大鼠脊髓全横断损伤模型的建立

目前用于脊髓全横断的动物模型,常遗有部分未损脊髓组织,局部脊髓损伤范围很大,尤其是破坏了的血运扩大了继发性变性,造成了复杂的局部病理变化,致使难以分析治疗性脊髓伤区内移植的疗效。因此迫切需要一种还原论式的脊髓横断模型,本实验设计了一种切割辅以吸除的方法,可以在局部造成平均约0.6mm的清洁横断区,同时保存脊髓腹、背动脉及脊髓背静脉的大鼠脊髓横断模型,并用H.E.染色法、神经丝(NF)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的免疫组织化学方法及生物素化的葡萄糖胺(BDA)的追踪方法检验损伤区及其两侧脊髓的组织反应。

脊髓全横断损伤后凋亡因子Fas和FasL的表达变化

本研究通过制备SD大鼠脊髓全横断性损伤模型,应用免疫组织化学ABC法和灰度值测定揭示促凋亡因子Fas和FasL在脊髓完全性损伤后,不同时间点之间的相互变化趋势,以探讨Fas和FasL在脊髓损伤中的作用。结果显示:正常和脊髓全横断损伤后的不同时间组SD大鼠脊髓灰质的前角神经元中均可观察到Fas和FasL的免疫阳性产物。与正常组比较,Fas、FasL阳性神经元细胞数在术后1、3、7、14d组均升高(P<0.05),21d组则降低(P<0.05)。前角Fas、FasL阳性神经元的灰度值在术后1、3、7d组较正常组降低(P<0.05),14、21d组无显著性差异(P>0.05)。结果提示大鼠脊髓全横断损伤后,在损伤节段尾侧脊髓前角神经元Fas与FasL的表达经历了由增高到降低的过程,Fas和FasL表达增加有诱导神经细胞凋亡的趋势,可能参与诱导了脊髓继发性损伤。

嗅鞘细胞移植对脊髓全横断损伤大鼠大脑运动皮质胰岛素样生长因子1和睫状神经营养因子表达的影响

背景:多项研究已证实嗅鞘细胞能促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,但其分子机制还不清楚。目的:观察嗅鞘细胞移植对脊髓全横断大鼠大脑运动皮质神经营养因子胰岛素样生长因子1和睫状神经营养因子mRNA表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/2008-12在昆明医学院神经科学研究所完成。材料:清洁级健康成年雌性SD大鼠88只,随机分成3组:假手术组8只、模型组40只、细胞移植组40只。另取新生一两天的GFP转基因小鼠5只用于分离培养嗅鞘细胞。方法:模型组、细胞移植组大鼠建立T9脊髓全横断损伤模型,假手术组仅行T8椎板切除。造模后,细胞移植组吸取嗅鞘细胞悬液15μL(约3×105个细胞)滴加到约2mm3的明胶海绵上,将含有嗅鞘细胞的明胶海绵植入大鼠脊髓两横断面之间的间隙处。分别于移植后3,7,14,21,28d取大脑运动皮质行RT-PCR检测。主要观察指标:采用免疫细胞化学法对培养的嗅鞘细胞进行鉴定,RT-PCR法检测大脑运动皮质胰岛素样生长因子1和睫状神经营养因子mRNA的表达变化。结果:培养的嗅鞘细胞p75-NGFR阳性率>90%,主要为双极细胞,突起较长。与假手术组比较,模型组术后3d睫状神经营养因子表达明显升高,7,14,21d降至无明显差异,至28d明显降低(P<0.05);术后各时间模型组胰岛素样生长因子1的表达无明显差异(P>0.05)。与模型组比较,移植后14d细胞移植组胰岛素样生长因子1表达明显增多(P<0.05);移植后3d睫状神经营养因子的表达明显减少(P<0.05),但移植后7,14,21d表达逐渐回升,至28d明显高于模型组水平(P<0.05)。结论:嗅鞘细胞移植能够促进脊髓损伤修复,其机制可能与促进大脑运动皮质胰岛素样生长因子1mRNA的表达上调,并在初期抑制睫状神经营养因子mRNA的表达有关。

