全自动二维液相色谱系统测定注射用血塞通中人参皂苷Rb_1含量

目的建立全自动二维液相色谱法(2D-LC-UV)测定注射用血塞通中人参皂苷Rb1的含量。方法第一维液相色谱系统色谱柱为Aston SC2色谱柱(4.6×25 mm,5μm,ANAX,中国),流动相为酸性移动相(20.0 mmol/L磷酸二氢钠溶液,用磷酸调p H至3.0)-甲醇(35:65,V/V);第二维液相色谱系统色谱柱为COSMOSIL Packed Column(4.6×250 mm,5μm,Nacalai Tesque,日本);流动相为碱性移动相-酸性移动相-甲醇-乙腈(25:22:20:33,V/V/V/V),通过低压四元泵自动配比;采用"中心切割"模式及中间柱转移目标物,检测波长203 nm,柱温40℃。结果注射用血塞通中人参皂苷Rb1在21.7 min出峰,含量为321.6 mg/g。人参皂苷Rb1的加样回收率为99.75%,RSD为1.42%。结论2D-LC-UV测定注射用血塞通中人参皂苷Rb1的含量,基线平稳且无杂质干扰,分离完全,适用于血塞通的质量评价。

体内D-酸性氨基酸分析的自动二维手性高效液相色谱法的建立及应用

D-酸性氨基酸的生理功能和疾病标志物作用已逐渐成为代谢组学和创新药物开发的研究热点,本研究利用硅胶基质ODS整体柱为第一维分离色谱柱,乙腈-三氟醋酸-水（9∶0.05∶92,V/V）为流动相;Chiralpak QD-1-AX微径手性色谱柱为第二维手性分离柱,10 mmol/L柠檬酸的甲醇-乙腈（50∶50,V/V）溶液为流动相,4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并氧杂恶二唑（NBD）-F衍生化荧光法检测,建立了二维手性高效液相色谱全自动分析系统。本系统实现了对生物样品中酸性氨基酸异构体的高效快速分离（Rs〉2.5）;高灵敏度检测（LOD=1 fmol）及定量值的确证,酸性氨基酸异构体回收率均在97%-104%之间,日内日间精密度的RSD〈5%。应用本系统对免疫功能低下的老年病小鼠动物模型快速老化小鼠亚系1（SAMP1）进行分析,测得SAMP1小鼠胸腺和脾脏中D-天门冬氨酸的含量分别为（206±18）nmol/g和（264±21）nmol/g。首次发现了其胸腺和脾脏中D-天门冬氨酸的含量较对照组同龄抗快速老化小鼠亚系1（SAMR1）有显著升高趋势（p〈0.01）。

基于全自动二维液相色谱的精神疾病靶症状的氯氮平有效血药浓度实验研究

目的建立全自动二维液相色谱法(2D-LC-UV)测定血清中氯氮平浓度,探讨氯氮平有效血药浓度与不同精神疾病靶症状(精神分裂症阳性、阴性、混合型,双相障碍躁狂相及躁狂症)的关系。方法200μL进样,在一维柱Aston SX1色谱柱(25 mm×4.6 mm,5μm)上初步分离,通过中间柱Aston SCB(10 mm×4.6 mm,5μm)截取保留,并在二维柱Aston SCB(100 mm×4.6 mm,5μm)上进一步分离,直至最终测定。监测2015年7月—2017年6月我院的100例精神分裂症、双相障碍及躁狂症患者的血清中氯氮平的血药浓度,结合临床用药情况及疗效,分析不同靶症状的氯氮平有效血药浓度范围。结果本色谱条件下,氯氮平在64.47~1031.52μg·L^-1内线性关系良好。治疗精神分裂症阳性症状时氯氮平有效血药浓度范围为200~500μg·L^-1,精分症阴性症状有效血药浓度范围为50~200μg·L^-1;精分症混合型有效血药浓度范围为100~450μg·L^-1,双相障碍躁狂相及躁狂症有效血药浓度范围为150~450μg·L^-1。结论所建立的2D-LC-UV方法快速、准确,可用于氯氮平血清药物浓度研究。根据氯氮平有效血药浓度治疗不同的精神疾病靶症状,对临床个体化合理用药具有指导意义。

