多光谱和分子模拟技术研究全氟十二酸与人血清白蛋白的相互作用（英文）

全氟十二酸(PFDoA)是8~12个碳链的全氟烷酸(PFAAs)中毒性最强的新型环境污染物。已有大量研究表明PFAAs在环境中广泛积累,但对PFDoA与HSA的相互作用还处于起步阶段。本研究力争在模拟生理条件下,采用荧光猝灭法、分子模拟技术和圆二色谱确定HSA与PFDoA的相互作用机理。研究结果表明,PFDoA对HSA的猝灭是动态猝灭与形成PFDoA-HSA基态复合物引起的猝灭共同作用的结果。计算得到的结合距离(r=3.65 nm)表明,PFDoA(受体)与HSA(供体)之间的相互作用发生了非辐射能量转移。取代反应结果表明,PFDoA键合在HSA的siteⅠ位点上。分子对接进一步研究了PFDoA与HSA作用的详细结合情况,表明PFDoA通过多种作用力结合在HSA的亚域IIA内,例如,PFDoA上的O 1原子主要通过极性键与HSA上的Arg 257和Ser 287残基结合。计算得到的最优对接能量为825.87 kJ·mol^(-1),表明PFDoA对HSA有较大的结合亲和力。同步荧光光谱和三维荧光光谱研究了PFDoA对HSA构象的影响,结果显示,与PFDoA结合后,色氨酸的微环境疏水性增加,HSA的构象也发生改变。PFDoA与HSA作用前后圆二色谱二级结构的定量分析结果表明,PFDoA-HSA复合物的形成使螺旋稳定性降低。该研究结-果为全氟烷酸与HSA的动力学研究提供了理论依据和可靠数据,并揭示了生物大分子与配体相互作用的化学本质。

慢性暴露全氟十二烷酸对雌性大鼠生殖激素及相关卵巢受体表达的影响

全氟烷酸类化合物(PFAAs)是一类新型的持久性有机污染物,该类化合物的环境和健康风险已经引起了人们的广泛关注。由于长链PFAAs的生殖毒性效应尚缺乏系统的研究,本文采用含全氟十二烷酸(PFDoA)0.1 mg/kg的饲料饲喂大鼠180 d,应用放射免疫分析法和实时荧光定量PCR方法检测了大鼠血清中生殖激素的水平以及卵巢中相关受体的表达。结果显示,PFDoA暴露导致血清雌二醇水平出现减少的趋势,PFDoA显著增加了血清促卵泡刺激素水平,但并不影响血清促黄体生成素水平;PFDoA处理导致卵巢雌激素受体α的mRNA水平降低了25%,卵巢促卵泡刺激素受体的表达增加了36%,但PFDoA并不影响卵巢中促黄体生成素受体的表达。以上结果暗示慢性PFDoA暴露有影响雌激素以及促卵泡刺激素的信号在卵巢中传导的趋势。

慢病毒介导shRNA靶向下调过氧化物酶体增殖物激活受体α对全氟十二烷酸致大鼠肝细胞BRL 3A氧化损伤的影响

目的通过观察慢病毒介导shRNA靶向下调大鼠肝细胞BRL 3A中过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)α的表达,研究PPARα在全氟十二烷酸(perfluorododecanoic acid,PFDoA)致大鼠肝脏氧化损伤中的作用。方法构建PPARα慢病毒兼容shRNA干扰载体Lenti-iPα和阴性对照载体Lenti-NC,与慢病毒包装辅助质粒共转染293FT细胞进行慢病毒包装,收集慢病毒原液后浓缩并测定病毒滴度。分为NC-组(加阴性对照病毒,不加PFDoA)、NC+组(加阴性对照病毒,加75μmol/L PFDoA)、iPα-组(加干扰病毒,不加PFDoA)、iPα+组(加干扰病毒,加75μmol/L PFDoA)。使用慢病毒处理大鼠肝BRL 3A细胞96 h,最后24 h再对NC+组、iPα+进行75μmol/L PFDoA暴露。观察BRL 3A细胞中PPARα的干扰情况及PPARα的表达在PFDoA引起活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)变化中所起的作用。结果慢病毒介导shRNA成功实现靶向下调PPARα的表达,与NC-组相比,iPα-组的大鼠肝细胞系BRL 3A中ROS平均荧光强度为12043.42±808.58,显著升高(P<0.05);PPARα下游靶蛋白酰基辅酶A硫酯酶(acyl-CoA thioesterases,Acot)1的基因和蛋白表达水平(分别为0.43±0.04和0.34±0.08)均显著下降(P<0.05)。PFDoA处理后,与NC+组相比,iPα+组大鼠肝细胞BRL 3A中ROS平均荧光强度为12386.25±356.36,显著上升(P<0.05);Acot1的基因和蛋白表达水平(分别为0.85±0.10和0.33±0.04)显著下降(P<0.05)。结论PPARα及其下游靶蛋白Acot1在大鼠肝细胞系BRL 3A中可能起到清除ROS的作用,避免外源物质对肝脏的氧化损伤。