嗅鞘细胞移植脊髓全横断损伤大鼠大脑皮质运动区转化生长因子β表达的影响

背景:多项研究已证实嗅鞘细胞能促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,但其分子机制还不清楚。目的:观察嗅鞘细胞移植对脊髓全横断大鼠大脑皮质运动区转化生长因子βmRNA表达的影响。方法:采用酶消化法培养GFP转基因小鼠嗅鞘细胞,制成细胞悬液。建立SD大鼠T9脊髓全横断模型,造模后分为假手术组、模型组和嗅鞘细胞移植组。应用RT-PCR方法检测各组大鼠大脑皮质运动区转化生长因子βmRNA的表达变化,用β-actin作内参。结果与结论:模型组大鼠造模后3d大脑皮质运动区转化生长因子βmRNA的表达量高于假手术组(P<0.05),造模后7,14,21和28d回到假手术组水平。嗅鞘细胞移植后21d,嗅鞘细胞移植组转化生长因子βmRNA的表达量低于模型组(P<0.05)。提示全横断脊髓损伤致大脑皮质运动区转化生长因子βmRNA早期表达上调,随后与假手术组相比无差别;嗅鞘细胞移植后期可逆转转化生长因子βmRNA的表达变化,有助于脊髓损伤的恢复。

督脉电针治疗大鼠全横断性脊髓损伤的实验研究

目的 :探讨督脉电针对大鼠全横断性脊髓损伤的行为和结构修复的影响。方法 :用BBB评分法和爬网格试验检测全横断性脊髓损伤及督脉电针治疗后大鼠的运动功能 ,荧光金逆行标记法检测再生神经元 ,用生长相关蛋白 43 (GAP 43 )免疫组织化学法观察脊髓损伤区周围神经元GAP 43的表达。结果 :督脉电针治疗后大鼠后肢运动功能有明显地恢复 ,损伤区脊髓组织退变减轻 ,躯体感觉运动区内锥体细胞层及红核内的神经元密度增大 ,脊髓组织内GAP 43阳性神经元增多 ,在脊髓横断头侧端灰质内、躯体运动感觉区及红核内有少量被标记细胞。结论 :督脉电针治疗可减轻脊髓损伤后的继发性损伤 。

神经干细胞与NT-3基因修饰雪旺细胞联合移植促进全横断脊髓损伤大鼠功能修复的实验研究

目的:探讨神经干细胞(NSCs)与神经营养素-3(NT-3)基因修饰雪旺细胞(SCs)联合移植对全横断脊髓损伤大鼠的后肢运动及神经传导功能修复的作用。方法:将NSCs与NT-3基因修饰SCs或未基因修饰SCs联合移植,或NSCs单独移植到大鼠全横断性脊髓损伤处,60d后进行爬网格测验和BBB评分检测运动功能。第67d,进行皮质运动诱发电位(CMEP)和皮质感觉诱发电位(CSEP)检测脊髓的神经传导功能。结果:脊髓损伤大鼠后肢的运动功能及CMEP和CSEP的修复程度依次为NSCs与NT-3基因修饰SCs联合移植组,NSCs与未基因修饰SCs联合移植组,NSCs单独移植组和实验对照组。结论:NSCs与NT-3基因修饰SCs联合移植能够促进脊髓损伤后大鼠的后肢运动及神经传导功能的修复。

督脉电针治疗大鼠全横断性脊髓损伤的实验研究

目的 探讨督脉电针对大鼠全横断性脊髓损伤的行为和结构修复的影响。方法 用BBB评分法和爬网格试验检测全横断性脊髓损伤及督脉电针治疗后大鼠的运动功能 ,荧光金逆行标记法检测再生神经元 ,用生长相关蛋白 - 43(GAP - 43)免疫组织化学夫观察脊髓损伤区周围神经元GAP - 43表达。结果 督脉电针治疗后大鼠后肢运动功能有明显地恢复 ,损伤区脊髓组织退变减轻 ,躯体感觉运动区内锥体细胞层及红核内的神经元密度增大 ,脊髓组织内GAP - 43阳性神经元增多 ,在脊髓横断头侧端灰质内、躯体运动感觉区及红核内有少量被标记细胞。结论 督脉电针治疗可减轻脊髓损伤后的继发性损伤 ,促进脊髓下行纤维再生和脊髓功能恢复。

预防使用米诺环素对胸段脊髓全横断大鼠运动功能恢复的影响

目的:观察预防使用米诺环素对脊髓全横断大鼠运动功能的作用。方法:30只雄性Wistar大鼠随机分为3组,假手术组、脊髓横断模型组和米诺环素预处理组,每组10只大鼠。米诺环素预处理组大鼠术前腹腔注射米诺环素(90mg/kg)。各组大鼠于术后1、7、14、21d应用改良Tarlov评分和BBB评分方法对大鼠后肢行为功能进行评价。第22d将所有实验大鼠处死后取损伤段脊髓,行HE染色。结果:术后第1d,脊髓横断模型组和米诺环素预处理组大鼠Tarlov评分障碍率、BBS评分比较无明显差别(P>0.05);米诺环素预处理组术后第7d到第21dTarlov评分障碍率明显低于脊髓横断模型组,BBB评分明显高于脊髓横断模型组(P<0.01)。HE染色结果显示,脊髓横断模型组大鼠脊髓出现明显病理变化,米诺环素预处理组大鼠脊髓的病理变化明显减轻。结论:预防使用米诺环素可明显促进胸段脊髓横断大鼠运动功能的恢复。

