石蜡包埋组织实时荧光定量聚合酶链反应检测在结核病诊断中的价值

目的探讨石蜡包埋组织实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测结核分枝杆菌DNA在结核病诊断中的价值。方法275例组织标本行常规组织病理学检查、抗酸染色,并对石蜡包埋组织应用实时荧光定量聚合酶链反应检测结核分枝杆菌DNA。结果275例FQ-PCR检测结核分枝杆菌DNA阳性211例(76.7%),病理诊断为结核183例(66.5%),抗酸染色阳性23例(8.4%)。病理诊断为结核者FQ-PCR阳性率为93.4%,抗酸染色阳性者FQ-PCR阳性率95.7%。结论实时荧光聚合酶链反应技术敏感性高、其与组织病理学相结合可以提高诊断率。

DNA聚合酶链反应检测石蜡包埋人脑组织中弓形虫的研究

孕妇感染弓形虫是胎儿先天性畸形的危险因素。本文运用DNA聚合酶链反应检测30例先天性畸形儿尸检石蜡包埋脑组织中弓形虫。结果表明,30例先天性畸形儿石蜡脑组织切片经体外扩增后出现阳性条带者13例,而对照组无1例阳性(P<0.05)。研究结果进一步支持弓形虫感染与胎儿先天性畸形有密切关系。

聚合酶链反应技术检测禽网状内皮组织增殖病病毒

目的建立聚合酶链反应(PCR)技术检测禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的方法。方法提取感染REV-T和脾坏死病毒(SNV)的SPF鸡胚成纤维细胞DNA为模板,利用前病毒长末端重复序列(LTR)区引物进行扩增。采集肿瘤病鸡,以及人工感染REV 28 d后鸡肝脏、脾脏、肾脏、心脏、胸腺、法氏囊等器官,进行扩增。同时将采集的脏器组织,进行HE染色和免疫组化试验(IHC)。结果REV-T感染的组织未检测出电泳条带,而SNV感染的细胞中检测到了一条300bp特异而清晰的电泳条带,而且SNV感染的鸡组织中,PCR方法检测到了特异的条带。通过HE染色和免疫组化技术观察到了肿瘤组织,肿瘤细胞的形态、分布。结论PCR检测REV更快捷,特异更好。

聚合酶链反应检测肿瘤组织的端粒酶活性

目的 :比较聚合酶链反应 -微孔板杂交法 (PCR- MPH )和聚合酶链反应 -聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (PCR-PAGE)检测肿瘤组织端粒酶活性的临床价值。 方法 :PCR- MPH以地高辛标记端粒重复片段特异的探针与 PCR变性产物杂交 ,经酶底物显色 ,通过测定吸光度判断结果 ;PCR- PAGE方法直接用聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离PCR扩增端粒酶的合成产物 ,经银染色 ,分析端粒酶活性。 结果 :PCR- MPH方法能准确、特异地检测出肿瘤组织的端粒酶活性 ,其灵敏度比 PCR- PAGE法高 10 0倍。 结论 :两种方法均可用于临床检测 ,只是 PCR- MPH方法更简单、方便一些。

