蛋白免疫印迹和全自动蛋白质定量分析的比较研究

目的:比较传统的蛋白免疫印迹和全自动蛋白质定量分析检测特异性蛋白质相对含量的差异,并进行方法学优化,为蛋白质定量分析提供技术参考。方法:分别使用两种系统对不同分子量的目标蛋白进行检测,比较两种系统的灵敏度、重复性和适用范围。结果:相比传统WB系统,全自动系统灵敏性、重复性和稳定性更高,并且可进行多分子同时检测,尤其在检测微量蛋白、分子量较大或较小的蛋白以及高通量方面具有优势。结论:全自动蛋白检测是一种灵敏、高效的检测特异性蛋白丰度变化的系统,值得在科研和医学检验中推广。

基于质谱法的食品中蛋白质定量分析研究

通过搭建管式燃烧炉-四极杆质谱仪实验平台检测食品中蛋白质含量,称取各1 g 5种蛋白质含量不同的食品样品,在高温富氧环境下利用管式燃烧炉对食品样品进行充分爆燃,气体产物进入电子轰击(EI)离子源离子化后,直接引入四极杆质量分析器进行检测。利用四极杆质量分析器的选择离子扫描功能,通过扫描NO2+离子峰强度来定量分析氮元素含量,并绘制标准曲线,线性相关系数(R2)为0.999 92,相对标准偏差(RSD)为2.1%~6.1%。利用氮元素含量结合氮-蛋白质转换系数6.25计算得到蛋白质含量。本研究为食品中蛋白质含量的定量分析提供了一种绿色、快速、准确、低成本的检测方法。

应用微量蛋白质定量分析评估临床样本炎性反应状态

目的比较实时荧光定量PCR(qPCR)和微量蛋白质定量分析方法在乳腺癌患者外周血单核细胞中炎性相关因子caspase-1和IL-1β表达检测中的效果差异。方法收集10例乳腺癌患者的术前、术后2 h配对外周血样本各约6 mL,分离出外周血单核细胞并通过脂多糖活化;分别用qPCR和微量蛋白质定量分析方法,检测caspase-1和IL-1β在单核细胞中的mRNA和蛋白质表达水平,并使用了β-actin进行了数据归一化,比较两种检测方法结果的异同,并评估其优缺点。结果绝大部分患者经过手术应激后外周血单核细胞数量明显增加。在mRNA水平上,与术前相比,术后caspase-1和IL-1β在50%(5/10)和40%(4/10)的患者中呈现升高趋势,其余表现为降低(分别为40%和50%)或改变甚微无统计学意义(均为10%)。而微量蛋白质定量分析结果显示,与术前相比,术后caspase-1和IL-1β蛋白在60%(6/10)和60%(6/10)的患者中呈现升高趋势,其余表现为降低(分别为30%和20%)或改变较小无统计学意义(分别为10%和20%),且80%的患者在术后出现了明显增加的caspase-1和IL-1β活性切割电泳条带。重要的是,有30%和40%的患者手术前后caspase-1和IL-1βmRNA和蛋白质水平变化不一致。结论微量蛋白质定量分析方法具有样本用量少、灵敏度高、重复性好、操作相对简单等优点,更适于临床样本的炎性反应状态评估。

NIRS定量分析油菜种子含油量、蛋白质含量数学模型的创建

用近红外光谱 (NIRS)分析油菜品质。采用残余法测试了近 2 116份甘蓝型油菜品种资源种子的含油量 ,用近红外仪采集数据 ,选择 12 88份代表性样品 ,建立了数学模型。用该模型测试 96份待测样品 ,其NIRS的测试值与残余法测试的油菜种子含油量实测值相关系数为 0 .950 3 ,相对误差小于 3 .5% ,用凯氏定氮法测试了 63 7份油菜籽饼粕的蛋白质含量 ,选择 168份代表性样品 ,建立数学模型。 3 0份样品检测模型 ,NIRS测试值与凯氏定氮法测试的油菜籽饼粕蛋白质含量的实测值相关系数为 0 .9515,相对误差小于 6%。结果表明 ,这 2个数学模型已经可用来准确、快速、无污染。

质谱与蛋白质和多肽的定量分析

与天然或合成的小分子药物相比，蛋白质多肽类药物具有结构特殊、相对分子质量(M1)巨大、体内浓度低、存在内源性干扰等特点。这使得该类药物的分析方法不同于传统药物，大大增加了检测的难度。文献报道的定量分析方法有生物检定法、免疫学法、同位素标记法和质谱技术等。

