒XJ-160没有显著区别,提示获得了具有感染性的XJ-160病毒全长cDNA克隆.该病毒感染性全基因组cDNA克隆可以作为反向遗传学系统,为进一步研究病毒复制和致病机制,以及开发相应的载体表达系统提供分子生物学工具. 展开更多
关键词 感染性基因组cDNA克隆 恢复病毒 辛德毕斯病毒 XJ-160病毒株 中国 分离
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10株猪圆环病毒2型(PCV2)河南株全基因组的克隆与序列分析 被引量:5
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作者 陈陆 彭志锋 +5 位作者 杨霞 陈圆圆 王宏魁 孙彦婷 郑鹿平 王川庆 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期166-173,共8页
为了解猪圆环病毒2型(PCV2)河南株的起源及遗传变异,从河南省不同临床表现的病猪中克隆了10株PCV2的全基因组,并对其进行了序列测定及分析。结果表明,河南株之间以及与中国其他地区PCV2流行株之间同源性均很高;河南株均处于欧洲分支中,... 为了解猪圆环病毒2型(PCV2)河南株的起源及遗传变异,从河南省不同临床表现的病猪中克隆了10株PCV2的全基因组,并对其进行了序列测定及分析。结果表明,河南株之间以及与中国其他地区PCV2流行株之间同源性均很高;河南株均处于欧洲分支中,提示PCV2河南株可能起源于欧洲株;河南省不同年份的PCV2中确实存在一定的基因差异,但PCV2全基因组从总体上来说遗传进化相对稳定;河南省猪群中与PCV相关的疾病不是由PCV2变异毒株引起的。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 全基因组克隆 序列分析
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三株传染性法氏囊病病毒超强毒株全基因组的克隆与序列分析 被引量:4
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作者 高立 李凯 +5 位作者 祁小乐 高玉龙 高宏雷 王永强 孔宪刚 王笑梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期887-894,共8页
为了获得本实验室3株(HuB-1、HeB10XS02、SD10LY01)传染性法氏囊病病毒(IBDV)分离毒株的全基因组序列,并了解其序列特征,首先测定了这3株毒株对SPF鸡的致死率,然后利用融合PCR技术扩增获得全基因组序列,对其进行遗传进化分析。结果显示,... 为了获得本实验室3株(HuB-1、HeB10XS02、SD10LY01)传染性法氏囊病病毒(IBDV)分离毒株的全基因组序列,并了解其序列特征,首先测定了这3株毒株对SPF鸡的致死率,然后利用融合PCR技术扩增获得全基因组序列,对其进行遗传进化分析。结果显示,3株毒株对SPF鸡的致死率均在60%以上,为IBDV超强毒株(vvIBDV)。遗传进化分析表明,3株分离毒株的A节段均位于超强毒分支。IBDV的B节段分为明显的3个亚群,其中HuB-1、SD10LY01的B节段属于第Ⅲ亚群,HeB10XS02的B节段则属于第Ⅱ亚群。第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亚群之间在VP1蛋白上存在17个保守氨基酸差异位点,其中第145~147位氨基酸形成独特的'三联体'基序,不同亚群具有不同的基序。本研究结果为更好地了解vvIBDV基因组特征以及致病性分子基础的研究提供了重要理论依据。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒超强毒株(vvIBDV) 全基因组克隆 序列分析
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福建省分离的HIV-1 Thai-B亚型感染性克隆的构建及序列分析
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作者 吴守丽 颜苹苹 +2 位作者 黄海龙 王惠榕 严延生 《海峡科学》 2010年第10期259-262,272,共5页
中国自1985年出现第一例艾滋病病人以来[1],20多年来艾滋病流行经历了传入期、播散期和快速增长期三个阶段,全国31个省、市、自治区均有病例报告。截至2009年底,
关键词 HIV-1 Thai-B 转染 全基因组克隆 亚型 缺陷病毒 感染性 福建省疾病预防控制中心 序列分析
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肠道病毒71型武汉分离株(EV71-WH029)全基因组cDNA克隆及序列分析 被引量:6
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作者 李江 刘希佳 +1 位作者 刘海舟 刘万红 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第2期102-108,共7页
目的对肠道病毒71型武汉分离株(EV71-WH029)进行全基因组克隆、序列测定及分析,了解其基因组结构和遗传进化特征,并初步探索EV71毒力相关位点。方法采用RT-PCR扩增覆盖基因组全长的cDNA片段,利用Over-lap extension PCR得到WH029全基... 目的对肠道病毒71型武汉分离株(EV71-WH029)进行全基因组克隆、序列测定及分析,了解其基因组结构和遗传进化特征,并初步探索EV71毒力相关位点。方法采用RT-PCR扩增覆盖基因组全长的cDNA片段,利用Over-lap extension PCR得到WH029全基因组cDNA克隆;cDNA片段测序后利用BioEdit 4.8.8和MEGA 5.2.2等软件进行序列分析和遗传进化分析;采用Fisher's exact test进行编码区氨基酸变异位点的统计分析;采用RNAfold服务器进行非编码区二级结构分析。结果 WH029分离株基因组全长7 406nt(未包含多聚腺苷酸尾),5′-和3′-UTR分别为743nt和81nt,中间为一个全长6 582nt开放阅读框(ORF),编码一个长度为2 194aa的多聚蛋白,编码区无核苷酸的缺失或插入;该毒株与安徽阜阳株EU703813及上海株JQ736684的核苷酸及氨基酸序列同源性均最高(分别为97.53%-100%和97.41%-99.73%),系统进化分析也表明该毒株与以上两株的亲缘关系最近;编码区氨基酸序列分析发现有7个位点变异。非编码区的二级结构预测提示,该区域的核苷酸位点变异与毒力无直接相关性,而与地域有相关性。结论 WH029分离株全基因组结构符合EV71病毒特征,经序列比对及进化分析证实WH029分离株属于EV71C4a基因亚型,并推断该株可能来源于2008年安徽HFMD疫情。对不同临床症状的EV71毒株序列的比较分析提示,EV71毒力与编码区单一位点的突变及非编码区二级结构的变异无直接相关性,可能与多位点突变共同作用及患者的个体差异相关。 展开更多