免疫组织化学和聚合酶链反应在乳腺癌易患基因检测中的应用价值

目的探讨免疫组织化学和聚合酶链反应（PCR）在检测乳腺癌易患基因中的应用价值。方法选取2013年10月至2014年10月唐山市妇幼保健院诊治的乳腺癌患者37例为乳腺癌组，良性乳腺疾病患者37例为良性乳腺疾病组，健康体检者37例为正常组，均行免疫组织化学和PCR检测乳腺癌易患基因。结果乳腺癌组乳腺癌易患基因1、乳腺癌易患基因1／132微球蛋白分别为（1．13±0．51）×10^5拷贝／L、（0．37±0．12），均低于正常组[（3．09±1．38）×10^5拷贝／L、（0．95±0．36）]和良性乳腺疾病组[（2．87±1．40）×10^5拷贝／L、（0．93±0．41）]，差异均有统计学意义（P〈0．05）。乳腺癌组乳腺癌易患基因人表皮因子受体2（Her2）、细胞角蛋白5／6（CK5／6）、表皮生长因子受体（EGFR）分别为（6．75±2．98）×10^9拷贝／L、（25．84±11．43）×10^98贝／L、（43．54±18．26）×10^7拷贝／L，均显著高于正常组[（3．65±1．40）×10^9拷贝／L、（2．69±0．54）×10^8拷贝／L、（2．18±0．90）×10^7拷贝／L]和良性乳腺疾病组[（3．80±1．31）×10^9拷贝／L、（2．76±0．68）×10^8拷贝／L、（2．27±1．04）×10^7拷贝／L]，差异均有统计学意义（P〈0．05）。乳腺癌组β2微球蛋白低于正常组和良性乳腺疾病组。行Her2检测时，PCR检测的灵敏度、特异度、准确度均高于免疫组织化学检测。结论免疫组织化学和PCR检测均可用于乳腺癌易患基因的诊断，其中PCR检测的灵敏度、特异度、准确度更高。

聚合酶链式反应检测石蜡切片中结核杆菌DNA的敏感性的评价

目的 本研究通过聚合酶链式反应检测结核病组织石蜡切片中的结核菌 ,并与抗酸染色及免疫组织化学染色作一比较 ,探讨此方法在结核病诊断中的敏感性。方法 1用聚合酶链反应检测结核菌特征性的长度为 32 0 b P的DNA序列 ;2应用多克隆抗体对结核菌进行免疫组化标记 ,用 SABC法检测组织中的结核杆菌 ;3传统的萋 -尼抗酸染色。结果 聚合酶链式反应检测石蜡切片中结核菌的阳性率 77.8% (2 1/ 2 7) ;免疫组化检测结核杆菌阳性率 83.3% (15 /18) ;抗酸染色检测结核菌阳性率 35 .4 % (40 / 113)。结论 在石蜡切片中诊断结核 ,如果抗酸染色和免疫组化这两种方法都无法确诊 ,配合 PCR检测 ,诊断率会大大提高。本实验也说明 PCR是一种安全、稳定、灵敏度高的好方法 ,为临床诊断结核提供了一个非常有效的诊断技术。

聚合酶链反应检测石蜡包埋组织中TORCH感染

本文应用聚合酶链反应检测９８例福尔马林固定、石蜡包埋组织中ＴＯＸ、ＣＭＶ、ＨＳＶ－ⅡＤＮＡ，阳性率分别为１７．２４％、２３．４７％、１０．２０％。提示ＴＯＸ、ＣＭＶ、ＨＳＶ－Ⅱ感染与胎儿畸形、死亡密切相关。本文指出该方法简便、快速，可有效地用于临床陈旧标本的回顾性研究。

聚合酶链反应快速检测胃活组织标本中的幽门螺杆菌

幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ，ＨＰ）是一些胃、十二指肠疾病的主要原因之一。将聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）应用于临床诊断，检测胃活组织标本中的幽门螺杆菌，取得了满意的结果。ＰＣＲ可检出少至０．１ｐｇＨｐＤＮＡ，相当于１００个细菌细胞。一次ＰＣＲ检测可在５小时内完成。我们以互补于Ｈｐ１６ＳｒＲＮＡ基因的一对寡核苷酸为引物，应用ＰＣＲ法对１２２个胃活组织标本进行了检测。其中６０个Ｈｐ分离株的ＤＮＡ和Ｈｐ标准株的ＤＮＡ，ＰＣＲ扩增产物经琼脂糖凝胶电泳均显示一条４６０ｂｐ的区带；而６２例非Ｈｐ感染的胃活组织标本及与Ｈｐ相关的肠道细菌，则不能扩增出该片段。以上１２２例中的６３例还做了另两种常规检测，其中３８例ＰＣＲ阳性，而血清学方法阳性仅３３例，组织学检查阳性仅２９例。在２０例经不同方案治疗后的胃肠疾病伴Ｈｐ感染病人中，被常规检测方法均认为是阴性，Ｈｐ已被根除的病人中，仍有２例ＰＣＲ检测为阳性。因此，虽然诊断Ｈｐ感染的方法已有很多，但共同的缺点是不能达到足够的灵敏性，特别是不能准确判断治疗后细菌是否被彻底根除。我们采用ＰＣＲ从胃活组织标本中检测Ｈｐ，并探讨它?

