预防O139霍乱B亚单位/全菌体口服疫苗的研究

目的 研制预防O139霍乱的B亚单位／全菌体口服疫苗。方法 应用重组霍乱毒素B亚单位及福尔马林灭活的O139霍乱弧菌全菌体，构建成B亚单位／全菌体疫苗，并进行安全性及免疫原性检测。结果 经连续3天大剂量灌喂小鼠后，未见体重下降、发病或死亡现象。全部小鼠均健康活存。以腹腔或口服免疫小鼠后，均能产生外周血或肠道局部高滴度的特异抗体。免疫小鼠对O139活菌攻击有良好的保护作用。结论B亚单位／全菌体口服疫苗在小鼠试验中安全性及免疫原性良好。

血清2型猪链球菌全菌体蛋白的免疫蛋白质组学研究

目的寻找血清2型猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)全菌体蛋白中具有抗原活性的蛋白,为S.suis特异诊断抗原和新的疫苗侯选抗原的筛选提供线索。方法采用免疫蛋白质组学技术,分析和研究血清2型S.suisSC84菌株全菌体蛋白中能与猪链球菌病人恢复期血清发生免疫杂交的蛋白点。应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对这些蛋白进行鉴定。结果S.suisSC84全菌体蛋白与3份猪链球菌病人恢复期血清进行免疫杂交反应,发现8个与IgG抗体发生阳性反应的蛋白点。经MALDI-TOF-MS鉴定,这8个蛋白分别为溶菌酶释放蛋白(MRP)、琥珀酸脱氢酶/延胡索酸还原酶黄素蛋白亚单位(SDHFp/FRDFp)、触发因子(TF)、延长因子G(EF-G)、细菌糖磷酸转移酶系统甘露糖特异ⅡAB亚单位(PTS/MAN-IIAB)、丙酮酸激酶(PK)、6-磷酸果糖激酶(6-PFK)、色氨酸-tRNA合成酶(TrpRS)。MRP定位于胞壁;TF、PTS/MAN-IIAB、PK及TrpRS定位于胞质;SDHFp/FRDFp、EF-G及6-PFK定位于胞外。并且确定了它们在S.suis05ZYH33菌株基因组的编码基因。结论在S.suisSC84全菌体蛋白中发现8个抗原活性蛋白,其中SDHFp/FRDFp、TF、EF-G、PTS、PK、6-PFK及TrpRS是在S.suis新发现的抗原性蛋白,它们作为特异诊断抗原和疫苗侯选抗原的前景有待进一步研究。

O139霍乱灭活全菌体菌苗免疫后人群抗体水平测定

Ｏ１３９霍乱弧菌经甲醛灭活制备而成的全菌体菌苗在广西田阳县进行临床考核。每组５０名中学生经肌肉途径接种４５亿菌和９０亿菌两种剂量，一个月后８０％接种者血清中杀弧菌抗体升高，最高可达１∶１６０，免疫后３个月开始缓慢下降，但仍有６８－７２％接种者抗体效价在１∶２０以上。高剂量组半数接种者的杀弧菌抗体可维持存在６个月。血清中凝集抗体升高明显，但３个月后下降也明显。与对照组Ｏ１菌苗相比，两种抗体水平升高与下降趋势一致。采用ＥＬＩＳＡ法测定抗毒抗体，Ｏ１３９菌苗组与Ｏ１菌苗组结果相似，均有一定上升。

全菌体灭活菌苗的现状和新策略(下)

对全菌体灭活菌苗（WCV）防治传染病已进行广泛的研究,WCV是预防疾病的一种经济、安全、有效的方法,但WCV的缺点是,胃肠外免疫能引起不良反应,而口服免疫常需大剂量,且免疫力短暂。近期研究表明,能提高WCV免疫原性和增强口服免疫应答的新方法极有希望提高这些菌苗的效力。