关键词 肠道病毒71型 基因组cDNA克隆 生物信息学分析 毒力
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一种新的柯萨奇病毒A组16型中国湖北分离株(CV-A16WH16)全基因组序列测定及分析
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作者 刘希佳 何小华 刘万红 《中国病毒病杂志》 CAS 2015年第2期96-103,共8页
目的对分离自2010年中国湖北手足口患者的柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CVA16)病毒WH16株进行全基因组克隆、序列测定及进化分析。方法利用RT-PCR扩增覆盖基因组全长的cDNA片段,利用Over-lap PCR进行分步连接,得到CV-A16 WH16... 目的对分离自2010年中国湖北手足口患者的柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CVA16)病毒WH16株进行全基因组克隆、序列测定及进化分析。方法利用RT-PCR扩增覆盖基因组全长的cDNA片段,利用Over-lap PCR进行分步连接,得到CV-A16 WH16的全基因组cDNA克隆。对cDNA克隆进行测序,并利用BioEdit 4.8.8、EditSeq 5.01和MEGA 6.06软件进行序列分析和进化树构建。结果CV-A16 WH16基因组(未包含多聚腺苷酸尾)长度为7 406nt;WH16与CV-A16TS10/07、CV-A16原型株G-10以及EV71原型株BrCr的核苷酸一致性分别为97.7%、79.1%和79.5%,而氨基酸一致性分别为98.9%、94.7%和88.7%。全基因组进化树分析表明,CV-A16 WH16与CV-A16TS10/07亲缘关系最近,与G-10株存在显著差异;开放阅读框核苷酸序列进化树分析表明,CV-A16 WH16与EV71BrCr的亲缘关系较近。结论进化树分析表明,与G-10相比,CV-A16 WH16部分区域的核苷酸序列和BrCr的亲缘关系更近。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A16 基因组cDNA克隆 序列分析 进化树
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山东烟区首次发现番茄斑萎病毒侵染 被引量:6
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作者 张万红 冯佳 +10 位作者 ALI Kamran 罗健达 杨举田 王术科 宗浩 申莉莉 李莹 王凤龙 张石飞 杨金广 金轲 《中国烟草科学》 CSCD 北大核心 2020年第5期87-91,共5页
为确定番茄斑萎病毒(TSWV)在山东烟草上的侵染,基于GenBank中已有的TSWV基因组序列设计该病毒特异性引物,通过总RNA提取,RT-PCR扩增,全基因组序列测定和拼接分析等,结果表明,山东临沂疑似病样中含有TSWV,该TSWV分离物具有3条RNA链,大小... 为确定番茄斑萎病毒(TSWV)在山东烟草上的侵染,基于GenBank中已有的TSWV基因组序列设计该病毒特异性引物,通过总RNA提取,RT-PCR扩增,全基因组序列测定和拼接分析等,结果表明,山东临沂疑似病样中含有TSWV,该TSWV分离物具有3条RNA链,大小分别为8911、4773和2971bp,与国内已报道的其他TSWV分离物核酸序列同源性均在99.0%以上,蛋白氨基酸序列同源性均在98.0%以上。系统进化分析结果显示,该分离物与已报道的TSWV云南分离物聚类到同一分支中,推测山东烟区中的TSWV可能由云南烟区通过带毒介体的迁入而传入。该研究为山东烟区TSWV的发生流行溯源和该危险性病毒病的精准测报及防控提供科学依据。 展开更多
关键词 番茄斑萎病毒(TSWV) 全基因组克隆 系统发育树
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我国部分地区猪圆环病毒2型分离株的遗传变异分析
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《今日畜牧兽医》 2010年第1期68-68,共1页
为了解我国猪圆环病毒2型(PCV2)流行毒株遗传变异情况,本研究对本实验室分离到的19株PCV2分离株通过病毒全基因组克隆和测序分析,将其分为2个大基因群和3个亚群,其基因组分别为1766nt、1767nt和1768nt,各占15.8%、73.7%和10.... 为了解我国猪圆环病毒2型(PCV2)流行毒株遗传变异情况,本研究对本实验室分离到的19株PCV2分离株通过病毒全基因组克隆和测序分析,将其分为2个大基因群和3个亚群,其基因组分别为1766nt、1767nt和1768nt,各占15.8%、73.7%和10.5%。以1767nt毒株为基准,其基因组第39或1039位有1个碱基缺失后突变成1766nt毒株:第1040位有1个碱基插入后突变成1768nt毒株。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 遗传变异分析 分离株 全基因组克隆 流行毒株 测序分析 PCV2 实验室
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Characterization of MyDNMT1 and Changes of Global DNA Methylation during the Embryonic Development in Mizuhopecten yessoensis
