全细胞胞质内注射法生产猪重构胚的研究(简报)

自从1997年克隆羊“Dolly”出生以来。体细胞核移植技术得到广泛应用,已经有十余种克隆哺乳动物出生，但克隆效率仍然很低。核移植方法的不够完善是其重要原因之一。传统的核移植方法——电融合法和胞质内注射法虽然都取得了成功。但还存在操作复杂及需要辅助设备等问题。为了能够找出一种既容易操作，又不需要特殊设备的核移植方法，本研究对胞质内注射技术进行了改进,尝试了一种新的核移植方法——非Piezo辅助的全细胞胞质内注射法，即不通过Piezo辅助。不破坏供体细胞膜直接将供体细胞注入卵母细胞内，并且比较了这种方法与电融合法对猪体细胞核移植效率的影响。探讨了非Piezo辅助的全细胞胞质内注射法在猪体细胞核移植上的可行性。

水牛体细胞核移植方法比较及激活前的时间间隔对全细胞胞质内注射法核移植效果的影响

本研究旨在比较水牛2种体细胞核移植（Somatic Cell Nuclear Transfer,SCNT）方法的效果以及激活前的时间间隔对全细胞胞质内注射法（Whole-Cell Intracytoplasmic Microinjection,WCICSI）核移植效果的影响。采用水牛胎儿成纤维细胞作为供核,比较了透明带下注核法（Perivitelline Microinjection,PM）和WCICSI核移植效果。另外,试验了不同类型的供体细胞进行全细胞胞质内注射后与激活前的受体胞质的最适宜作用时间。结果,WCICSI构建核移植重构胚的成功率显著高于PM（87.1%vs 81.1%,P〈0.05）,虽然其重构胚的分裂率极显著低于PM（49.5%vs 71.8%,P〈0.01）,但囊胚率、核移植的效率无显著差异（P〉0.05）。卵丘细胞和胎儿成纤维细胞在注射后3 h激活,重构胚的囊胚发育率最高;颗粒细胞注射后与激活前的最佳时间间隔可在1.5~3 h,但3 h是最佳的作用时间。结果表明,（1）WCICSI可用于水牛体细胞核移植的研究;（2）水牛胞质内注射供体细胞后3 h进行激活,核移植重构胚的发育效果最好。