神经干细胞移植联合腹腔注射促红细胞生成素对横断性脊髓损伤大鼠神经轴突的修复作用

目的:探讨神经干细胞(NSCs)与促红细胞生成素(EPO)共同作用于横断性脊髓损伤大鼠后对损伤区轴突的修复作用,为临床治疗脊髓损伤提供理论依据。方法:40只雌性成年Wistar大鼠,建立T10全横断大鼠脊髓损伤模型后,随机分为对照组、NSCs组、EPO组和联合治疗组,每组10只。术后8周采用BDA皮质脊髓束顺行追踪法和荧光金(FG)皮质脊髓束逆行追踪法评估损伤区脊髓神经轴突再生情况,同时分期采用实验性脊髓损伤运动功能BBB评分法评价大鼠后肢功能恢复情况。结果:BDA免疫荧光染色和FG免疫荧光染色,联合治疗组可见大量被BDA-cy3红色荧光标记的再生轴突,其中部分再生轴突穿越损伤区到达远端;NSCs组仅见少量轴突再生,无神经轴突通过脊髓损伤区;EPO组偶见散在的神经纤维再生;对照组无明显的轴突再生。联合治疗组大脑皮质中可见少量被FG标记的椎体细胞及轴突发出金黄色荧光,其余3组大脑皮质中无FG标记细胞。大鼠后肢功能BBB评分,在术后1周及1周以后各时段,联合治疗组大鼠BBB评分均高于其他各组(P<0.05)。结论:脊髓损伤后移植NSCs联合腹腔注射EPO可有效促进脊髓损伤区神经轴突的再生以及脊髓损伤大鼠后肢运动功能的恢复。

神经干细胞移植影响脊髓全横断大鼠大脑运动皮质相关凋亡基因的表达

背景:多项研究已证实神经干细胞能促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,但其分子机制还不清楚。目的:观察神经干细胞移植对脊髓全横断损伤大鼠大脑运动皮质相关凋亡基因Bax,Bcl-2和Caspase-3mRNA表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/2008-12在昆明医学院神经科学研究所完成。材料:孕14～15d绿色荧光蛋白转基因鼠5只,取其胚胎用于神经干细胞培养。清洁级健康成年雌性SD大鼠88只,随机分成3组:假手术组8只、模型组40只、细胞移植组40只。方法:模型组、细胞移植组大鼠建立T9脊髓全横断脊髓损伤模型,假手术组只行T8椎板切除。用DMEM/F12调整胎鼠神经干细胞密度为2×1010L-1,吸取细胞悬液15μL滴加到约2mm3大小的明胶薄片上,细胞移植组将此明胶薄片植入大鼠脊髓两横断面之间的间隙处。分别于细胞移植后3,7,14,21,28d取材进行指标检测。主要观察指标:RT-PCR法检测大脑运动皮质Bax,Bcl-2和Caspase-3mRNA表达的变化。结果:与假手术组比较,模型组各时间点Bax的表达均无明显差异(P>0.05),术后14,28dBcl-2的表达明显减少(P<0.05),术后3dCaspase-3的表达明显升高(P<0.05)。与模型组比较,细胞移植组在神经干细胞移植后3dBax的表达明显减少(P<0.05),移植后14,21dBcl-2的表达明显增高(P<0.05),移植后3,7dCaspase-3的表达明显减少(P<0.05)。结论:神经干细胞移植后,可能通过调控大脑运动皮质相关凋亡基因Bax,Bcl-2和Caspase-3mRNA的表达促进大鼠全横断脊髓损伤修复。