基于全自动二维液相色谱的地奈德乳膏体外经皮渗透研究

目的建立乳膏及经皮渗透样品中地奈德的全自动二维液相色谱(2D-LC-UV)测定法,比较新研制的地奈德乳膏与原研制剂的体外经皮渗透性。方法采用ASTON RG C30色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为四氢呋喃-水-乙腈=25:35:40,流速为1.0 m L·min^(-1),检测波长245 nm。体外透皮实验采用改良Franz扩散池,以离体乳猪皮为屏障,以累积渗透量和皮肤滞留量为指标,评价新研制的地奈德乳膏与原研制剂的经皮渗透规律。结果皮肤接收液和皮肤提取液样品中地奈德浓度分别在10~1000ng·m L^(-1)、10~300 ng·m L^(-1)内线性关系良好(r^2=0.999,r^2=0.997)。与原研制剂相比,新研制的地奈德乳膏在2、7、12、24 h的单位皮肤面积累积渗透量和2、24 h皮肤滞留量差异均无统计学意义(P>0.05)。结论所建立的2D-LC-UV方法快速、准确,可用于地奈德乳膏的含量测定及体外经皮渗透规律研究。新研制的地奈德乳膏的经皮渗透特性与原研制剂相似。

二维液相色谱法同时测定婴幼儿配方奶粉中的维生素A、D、E

本文建立了二维液相色谱法同时测定婴幼儿配方奶粉中维生素A、E、D含量。样品经皂化、萃取、浓缩、定容,经二维反相色谱法测定,对所建立的方法进行方法学验证,结果表明:维生素A、D、E标准曲线线性良好,R^(2)>0.999,维生素A、E、D检出限分别为8、0.65、30μg/100 g;定量限分别为25、2、100μg/100 g,加标回收率为87.3%~96.5%,RSD为0.45%~3.80%,同时与国标法进行比较,该方法更加简便快捷,灵敏度高,结果也相对较准。

二维液相色谱法对特殊医学用途配方食品中维生素A、D、E含量的检测

特殊医学用途配方食品的基质较为复杂,且目标物含量较低,因此对其中维生素准确定量具有较大难度。本方法采用了一个同时测定维生素A、D、E的稳定高效的在线固相萃取-二维液相色谱方法。本方法利用SPE柱净化皂化液,通过六通阀的转化后注入一维色谱柱进行洗脱分离,利用阀切换模式进入二维系统再次分离。该方法的测定结果与国标方法基本一致,方法学满足国标要求。本方法采用三泵两个检测器,实现了皂化液定容后直接上样测定,简化了前处理步骤,提高了分析效率,对环境更友好。

全自动二维制备液相色谱装置控制系统的研制

根据二维色谱原理,采用两根不同性质的色谱柱串联,采用工控机作为上位机,AVR单片机作为下位机,二者相结合,通过.NET平台软件控制各个部件的操作,研制出了全自动二维制备色谱装置控制系统。

酶放大免疫分析法与二维高效液相色谱法监测万古霉素血药浓度的比较

万古霉素血药浓度个体差异较大,故临床需监测其血药浓度。本文分别建立酶放大免疫分析法(EMIT)、二维高效液相色谱法(2D-HPLC-UV)测定万古霉素血药浓度,2种方法的线性、准确度和精密度均符合生物样品检定要求。60份静脉滴注万古霉素患者的血浆样品测定结果显示,两种方法无统计学差异,且相关性好,回归方程为Y2D-HPLC-UV=0.9670×XEMIT-0.7029,Bland-Altman分析显示两种方法一致性良好。两种方法均可有效且可靠地监测万古霉素血药浓度,临床上应综合考虑监测目的、实验室条件和人员配置等,选择合适的测定方法。

在线二维柱切换-高效液相色谱法测定人血清中多索茶碱浓度

目的:建立测定人血清中多索茶碱浓度的方法。方法:采用在线二维柱切换-高效液相色谱法测定人血清中多索茶碱浓度,一维色谱柱为Waters C_(18),中间柱为SC2,一维、二维柱流动相均为甲醇-水(70∶30,V/V),检测波长为273 nm,柱温为40℃,进样量为10μL。结果:多索茶碱在0.5~50.00μg/m L质量浓度范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9),检测限为0.01μg/m L,定量限为0.5μg/m L,日内、日间精密度的RSD分别为1.51%~1.89%和1.52%~1.92%(n=5),准确度为97.91%~104.19%(n=5),提取回收率为91.63%~93.44%(RSD<2.00%,n=3),基质效应RSD≤3.01%(n=6),稳定性的RSD<5.00%(n=6)。3例患者静脉输注多索茶碱葡萄糖注射液(0.3 g/d)达稳态后,次日给药前静脉血清中多索茶碱的浓度为3.23、3.35、3.68μg/m L,RSD为2.28%、2.34%、2.14%(n=5)。结论:该方法简便、快速、准确,适用于临床多索茶碱的血药浓度检测。