聚合酶链反应检测胃活检组织标本中的幽门螺杆菌

幽门螺杆菌是慢性Ｂ型胃炎的一个重要致病因素，并与消化性溃疡及胃癌的发生有密切关系。幽门螺杆菌在胃炎和消化性溃疡中的检出率达８０％～９０％。目前使用的检测、鉴定方法较多，常用的方法有组织学检测、细菌培养、尿素酶试验和１４Ｃ呼吸试验等。我们采用聚合酶链反...

应用荧光定量聚合酶链反应检测血清、肝组织中HBV-DNA含量观察HGV感染对慢性乙型肝炎HBV复制的影响

目的 探讨庚型肝炎病毒 (HGV)感染对慢性乙型肝炎 (CH B)患者乙型肝炎病毒 (HBV)复制的影响。方法 应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、过氧化物酶与抗过氧化物酶复合物 (PAP)法免疫组织化学、荧光定量PCR(FQ PCR)技术对 5 6例CH B患者血清HGV RNA、肝组织HGV Ag、血清及肝组织中HBV DNA含量分别进行了检测 ,并将血清HGV RNA与肝组织HGV Ag的表达、HGV RNA ,HGV Ag阳性与阴性患者HBV DNA含量进行了对比研究。 结果 血清HGV RNA、肝组织HGV Ag阳性分别为 8例 (1 4 3 % )、1 0例 (1 7 9% )。血清HGV RNA阳性与肝组织HGV Ag表达显著相关 (P <0 .0 1 ) ,但部分肝组织HGV Ag阴性患者亦有血清HGV RNA表达。血清HGV RNA、肝组织HGV Ag阳性与阴性患者血清及肝组织中HBV DNA含量均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 HGV感染对CH B患者HBV复制无影响。肝脏是HGV的复制场所 ,但可能亦有肝外组织器官中复制。HGV至多具有微弱的致病性 ,但仍然需要进一步研究。

用聚合酶链反应检测畸形胎儿组织中及不良生育史妇女血、羊水、绒毛标本中Epstein-Barr病毒

Epstein-Barr(EB)病毒感染与致畸和生育异常的关系已有报道,本文根据EB病毒基因结构特点,在EB病毒BamHI酶解后的W片段内合成一对引物,由此引物扩增的PCR产物长度较短,为154个碱基,以提高EB病毒的阳性检出率,同时建立了合适的PCR反应条件,并在国内首次用此法对11例畸形胎儿组织及72例具不良生育史妇女分别取血及羊水、绒毛标本中的EB病毒进行了检测。结果表明,11例畸胎组织中有1例在其胎盘组织中检出EB病毒DNA,12例有不良生育史妇女血标本中有1例EB病毒DNA检测阳性,而60例有过不良生育史妇女再次妇娠后取的羊水、绒毛标本中有1例羊水中检测出EB病毒DNA,上述结果提示在畸胎组织及不良生育史妇女体内存在有EB病毒感染,阳性率虽不高但对其与致畸及生育史的关系值得进一步证实与探讨。

石蜡包埋组织中目的基因原位逆转录-聚合酶链反应检测

目的探讨原位逆转录 -聚合酶链反应技术 (ISRT -PCR)在普通制作石蜡包埋组织中的应用及价值。方法应用直接法ISRT -PCR方法对普通制作、石蜡包埋淋巴瘤组织中的丙型肝炎病毒 (HCV)基因组序列进行检测。结果从存档多年的福尔马林固定、普通制作石蜡包埋淋巴瘤组织中检测到HCVRNA序列。结论ISRT -PCR可用于福尔马林固定。