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作者 许艺迪 刘卫东 +1 位作者 滕伟鸣 于佐安 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2017年第11期2147-2154,共8页
DNA methylation is a critical epigenetic mechanism that influences gene transcription, genomic stability, X-chromosome inactivation and other factors, and appropriate DNA methylation is crucial in development. DNA met... DNA methylation is a critical epigenetic mechanism that influences gene transcription, genomic stability, X-chromosome inactivation and other factors, and appropriate DNA methylation is crucial in development. DNA methyltransferase 1 (DNMT1) plays an important role in maintaining the established methylation pattern during DNA replication. Although the effect of DNA methylation on embryonic development has been well known in vertebrates, little research has been carried out in invertebrates, especially in marine bivalves. In this study, the DNMT1 gene (MyDNMT1) was firstly identified from Mizuhopecten yessoensis. The full-length cDNA of MyDNMT1 was 5 039 bp, consisted of a 5' untranslated region (5'-UTR) of 79 bp, a 3' untranslated region (3'-UTR) of 199 bp, and a 4 761 bp open reading frame (ORF) encoding a peptide of 1 586 amino acids without a putative signal peptide. The relative mRNA expression level of MyDNMT1 was measured during the embryonic development of M. ydssoensis using real-time PCR, which revealed that the level at stage zygote and trochophore were significantly higher than that at other stages. We further examined the global DNA methylation during development by colorimetric method. The results showed that the methylation level was increased and reached the peak at blastula stage, then dramatically decreased, and fluctuated at early D-shaped larva stage. This study provided greater insight into the DNA methylation of embryonic development, which obtained a better understanding of the relationship between the DNA methylation and the embryonic development in bivalve mollusks. 展开更多
关键词 Mizuhopecten yessoensis DNA methylation DNA (cytosine-5) methyl- transferase 1 CLONING Global DNA methylation
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一个阿罗酸脱水酶调控拟南芥对白粉病的抗性及盐胁迫响应 被引量:1
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作者 梁海菲 王美丛 +1 位作者 陈大清 李勇青 《农业科学》 2018年第9期1092-1098,共7页
白粉病是一种具有广泛宿主的病害,每年给农业生产造成巨大损失。植物对白粉病的抗性主要由水杨酸途径介导,而水杨酸途径的激活常伴随严重的生长缺陷及作物减产。拟南芥pmr5突变体是一个不依赖于水杨酸途径的抗白粉病突变体,pmr5,ps8为... 白粉病是一种具有广泛宿主的病害,每年给农业生产造成巨大损失。植物对白粉病的抗性主要由水杨酸途径介导,而水杨酸途径的激活常伴随严重的生长缺陷及作物减产。拟南芥pmr5突变体是一个不依赖于水杨酸途径的抗白粉病突变体,pmr5,ps8为其回复突变体,表现为感病表型。为了解析pmr5突变体抗病机制,寻找下游关键基因,我们采用传统图位克隆与全基因组测序辅助的图位克隆的方法克隆ps8突变,发现一个阿罗酸脱水酶ADT2 (Arogenate Dehydratase 2)的突变造成了pmr5;ps8的感病表型。前人报道ADT2作为苯丙氨酸合成途径的一个重要基因,调控植物对盐胁迫响应和花青素的积累等多个生物学过程。本研究首次发现ADT2也参与抗病调控。找到不依赖于水杨酸途径的抗白粉病关键基因,有助于培育不依赖于水杨酸途径的抗病作物,力争在抗病的前提下避免作物减产,同时培育多抗作物。 展开更多
关键词 白粉病 基因组测序辅助的图位克隆 阿罗酸脱水酶 盐胁迫
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