酶放大免疫分析法与二维液相色谱法监测癫痫患者血清中卡马西平浓度的比较

目的比较酶放大免疫分析法(EMIT)与二维液相色谱法(2D-HPLC)测定卡马西平血药浓度的差异。方法采集67例癫痫患者卡马西平血清样本,分别采用EMIT法和2D-HPLC法测定,其中二维液相的色谱条件如下:第一维色谱柱为ASTON-FAQ C8柱(4.0 mm×100.0 mm,3μm,ANAX),流动相为乙腈-水(55∶45,v/v),流速为1 m L/min;中间柱为ASTON C18(4.6 mm×10.0 mm,3μm,ANAX);第二维色谱柱为Diamonsil-C18柱(4.6 mm×200.0 mm,5μm,Dikma),流动相为乙腈-20 mmol/L乙酸铵(20∶80,v/v,p H=7.0),流速为1.2 m L/min。柱温为40℃,检测波长为285 nm。结果两种方法差异无统计学意义,且相关性好,回归方程为y(2D-HPLC)=0.9876×x(EMIT)-0.0313,Bland-Altman分析显示两种方法一致性良好。结论 EMIT法与2D-HPLC法测定的结果具有良好的一致性和相关性,应综合考虑实验室条件和人员配置等方面,采用合适的测定方法。

全自动二维液相色谱测定替考拉宁血药浓度

目的采用全自动二维液相色谱测定替考拉宁血药浓度,探讨其临床应用价值。方法样品去除蛋白后直接进样,采用一级单工模式进行检测。样品首先通过一维柱(二通)和中间柱Aston SRC(4.6 mm×50 mm,5μm),一维流动相采用替考拉宁-1D移动相进行洗脱,以Aston SC5(4.6 mm×275 mm,5μm)为二维柱,二维流动相采用替考拉宁-2D移动相进行洗脱。紫外检测波长为278 nm和254 nm。考察方法的专属性、线性范围、精密度、回收率和样本稳定性等,并观察其临床应用效果。结果替考拉宁与各杂质分离良好,替考拉宁色谱峰在11.5 min,可在13.5 min内完整出峰。替考拉宁在浓度3.75~120.00 mg·L^(-1)范围内,线性良好(r=0.9999),该方法精密度、回收率良好,替考拉宁在血清中稳定性良好,各项指标符合生物样本分析方法要求。采用该方法对11例患者进行替考拉宁血药浓度检测,检测结果在有效范围内的有5例,低于有效浓度的有6例。结论该方法操作简便快速,结果准确,自动化程度高,适用于替考拉宁血药浓度检测。

二维液相色谱法测定人血清中丙戊酸浓度的不确定度

目的 采用全自动二维液相色谱(2D-LC)测定人血清中丙戊酸浓度的不确定度。方法采用2D-LC法检测丙戊酸人血清药物浓度,第一维色谱柱为Aston SC2(25 mm×3.5 mm,5 μm),流动相为甲醇-乙腈-15.0 mmol·L^(-1)磷酸铵盐水溶液=2∶2∶3(v∶v∶v,pH=5.35);流速1.0 mL·min^(-1),第二维色谱柱为Aston SCB(125 mm×4.6 mm,5 μm),捕获柱为Aston SH(10 mm×3.5 mm,5 μm),流动相为乙腈-10.0 mmol·L^(-1)磷酸铵盐水溶液=44∶56(v∶v,pH=3.00),流速1.2 mL·min^(-1),柱温40℃,紫外检测波长215 nm。依据不确定度来源分类原则,建立不确定度模型,分析测定方法中重复性、样品称量、溶液配制、仪器允差、提取回收、标准曲线拟合等不确定度源拟合类型,选定散布函数,合成不确定度和扩展不确定度。结果 2D-LC法测定丙戊酸低、中、高血清药物浓度的拓展不确定度分别为U_L=1.8657 μg·mL^(-1),U_M=6.8542 μg·mL^(-1),U_H=13.9458 μg·mL^(-1)(P=95%),结果可分别表示为(7.52±1.87)、(123.85±6.85)、(249.33±13.95)μg·mL^(-1)。结论本法不确定度小,主要来源于标准曲线拟合,低浓度对不确定度贡献最大,溶液的配制和提取回收率过程对不确定度有部分影响。