聚合酶链反应检测复发性口腔溃疡患者石蜡切片中的幽门螺杆菌

目的 建立检测石蜡切片中幽门螺杆菌的PCR方法 ,明确复发性口腔溃疡患者口腔中是否存在幽门螺杆菌。方法 利用幽门螺杆菌保守的 16SrRNA基因设计一对引物 ,通过PCR方法检测复发性口腔溃疡患者病理石蜡切片中的幽门螺杆菌 ,其中实验组复发性口腔溃疡者病理标本 5 0例 ,对照组口腔外科手术标本 2 0例。结果 PCR方法具有较好的特异性和敏感性 ,复发性口腔溃疡患者病理标本幽门螺杆菌DNA阳性率为 4 2 % (2 1/ 5 0 ) ,对照组标本阳性率为 5 % (1/ 2 0 )。结论 PCR方法能敏感检测口腔石蜡病理切片中的幽门螺杆菌。

免疫组织化学与聚合酶链反应在结肠癌微卫星状态筛选中的比较

目的比较免疫组织化学(IHC)与聚合酶链反应(PCR)检测结肠癌微卫星不稳定状态的一致性,评价IHC检测微卫星不稳定状态的可行性。方法采用IHC和PCR两种方法分别检测80例结肠癌中微卫星不稳定状态。结果 (1)IHC法检测结果显示癌旁正常黏膜中错配修复蛋白(包括MLH1、PMS2、MSH2、MSH6)均阳性表达。四个蛋白表达缺失率分别为23.8%(19/80)、21.2%(17/80)、7.5%(6/80)、3.7%(3/80),其中有16例显示MLH1、PMS2表达同时缺失,3例显示MSH2和MSH6表达同时缺失。19例(23.8%)显示为高频微卫星不稳定,剩余病例显示微卫星稳定状态或低频微卫星不稳定;(2)PCR产物测序结果显示18例为高频微卫星不稳定,5例为低频微卫星不稳定,其余病例均为微卫星稳定状态;(3)两种方法具有高度一致性。结论与PCR法相比,IHC具有操作简单、耗时短、费用低以及对实验仪器条件要求不高等优点,具有较高的临床应用价值,可以作为检测结肠癌微卫星不稳定状态的首选方法。

甲醛固定石蜡包埋切片经特殊染色后荧光定量聚合酶链反应检测的再利用

结核病是由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)感染引起的特异性炎症,在甲醛固定石蜡包埋组织切片中查见MTB是确诊结核的“金标准”。目前,结核病诊断的主要辅助检测方法是特殊染色和qRT-PCR检测。在临床病理诊断中,部分结核病患者由于获取标本困难,穿刺标本微小,病理组织多被用于HE染色、特殊染色,所剩组织太少无法进行相关分子检测。

环境及理化因素对牙髓组织脱氧核糖核酸聚合酶链反应性别鉴定的影响

本文报道用一对特异的Ｙ＿（１．１），Ｙ＿（１．２）引物对经温度、湿度、ｐＨ、福尔马林、乙醇和土埋处理的牙髓ＤＮＡ及室温保存的陈旧牙髓ＤＮＡ进行扩增。结果发现男性牙齿出现特异的１５４ｂｐ扩增带，女性未出现带。男性４５颗牙经环境及理化因素处理，其中经土埋、水泡和ｐＨ２各处理１０周及火烧１０分钟的牙髓ＤＮＡ未见特异的１５４ｂｐ扩增带；经６６％湿度、ｐＨ１０各处理１０周以及火烧５分钟后的牙髓ＤＮＡ扩增带较弱，其余均有１５４ｂｐ的扩增带出现；６颗高分子量ＤＮＡ和２４颗高分子量伴部分降解的ＤＮＡ经扩增能获得比较满意的结果：１１颗牙齿完全降解的ＤＮＡ除１颗ＰＣＲ扩增结果未显带外，其余都显带；４颗牙齿电泳未检出ＤＮＡ，除１颗ＰＣＲ扩增结果显带外其余皆无带，说明只要降解的ＤＮＡ中仍含有待扩增的靶ＤＮＡ序列，就可用ＰＣＲ扩增作性别鉴定。