NITS定量分析单粒稻谷蛋白质含量研究

应用近红外透射光谱(NITS)技术,采用改进的偏最小二乘法(MPLS)建立单粒稻谷蛋白质含量(PC)的定量分析回归方程。单粒稻谷所得回归方程的校正标准误差(SEC)、交叉检验标准误差(SECV)分别为0.85和1.89;校正相关系数(RSQ)和交叉验证相关系数(1-VR)分别为0.90和0.89。内部交叉验证和外部验证结果表明近红外定量分析有很高的准确度,近红外光谱法完全可以替代单粒稻谷常规化学方法分析进行水稻品质育种。

蛋白质水解液中氨基酸组成的定量分析

以氯甲酸 9 芴基甲酯 (FMOC Cl)为柱前衍生化试剂在液相色谱上分离 17种常见氨基酸的衍生物并测定其摩尔吸光系数。用绝对分析法和标准曲线法对标准氨基酸溶液进行了定量分析 ,除组氨酸外两种方法测定结果的相对偏差在 5 .0 0 %以内。对氨基酸的稳定性进行模拟水解实验 ,发现在 110℃ 2 4h的水解条件下 ,丝氨酸等不稳定氨基酸的降解较在 15 0℃ 1.5h条件下小。用绝对分析法定量测定了牛胰岛素在不同水解条件下水解液中氨基酸的含量 ,大部分氨基酸的相对收率都接近 10 0 %。

稳定同位素标记方法在蛋白质组学定量分析中的应用

蛋白质表达水平定量分析是蛋白质组学研究的一项关键内容,它依赖于精确的、高通量的、具重复性的技术。目前,应用稳定同位素标记技术定量蛋白质表达水平是最准确的方法之一,且联合色谱质谱技术更具优势。本文论述了这一技术的广泛应用和最新的研究进展。

集成化蛋白质组定量分析平台的构建及应用

为提高蛋白质组定量分析的准确度、通量和自动化程度,构建了由微升级混合离子交换色谱、亲水型固定化酶反应器(hIMER)和纳升级反相色谱-电喷雾串级质谱(nanoRPLC-ESI-MS/MS)组成的集成化蛋白质定量分析平台。该平台实现了二甲基化标记蛋白质样品在线分离、酶解、肽段分离鉴定和定量分析。采用质量比为1∶1的轻、重标记的蛋白质样品考察该平台的定量性能,发现蛋白质水平二甲基化标记效率为90%;蛋白质经hIMER在线酶解10 min产生的漏切及酶解产物在hIMER柱上的非特异性吸附对定量准确度的影响较小,所有定量到的重/轻标记的蛋白质质量比的平均值为1.01。最后将该平台应用于小鼠腹水型肝癌淋巴道高、低转移细胞系差异蛋白质的分析,发现了12种蛋白质在高转移细胞系中低表达,15种蛋白质在高转移细胞系中高表达。以上结果证明了该平台可以实现高准确度和高通量的蛋白质组定量分析。

蛋白质定量分析的进展

蛋白质是生命的起源 ,蛋白质的定量分析涉及到生产与科研的各领域和与生命有关的许多行业。

巴山木竹蛋白质可见/近红外光谱定量分析模型研究

探讨了运用可见/近红外光谱分析技术建立巴山木竹蛋白质定量分析模型的可行性。运用传统方法实测了样品蛋白质含量,并运用光谱分析软件建立了样品蛋白质含量与光谱数据的PLS与PCR校正模型。基于主要性能指标对不同光谱预处理与建模方法进行评价,筛选出最优校正模型并使用验证集样品对校正模型的预测能力进行了验证。巴山木竹竹叶与竹秆蛋白质最优校正模型的决定系数(R_c^2)分别为0.935和0.862,交叉验证均方差(RMSEC)分别为0.351和0.172;经外部验证,预测模型决定系数(R_p^2)分别为0.916和0.874,验证集样品的相对分析误差(RPD)分别为3.562和2.840。表明应用可见/近红外光谱分析技术可以实现巴山木竹蛋白质含量快速检测。

利用近红外光谱技术对牛奶中蛋白质含量进行定量分析

本文在实验测量的基础上,通过对牛奶近红外光谱的分析,确立最佳回归波长位置,采用多元线性回归方法,建立了数学模型,并对其进行预测,效果比较理想。

醋糟料平菇蛋白质营养价值定量分析与评价

本文按照蛋白质的质量标准，运用数学计算公式，分别计算出醋糟平菇（试验）和棉籽壳平菇（对照）的蛋白质营养价值的三项指标值．通过定量分析，结果表明：虽然醋糟料平菇的蛋白质含量低于棉籽壳平菇，但其蛋白质质量却高于棉籽壳平菇，这说明醋糟料并不会降低平菇的质量，从而为进一步推广使用醋糟料栽培平菇提供了依据．