高效液相色谱法测定二维钙赖氨酸片中盐酸赖氨酸含量

目的探讨测定二维钙赖氨酸片中盐酸赖氨酸含量的方法。方法采用Luna C_(18)柱(250 mm×4．6 mm,5μm)为色谱柱,流动相为乙腈- pH值为7．0的磷酸盐缓冲液(30：70),检测波长为360 nm,流速为0．6 mL/min。结果盐酸赖氨酸进样量在0．15～3．00μg范围内与峰面积线性关系良好,r=0．9996,平均回收率为99．83%,RSD为0．37%。结论该方法灵敏快速,测定结果准确、重现性好,可用于该制剂的质量控制。

高效液相色谱法测定二维钙赖氨酸片中维生素B_1含量

目的探讨二维钙赖氨酸片中维生素B1(VitB1)的含量测定方法。方法高效液相色谱法。色谱柱为GeminiC18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为内含5mmol/L庚烷磺酸钠、以磷酸调节pH值至3.5的乙腈-水-三乙胺(16∶84∶0.3)溶液,检测波长为245nm,流速为1.0mL/min。结果VitB1线性范围是0.05～0.25μg,r=0.99999,平均回收率为98.99%,RSD=0.65%。结论方法灵敏快速,结果准确,重现性好,可用于该制剂的质量控制。

亲水/反相二维制备液相色谱法分离纯化络石藤中的化学成分

建立了亲水/反相二维制备液相色谱(Pre-2D-HILIC/RPLC)分离纯化络石藤中化学成分的分析方法。络石藤药材经醇提、活性炭脱色后用反相固相萃取柱除去色素和强极性物质,最终得到干燥的浅黄色粉末。一维亲水色谱选择Click XIon色谱柱(250 mm×20 mm,10μm)作为固定相,水和乙腈作为流动相,进行梯度洗脱,以紫外触发模式收集馏分,共得到15个组分。二维反相色谱选择C18色谱柱(250 mm×20 mm,5μm)作为固定相,水和乙腈作为流动相,进行梯度洗脱,最终得到14个高纯度化合物,并通过质谱和核磁共振对其进行确认。实验结果表明,该法具有良好的正交选择性,可以有效提高分离度和峰容量,对于分离络石藤等复杂样品具有重要意义。

在线二维高效液相色谱法测定发酵食品中的苯乳酸

苯乳酸是一种能够存在于食品中的新型抑菌物质,为了避免传统高效液相色谱法(HPLC)检测苯乳酸时出现灵敏度低和色谱峰相连的问题,建立了一种二维高效液相色谱法(2D-HPLC)检测发酵食品中苯乳酸的方法,测定了酸奶、甜米酒、东北酸菜、酱黄瓜和广式腊肠5种常见发酵食品中苯乳酸的含量。利用超高效液相色谱-串联四级杆质谱(ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)验证了样品中存在苯乳酸。2D-HPLC方法:第一维色谱柱为C18色谱柱,流动相为0.1%甲酸和甲醇;第二维色谱柱为C8色谱柱,流动相为0.05%三氟乙酸和乙腈,流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长210 nm。结果表明:该方法在0.4~10.0 mg/L内呈现良好的线性关系,r=0.999 9,检出限0.16 mg/L,定量限0.52 mg/L,方法的日内和日间重复性相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)分别为0.60%和0.94%,5种发酵食品的加标回收率91.79%~107.37%,RSD<7.5%;UPLC-MS/MS验证样品中含有苯乳酸。利用2D-HPLC法测定食品中的苯乳酸前处理简单、结果准确、抗干扰能力强,适用于大批量样品检测,为2D-HPLC法检测发酵食品中组分提供理论依据。