聚合酶链反应测定全膝置换术后感染

全膝关节置换术后出现疼痛等症状可能为关节内细菌感染,聚合酶链反应能快速准确地作出诊断。

聚合酶链反应和免疫组化检测猫抓病患者淋巴结巴尔通体感染

目的 探讨聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）和免疫组化法检测猫抓病患者巴尔通体感染情况,探讨两种方法在石蜡包埋组织中确诊猫抓病的实用价值。方法 收集94例经病理形态学诊断的猫抓病石蜡包埋淋巴结组织,分别使用针对巴尔通体柠檬酸合成酶（gltA）基因、16~23SrRNA基因的2种引物扩增巴尔通体基因序列以及使用汉赛巴尔通体单克隆抗体检测组织中巴尔通体感染情况。结果 66例（70.2%）抗汉赛巴尔通体单克隆抗体染色阳性,阳性信号主要呈点状、颗粒状,少数呈线样勾勒出细菌形状。应用PCR法检测有57例（60.6%）汉赛巴尔通体191bp长度的gltA基因;另40例（42.5%）检测出汉赛巴尔通体163bp长度的16~23SrRNA基因,无其他巴尔通体种类检测出。综合上述检测结果显示有76例（80.8%）检出汉赛巴尔通体的感染。结论 汉赛巴尔通体是我国猫抓病患者的病原体,应用PCR法和免疫组化EnVision两步法检测汉赛巴尔通体有助于确诊猫抓病,汉赛巴尔通体单克隆抗体检测是目前较为理想的检测方法。

荧光定量聚合酶链反应法检测咽拭子EBV-DNA在早期诊断EBV感染中的作用

目的探讨咽拭子荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测非洲淋巴细胞瘤病毒脱氧核糖核(EBV-DNA)在早期诊断EBV感染中的应用价值。方法对于疑诊EBV感染的患儿在疾病初期分别采用咽拭子PCR法检测EBV-DNA,同时用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测静脉血EBV-VCA-IgM和(或)IgG,对于前者阳性而后者阴性的病例在1周后复查EBV-VCA-IgM和IgG,比较两者在早期诊断EBV感染中的价值。同期检测健康儿童50例作为对照组。结果①共检测疑诊病例985例,其中EBV-DNA阳性344例,阳性率34.9%,EBV-VCA-IgM和(或)IgG阳性164例,阳性率16.6%;健康对照组检测50例,仅1例EBV-DNA阳性,所有病例EBV-VCA-IgM和(或)IgG均阴性。②在纳入研究病例中,诊断为传染性单核细胞增多症者38例,其中EBV-DNA 37例阳性、EBV-VCA-IgM和(或)IgG 27例阳性(P<0.05)。诊断为非典型EBV感染的312例,其中EBV-DNA阳性307例,阳性率98.4%,EBV-VCA-IgM和(或)IgG阳性137例,阳性率43.9%(P<0.01)。结论咽拭子PCR法检测EBV-DNA敏感度高,特异度强,且取材简单,方法无创,家长易于接受,与检测EBV-VCA-IgM、IgG相比,在早期诊断EBV感染性疾病,尤其是非典型EBV感染很有应用价值。

顺序特异引物聚合酶链反应技术HLA－DR1，DR51组的基因快速分型

采用快速基因分型技术对人类白细胞抗原（ＨＬＡ）－ＤＲ１、ＤＲ５１组准确分型，为临床选择理想配型的供受者提供依据。根据核苷酸序列合成系列特异引物，借助ＰＣＲ技术，建立顺序特异引物聚合酶链反应方法（ＰＣＲ－ＳＳＰ）快速基因分型方法，对６９例肾移植供受者ＨＬＡ－ＤＲ１、ＤＲ１５、ＤＲ１６和ＤＲ１０分型，同时与血清学方法对比研究。分型结果采用限制性内切酶分析和寡核苷酸探针杂交证实。结果：６９例供受者ＨＬＡ－ＤＲ１、ＤＲ５１组ＰＣＲ－ＳＳＰ分型均获成功，无假阳性和假阴性，总耗时５ｈ，分型结果经酶切分析和探针杂交证实符合。血清学分型耗时２４ｈ，误差率达３２．４％。结论：ＰＣＲ－ＳＳＰ用于ＨＬＡ－ＤＲ１、ＤＲ５１组基因分型，具有快速、精确的特点，适合于临床应用。