微生物蛋白质组学的定量分析

越来越多的微生物基因组序列数据为系统地研究基因的调节和功能创造了有利条件 .由于蛋白质是具有生物功能的分子 ,蛋白质组学在微生物基因组的功能研究中异军突起、蓬勃发展 .微生物蛋白质组学的基本原则是 ,用比较研究来阐明和理解不同微生物之间或不同生长条件下基因的表达水平 .显而易见 ,定量分析技术是比较蛋白质组学中急需发展的核心技术 .

iQ^(TM) 200全自动尿沉渣定量分析仪的临床应用与评价

目的评价iQTM200全自动尿沉渣定量分析仪的性能及临床应用价值。方法我们对仪器的精密度、携带污染率、线性等指标进行了评价,并随机选择370例患者尿标本,分别用iQTM200全自动尿沉渣定量分析仪及手工定量尿沉渣镜检法对红细胞、白细胞进行比对分析。结果仪器的批间精密度分高值、中值、低值3个水平进行测定,分别为7.1%、2.8%、7.3%;批内精密度红细胞变异系数(CV)为5.5%、白细胞CV为4.0%;红细胞、白细胞携带污染率分别为0%～1.23%、0.13%～1.08%;线性评价:红细胞、白细胞在0～2000μl内相关系数分别为0.997、0.999。iQTM200全自动尿沉渣定量分析仪与手工定量尿沉渣镜检法相对灵敏度分别为89.5%、84.6%。结论iQTM200全自动尿沉渣定量分析仪可用于临床进行尿沉渣的定量分析,以替代繁琐的手工定量尿沉渣镜检。

一种结合生物医学知识的蛋白质组非标记定量分析方法及其应用

基于质谱的非标记定量方法能够对复杂蛋白质组进行规模化分析,同时,在定量分析的基础上理解和解释蛋白质组的功能和相互作用关系更有意义.这需要建立一种有效的兼容定量和定性分析结果的方法.针对这一需求,本文首先借鉴了NSAF(normalized spectral abundance factor)算法采用肽段计数对蛋白质组数据进行定量,进一步结合共享肽对该方法进行优化.以此为基础,通过g:Profiler获取海量蛋白质组的功能注释信息,在定量分析的过程中,同步实现了对蛋白质组数据的功能性分析.本文选择来自人心脏、小鼠心脏、小鼠肝脏的三组线粒体蛋白质组数据对该方法进行验证,按照功能性分析将三组数据划分为若干功能组或信号通路,并进行相关性、功能聚类以及电子传递链分析.结果表明,结合共享肽的优化算法克服了对低丰度蛋白质的错误估计,提高了非标记定量的准确性.同时,结合生物医学知识的分析方法解释了蛋白质组的功能和相互作用关系,为差异比较蛋白质组学、疾病蛋白质组学以及功能蛋白质组学等组学研究提供了新的方法.

全自动蛋白质分析仪测定奶粉中蛋白质含量

目的：探讨用全自动蛋白质分析仪与自动进样系统测定奶粉中蛋白质含量，建立自动化程度最高的测定蛋白质的新模型；为低含量蛋白质的测定提供新的方法依据。方法：用Kjdtec 2400-自动分析仪与2460-自动进样系统测定奶粉中蛋白质含量。结果：采用全自动蛋白质分析仪测定12份奶粉中蛋白质与国标方法中人工蒸馏滴定法所得的结果作比较。差异无统计学意义（P〉0．05）.本方法测得的回收率在99．11％～100．74％之间；相对标准偏差为1．08％。结论：全自动蛋白质分析仪法具有容易掌握。测定快速，准确和自动化程度最高等优点，是值得广泛应用的分析方法。

Western印迹中蛋白质定量分析的替代方法

Western印迹广泛采用显像密度计法对特异性蛋白质表达进行定量,但是仍然存在敏感性的问题尚未解决。同时,昂贵的试剂与复杂的设备限制了其应用。建立了一种改良定量检测法,使用碱性磷酸酶标记的第二抗体,以萘酚磷酸盐和快红作反应底物。吸附膜上的终末显色用有机溶剂洗脱,通过测定光吸收值定量。结果显示该法更简便、快速、经济而不失其敏感性。