大鼠脊髓横断模型的建立及米诺环素对胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的:观察米诺环素干预对脊髓横断大鼠行为功能和横断部位胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响.方法:雄性Wistar大鼠随机分为3组,假手术组、模型组和米诺环素预处理组.米诺环素预处理组大鼠术前腹腔注射米诺环素(90 mg/kg).各组大鼠于术后1、7、14、21d应用Molt斜板试验和BBB评分方法对大鼠后肢行为功能进行评价.第22天将所有实验大鼠处死后取损伤段脊髓,H-E染色观察其病理变化、免疫组织化学检测GFAP的表达.结果:术后第1天模型组和米诺环素预处理组大鼠Molt斜板障碍率无明显差别,BBB运动功能评分也无明显差别;而米诺环素预处理组术后第7天到第21天Molt斜板障碍率较模型组有明显下降,且BBB运动功能评分明显高于模型组.H-E染色显示,模型组大鼠有明显的病理变化,而米诺环素预处理组可改善损伤脊髓的病理形态.免疫组织化学显色显示,与模型组相比,米诺环素预处理组GFAP阳性细胞数减少,差异具有统计学意义.结论:米诺环素预处理可有效抑制脊髓横断大鼠神经胶质细胞的过度增殖,有利于神经功能的恢复.

NT-3基因修饰许旺细胞与神经干细胞联合移植促进大鼠全横断脊髓受损伤神经元的存活及其轴突再生

目的探讨神经营养素-3基因修饰许旺细胞(NT-3-SCs)与神经干细胞(NSCs)联合移植对大鼠因脊髓全横断而受损伤的神经元存活及其轴突再生的作用。方法将NT-3-SCs及LacZ报告基因修饰SCs(LacZ-SCs)与NSCs联合移植到全横断性脊髓损伤处,60 d后在脊髓横断处尾侧注射荧光金(FG)进行逆行标记。第67天,取材进行组织学检测大脑皮质体感区、红核及脊髓横断处头侧FG标记神经元;大脑皮质体感区、红核和脊髓背核内存活的神经元以及脊髓损伤处再生的轴突。结果大脑皮质体感区、红核及脊髓L1背核内存活的神经元由多到少依次为NT-3-SCs与NSCs联合组、LacZ-SCs与NSCs联合组和实验对照组。NT-3-SCs与NSCs联合组和LacZ-SCs与NSCs联合组的大脑皮质体感区、红核和脊髓横断处头侧有FG标记神经元;脊髓横断处及其附近组织有5-HT、CGRP和SP阳性神经纤维。结论NT-3-SCs与NSCs联合移植能够促进脊髓全横断损伤后神经元的存活以及轴突再生。

脊髓

聚乙醇酸支架组织工程神经复合物修复大鼠脊髓损伤；脊髓纵裂分型治疗的疗效分析；低温预处理对大鼠脊髓内牵拉后脊髓神经细胞凋亡及神经功能的影响；唐山地震脊髓损伤并发尿路感染患者流行病学调查；Propentofylline对大鼠脊髓损伤后GFAP蛋白表达的影响；许旺细胞与PLGA共同移植于大鼠全横断脊髓损伤的实验研究；

大鼠脊髓损伤后对巢蛋白及突触素I表达的影响

目的探讨同种异体骨髓单个核细胞（BMMNCs）移植对脊髓全横断损伤区局部微环境中巢蛋白和突触素I表达的影响及意义。方法120只清洁级Winstar大鼠（雌雄不拘）随机（随机数字法）取87只分为3组。假手术组29只：切除相应的椎板不损伤脊髓；模型组29只：建立脊髓全横断模型；细胞移植组29只：建立脊髓全横断模型后，给予BMMNCs移植治疗。各组大鼠分别于5d、1周、2周、4周利用免疫组织化学技术、RT-PCR检测脊髓组织中巢蛋白（nestin）与突触素I（SynapsinⅠ）的表达变化及利用MIAS-2000图像处理系统分析观察nestin和SynapsinⅠ阳性产物在脊髓的分布，并测量阳性产物的吸光度值。采用SPSS17．0统计分析数据，组间比较，方差齐者采用完全随机设计资料的方差分析，样本问的两两比较用q检验；方差不齐者用成组设计多个样本比较的秩和检验（Kruskal-Wallis法），样本问两两比较的秩和检验（Nemenyi法）；P〈0．05为差异具有统计学意义。结果免疫组织染色、RT-PCR及图像处理系统分析结果显示模型对照组在伤后约5d可见损伤区域附近nestin表达升高，2周达高峰，4周后nestin表达明显下调，细胞移植组在脊髓伤5d可见损伤区域附近nestin表达升高，1周达高峰，4周后nestin表达明显下调，且各时期与假手术组、模型组相比较差异均具有统计学意义（P〈0．05）。损伤5d后，在损伤区域出现突触素I的表达，但模型组、细胞移植组突触素I的表达量在各时间点均低于假手术组，细胞移植组高于模型组（P〈0．01）。结论同种异体的骨髓单个核细胞移植可能改变了局部的微环境并上调了脊髓内巢蛋白和突触素I的表达。