二维液相色谱法测定尼美舒利血药浓度并研究其颗粒剂的人体生物利用度

目的采用二维液相色谱法测定尼美舒利血药浓度并评价尼美舒利颗粒剂相对片剂的生物利用度。方法本研究为开放、随机、双周期交叉、口服给药的单中心试验。试验受试者共20人,清洗期为1周。在服药前(0)和口服100 mg的药物后0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0、12.0、16.0、24.0 h(共16点)从肘静脉取血4.0 mL用于药物浓度分析。采用二维液相色谱法测定给药后不同时间尼美舒利的血药浓度。利用SPSS 13.0软件计算药动学参数和进行统计分析。结果颗粒剂与片剂的药动学参数如下:AUC0～24分别为(34.783±13.174)和(34.638±11.659)μg·h·m L-1;AUC0～∞分别为(35.624±13.868)和(35.624±12.187)μg·h·m L-1;Cmax分别为(4.986±1.097)和(4.780±1.287)μg·m L-1;tmax分别为(2.1±0.7)和(3.6±1.0)h;t1/2分别为(3.2±1.1)和(3.6±1.1)h;MRT分别为(5.7±1.6)和(7.4±1.7)h;受试制剂对参比制剂的相对生物利用度(以AUC0～24作为评价依据)为(103.6±28.0)%。ln AUC0～24、ln AUC0～∞、ln Cmax的90%可信区间分别为89.1%～111.9%、88.6%～111.2%、98.2%～113.9%。结论二维液相色谱法测定尼美舒利血药浓度快速、准确;颗粒剂与片剂在空腹给药时在人体的吸收量差异无统计学意义,具有生物等效性。

二维高效液相色谱法结合拦截技术测定奈韦拉平血药浓度

目的:建立全自动二维色谱法(2D-HPLC)结合拦截技术测定人血清中奈韦拉平浓度的方法。方法:样品采用高氯酸沉淀蛋白直接进样的方法,用二维高效液相色谱法在线固相萃取并分析测定。第一维色谱柱为Aston SC2柱(25 mm×3.5 mm,5μm);流动相为甲醇-0.06 mol·L^(-1)三乙胺(调pH=6.9)(23∶77,v/v);流速:1.0 ml·min^(-1);第二维色谱柱为Aston SN(100 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.04 mol·L^(-1)磷酸二氢钾(磷酸调pH=3.0)(45∶55,v/v);流速:1.2 ml·min^(-1);中间柱为Aston SCX MC2(3.0 mm×10 mm,5μm);检测波长:281 nm;柱温:40℃;进样量:200μl。结果:奈韦拉平在0.1～10.0μg·ml^(-1)内与峰面积线性关系良好,r=0.999 9,最低定量限(LOQ)为0.1μg·ml^(-1),绝对回收率为92.51%～94.94%(RSD=1.6%,n=5),日内、日间RSD分别为1.51%～1.89%和1.52%～1.92%(n=5)。结论:该方法快速、简便、准确、重复性好,适用于临床上奈韦拉平的血药浓度检测。

二维高效液相色谱法测定葡萄酒中柠檬酸含量

目的建立二维高效液相色谱测定葡萄酒中柠檬酸的分析方法。方法样品经稀释后,13000 r/min高速离心10 min,以pH 1.6 20 mmol/L磷酸二氢钾缓冲溶液/甲醇为流动相,经一维C_8色谱柱预分离,将目标物通过流通阀切换至二维C_(18)分析柱。结果在优选条件下,方法线性范围为15~200 mg/L,线性相关系数r^2不低于0.9999,检出限(S/N=3)为4.7 mg/L,样品回收率为98.84%~102.40%,测定结果的相对标准偏差(RSD)为0.095%~0.94%。结论该方法操作简便,能准确快速测定葡萄酒中柠檬酸含量。

在线二维柱切换-超高效液相色谱法同时测定明目地黄丸中莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚的含量

建立了二维柱切换-超高效液相色谱法同时测定明目地黄丸中莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚含量的方法。一维色谱柱为Thermo Accucore XL C_（18）（250 mm×2.1 mm,4μm）,二维色谱柱为DIONEX Acclaim phenyl-1（150 mm×4.6 mm,3μm）,一维分析流动相为乙腈-水,梯度洗脱,二维分析流动相为乙腈-水,等度洗脱,14.5 min进行阀切换;检测波长：0~14.5 min为240 nm,14.5~30 min为275 nm,流速：0.5 m L/min,柱温：30℃。30 min即可完成明目地黄丸中莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚的含量测定,并有效地将莫诺苷同分异构体分离。莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚的线性范围分别为7.6~377 mg/L,9.2~459 mg/L,8.4~419 mg/L和8.2~409 mg/L,相关系数为0.9999,加样回收率为98.3%~100.2%。本方法快捷高效,可对控制明目地黄丸质量提供参考。