LPS或全菌体阻断体内炎性单核细胞向树突状细胞(DC)的转化

DC是位于体内淋巴和一些非淋巴组织的专职性抗原提呈细胞(APC)，它在机体免疫系统防御外来病原微生物的过程中起到很重要的作用。体内的迁移DC可以来源于驻留在外周组织中的DC，也可以来源于血液中的单核细胞。研究表明一些细胞因子和内环境的因素会影响单核细胞向巨噬细胞或向DC的分化。由于DC所起的重要抗原提呈作用，当机体受感染后产生迁移DC的能力就直接决定着获得性免疫能力的强弱。通过皮下注射活的或已灭活的细菌或者LPS，诱导了强烈的局部先天免疫应答从而阻断了单核细胞分化生成DC以及向引流淋巴结(DLN)的迁移。表明强烈的先天免疫应答能抑制机体对颗粒性抗原的获得性免疫反应。

全菌体灭活菌苗的现状和新策略(上)

对全菌体灭活菌苗(WCV)防治传染病已进行了广泛的研究,WCV是预防疾病的一种经济、安全、有效的方法,但WCV的缺点是,胃肠外免疫能引起不良反应,而口服免疫常需大剂量,且免疫力短暂.近期研究表明,能提高WCV免疫原性和增强口服免疫应答的新方法极有希望提高这些菌苗的效力.

鸭疫里默氏杆菌抗体检测的全菌体抗原间接ELISA方法的建立

本研究建立了检测鸭疫里默氏杆菌(Rimerrlla anatipestifer,RA)抗体的全菌体抗原间接ELISA方法,最佳血清稀释倍数为1:100。以RA1的甲醛灭活全菌体为包被抗原,棋盘滴定法试验确定其最适抗原包被浓度为5×108CFU/mL。与全菌体裂解抗原和重组P25蛋白为包被抗原的间接ELISA方法相比较,三者均可检测不同血清型RA标准阳性血清,结果符合性良好。用该方法检测雏鸭接种鸭疫里默氏杆菌蜂胶灭活疫苗后血清抗体水平的变化,发现免疫后10天抗体水平开始上升,二免后10天抗体水平达到峰值。

口服流感嗜血杆菌全菌体疫苗接种预防慢性支气管炎急性加剧

背景：慢性支气管炎急性加剧是由病毒、细菌或环境因素诱发的严重情况。此病可引起死亡，抗生素治疗并无特效。现已研制了一种口服流感嗜血杆菌疫苗。 目的：评价口服未定型流感嗜血杆菌全菌体灭活疫苗预防慢性支气管炎反复急性发作的效果。

钩端螺旋体外膜菌苗研究(摘要)

现用的钩端螺旋体(简称钩体)全菌体菌苗预防钩体病已有显著的预防效果,但因接种剂量大、针次多、人群不易接受、给预防工作带来了一定的困难。为此,于1978年～1984年我们所与浙江医科大学和浙江省卫生防疫站共同协作,先后完成了钩体外膜菌苗实验室小量研制与人体试验观察,结果证实外膜苗既有良好的免疫效果,又有使用方便等优点。

医药废水中大肠杆菌抗体制备及检测方法

该文研究制备了大肠杆菌全菌体抗体,经纯化后抗体蛋白含量为2.50 mg/mL,测得全菌体抗体的效价大于25 600,并使用自制的抗体,建立了测定医药废水中大肠杆菌的间接酶联免疫吸附（ELISA）方法。间接ELISA方法的最佳测定条件为：抗原最佳包被浓度为200倍,一抗和酶标二抗的稀释浓度分别为稀释12 800倍和2 000倍,以0.5%牛血清白蛋白（BSA）作为封闭液,封闭时间为2 h。在最佳测定条件下,大肠杆菌在1×10^3-1×10^9 cfu/mL表现出良好的线性关系。采用所建立的间接ELISA方法检测了实际医药废水中的大肠杆菌,检测限为10^3 cfu/mL。

