目的建立一种基于自动化的快速核酸提取方法,联合三重实时荧光定量PCR技术,鉴别羊肉制品的真伪。方法分别采用全自动核酸提取法、磁珠手提法与柱提法对不同状态羊肉制品进行核酸提取,比较不同方法的提取时间差异,通过三重实时荧光定量PC...目的建立一种基于自动化的快速核酸提取方法,联合三重实时荧光定量PCR技术,鉴别羊肉制品的真伪。方法分别采用全自动核酸提取法、磁珠手提法与柱提法对不同状态羊肉制品进行核酸提取,比较不同方法的提取时间差异,通过三重实时荧光定量PCR扩增结果评估不同方法的提取效果。以GB/T38164—2019《常见畜禽动物源性成分检测方法实时荧光PCR法》为对照,对市售的羊肉制品进行平行检测,评估本方法的检测性能。结果与磁珠手提法、柱提法相比,全自动核酸提取法的提取时间缩短了15~30 min,且提取的核酸扩增效果更好。全自动核酸提取法在羊猪混合样品中羊源核酸检出限为0.010mg/g。全自动核酸提取法在生鲜肉、生肉及熟肉制品等多种类型产品中提取的羊源核酸PCR检测结果的变异系数(coefficient of variation,CV)均小于3.000%。分别采用三重实时荧光定量PCR法与GB/T38164—2019对全自动提取的21份市售的涵盖不同类型的羊肉制品核酸进行平行检测,符合率为100.00%。结论本研究方法可为羊肉制品掺假的快速真伪鉴别提供操作简便、稳定灵敏、快速准确的整套解决方案。展开更多
目的研究甲型H1N1流感病毒核酸提取的比较准确和有效的方法。方法选用2014年12月至2015年12月就诊的甲型H1N1流感患者的咽拭子共40份作为研究对象。对所获得的标本进行10-1~10-4的系列稀释,获得不同浓度的流感病毒标本备检。主要采用三...目的研究甲型H1N1流感病毒核酸提取的比较准确和有效的方法。方法选用2014年12月至2015年12月就诊的甲型H1N1流感患者的咽拭子共40份作为研究对象。对所获得的标本进行10-1~10-4的系列稀释,获得不同浓度的流感病毒标本备检。主要采用三种试剂盒进行实验:一种是Promega公司的Maxwell16全自动核酸提取仪以及该提取仪的配套试剂盒,为A组,一种是QIAGEN公司的Rneasy Mini Kit,为B组,第三种则是国产的H生物公司的RNA提取试剂盒,为C组。对三种方法的核酸提取情况进行比较。结果对同一份咽拭子的核酸进行提取,A组所提取的总RNA浓度最高,B组的总RNA浓度次之,C组的总RNA浓度最低。A组在各个稀释浓度的流感病毒提取率均较高,差异均具有统计学意义(P<0.05);C组和B组随着稀释浓度的增大,流感病毒的提取率逐渐降低,尤其是C组当稀释浓度为10-4时,提取不到流感病毒。结论全自动核酸提取仪对核酸的提取效果较好,即使在高倍稀释的情况下也能够达到较高的核酸提取率,避免了手工提取的误差,是一种快捷有效的检测方法,值得在临床上推广使用。展开更多
文摘目的建立一种基于自动化的快速核酸提取方法,联合三重实时荧光定量PCR技术,鉴别羊肉制品的真伪。方法分别采用全自动核酸提取法、磁珠手提法与柱提法对不同状态羊肉制品进行核酸提取,比较不同方法的提取时间差异,通过三重实时荧光定量PCR扩增结果评估不同方法的提取效果。以GB/T38164—2019《常见畜禽动物源性成分检测方法实时荧光PCR法》为对照,对市售的羊肉制品进行平行检测,评估本方法的检测性能。结果与磁珠手提法、柱提法相比,全自动核酸提取法的提取时间缩短了15~30 min,且提取的核酸扩增效果更好。全自动核酸提取法在羊猪混合样品中羊源核酸检出限为0.010mg/g。全自动核酸提取法在生鲜肉、生肉及熟肉制品等多种类型产品中提取的羊源核酸PCR检测结果的变异系数(coefficient of variation,CV)均小于3.000%。分别采用三重实时荧光定量PCR法与GB/T38164—2019对全自动提取的21份市售的涵盖不同类型的羊肉制品核酸进行平行检测,符合率为100.00%。结论本研究方法可为羊肉制品掺假的快速真伪鉴别提供操作简便、稳定灵敏、快速准确的整套解决方案。
文摘目的研究甲型H1N1流感病毒核酸提取的比较准确和有效的方法。方法选用2014年12月至2015年12月就诊的甲型H1N1流感患者的咽拭子共40份作为研究对象。对所获得的标本进行10-1~10-4的系列稀释,获得不同浓度的流感病毒标本备检。主要采用三种试剂盒进行实验:一种是Promega公司的Maxwell16全自动核酸提取仪以及该提取仪的配套试剂盒,为A组,一种是QIAGEN公司的Rneasy Mini Kit,为B组,第三种则是国产的H生物公司的RNA提取试剂盒,为C组。对三种方法的核酸提取情况进行比较。结果对同一份咽拭子的核酸进行提取,A组所提取的总RNA浓度最高,B组的总RNA浓度次之,C组的总RNA浓度最低。A组在各个稀释浓度的流感病毒提取率均较高,差异均具有统计学意义(P<0.05);C组和B组随着稀释浓度的增大,流感病毒的提取率逐渐降低,尤其是C组当稀释浓度为10-4时,提取不到流感病毒。结论全自动核酸提取仪对核酸的提取效果较好,即使在高倍稀释的情况下也能够达到较高的核酸提取率,避免了手工提取的误差,是一种快捷有效的检测方法,值得在临床上推广使用。