改良盐析法提取全血基因组DNA的影响因素研究

目的观察红细胞裂解时间、DNA纯化方式以及DNA干燥时间对改良盐析法提取全血基因组DNA的影响。方法改良盐析法提取全血基因组DNA时,分别采用不同的红细胞裂解时间、DNA纯化方式以及DNA干燥时间。使用流式细胞术检测红细胞裂解后的细胞总数及死细胞比例,紫外分光光度计检测DNA的浓度和纯度,琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物。结果红细胞裂解时间从10 min延长至120 min,死细胞比例随时间延长而增加,但细胞总数、DNA产量与纯度无明显变化;采用异丙醇沉淀法纯化DNA得到的DNA产量与纯度均显著高于使用DNA分离柱纯化的DNA;DNA干燥时间从120 min缩短至30 min,既不影响DNA的产量与纯度,也不影响后续PCR扩增实验。结论改良盐析法提取全血基因组DNA时,红细胞裂解时间可延长至120 min,DNA干燥时间可缩短至30 min,异丙醇沉淀法优于DNA分离柱纯化的DNA。

三种全血基因组DNA提取方法的比较

目的 :比较三种不同的DNA提取方法提取人全血基因组DNA对DNA提取效率、纯度以及PCR扩增的效果影响。方法 :分别应用中山医科大学达安公司DNA提取液 ,珠海黑马医学仪器有限公司DNA提取液 ,胍盐酸法三种不同的方法提取人全血基因组DNA。结果 :三种方法提取的DNA纯度平均分别为 :1.4 8,1.5 1,1.5 6 ,各组间差异无显著性。 2 0 0 μL全血中所提取DNA总量平均分别为 1.6 μg ,2 .3μg ,4 .1μg。用 0 .8%琼脂糖凝胶电泳鉴定胍盐酸法制备的DNA效果较其它两种方法好 ,PCR扩增效果差异不明显。结论 :胍盐酸法提取的DNA总量明显高于其它两种方法 ,提取效率高 ,为三种全血基因组DNA提取方法中之首选。

全血基因组DNA的快速纯化

目的 探讨全血基因组DNA的快速纯化方法。方法 微量全血通过红细胞裂解后,得到白细胞,再通过白细胞裂解,高盐离子去除蛋白,异丙醇沉淀即可得到高纯完整的全血基因组DNA。结果 该方法简单快速,得到的产品产率高(6.94μg/300μl全血),纯高度(A_(260)/A_(280)=1.82,A_(260)/A_(230)=2.08),完整性好(单一条带)。结论 该方法快速、高效,不仅缩短了实验时间,而且还提高了产品质量,可完全满足实验室快速分析的要求。

全自动加样设备抽提全血基因组DNA及其在HLA分型中的应用

目的探索建立全自动加样设备抽提全血基因组DNA方法,并评估其在HLA分型中的应用情况。方法利用Hamilton Microlab STATlet自动加样平台,选择相应的磁珠法试剂,并对加样、裂解、洗涤和洗脱参数进行优化。结果自动抽提的全血基因组DNA 260 nm/280 nm A比值为1.7~1.9,浓度范围为40 ng/μl^100 ng/μl。3000例抽提标本的HLA测序分型可得到清晰的测序图谱,HLA-A、-B和-DRB1分型指定结果准确。结论实验结果显示建立的全自动加样设备抽提全血基因组DNA方法是可行的。

Osx cDNA反义表达载体的构建

目的:构建反义Osterix(Osx)cDNA表达载体。方法:快速提取人全血基因组DNA。以DNA为模板,经过两步PCR扩增获得Osx编码序列,与pGEMR-TEasy连接获得重组克隆载体。将Osx编码序列反向克隆入真核表达载体pcDNA3,进行序列测定。结果:经序列分析证实,Osx扩增序列完全正确,且反向插入到pcDNA3载体。结论:成功构建了Osx反义表达载体,为研究Osx对成骨细胞分化的影响奠定了基础。