猪源肠外致病性大肠杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立

利用制备的猪源肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)全菌体蛋白建立一种检测猪源ExPEC抗体的间接ELISA方法。将2株猪源ExPEC SDjie18-10(O;)、HByan18-2(O;)超声裂解的全菌体蛋白作为包被抗原,对反应条件进行优化,建立检测猪源ExPEC抗体的间接ELISA方法,并进行临床应用与评价。该方法的最佳条件:包被抗原浓度为15μg/m L,37℃1 h+4℃过夜;2%BSA于37℃封闭2 h;血清稀释度为1∶800,37℃孵育30 min;酶标二抗稀释度为1∶5 000,37℃作用30 min;显色时间为37℃15 min。该方法可特异性检测猪源ExPEC抗体,阳性血清稀释至1∶6 400仍可检出,与其他猪病原阳性血清均无交叉反应,批内及批间变异系数均小于10%。应用间接ELISA与MAT进行符合性比较及临床猪血清样品感染抗体的同步检测,两种方法的符合率分别为93.33%和94.50%且无显著性差异(P>0.05),具有较高的均一性,同时间接ELISA的感染抗体阳性检出率(19.00%)略高于MAT(17.50%),两者检测结果高度一致(K=0.816)。基于猪源ExPEC全菌体蛋白建立的猪源ExPEC抗体间接ELISA检测方法,具有良好的特异性、敏感性和重复性以及临床应用的可靠性,可用于猪源ExPEC的免疫监测和流行病学调查。

直投式酸奶发酵剂乳酸菌种遗传稳定性的研究

为制备发酵性能优良的直投式酸奶发酵剂,研究乳酸菌Q26菌株传代过程中在转管不同次数时的形态变化,采用全菌体蛋白电泳方法对比Q26菌株转管不同次数的蛋白表达差异。结果表明,Q26菌株在连续传代30代时遗传稳定性良好,适合作为直投式酸奶发酵剂使用。

福州永泰温泉嗜热菌的分离与鉴定

采用全菌体蛋白凝胶电泳(SDS-PAGE)对从福州永泰温泉中分离到的60株嗜热菌进行了预筛选,再通过16S rDNA序列分析鉴定出8株代表菌.结果表明全菌体蛋白SDS-PAGE分析是一种简便、快速的菌株筛选方法.

大庆林甸温泉嗜热菌分离及鉴定

目的对大庆林甸温泉嗜热菌进行分离、鉴定,并对其特性进行研究。方法应用常规的稀释涂布法分离和纯化嗜热菌,采用全菌体蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),结合细菌形态学及生理生化指标对分离的菌株进行鉴定,并对分离的菌株进行生长特性研究。结果分离纯化出的3株嗜热菌,均为革兰氏阳性菌,菌体杆状,直或接近直,均有芽孢、荚膜、鞭毛,V-P试验、触酶试验、氧化酶试验均阳性,均能降解淀粉。3株菌生长温度范围为35～65℃,pH值范围为4.5～11.5。结论 3株嗜热菌初步鉴定为芽孢杆菌属。

肺炎链球菌新型疫苗研究进展

肺炎链球菌是引起肺炎的主要病原体,肺炎链球菌性疾病是全球严重的公共卫生问题之一,每年约导致160万人死亡。目前,已明确的肺炎链球菌血清型高达100种,已上市的预防肺炎链球菌感染的疫苗只覆盖了部分肺炎链球菌血清型,无法预防非疫苗血清型和不可分型肺炎链球菌感染。因此,新型“通用型”肺炎链球菌疫苗的研发迫在眉睫,本综述旨在总结目前在用或在研究疫苗策略的优势和局限性,为进一步研发肺炎链球菌疫苗提供新的参考思路。

鲍曼不动杆菌疫苗的研究进展

鲍曼不动杆菌为不动杆菌属中最常见的一种革兰阴性杆菌,同时也是医院获得性感染的主要致病菌之一。由于其广泛的耐药性,普通抗生素对其治疗效果已不明显。近年来,国内外学者尝试通过研制抗菌疫苗的手段来防治鲍曼不动杆菌感染,主要有灭活全菌体疫苗、外膜囊泡、重组蛋白亚单位疫苗、荚膜多糖候选疫苗、联合疫苗等。现就鲍曼不动杆菌疫苗的研究进展进行了综述。