红巴梨果实花青素生成相关基因f3h全长片段的克隆

利用 RT-PCR方法从红巴梨成熟果皮中克隆出花青素生成相关基因 f3 h的全长片段 (1 0 95 bp) .核苷酸序列测定表明 ,该基因与苹果的 f 3 h基因同源性高达 97% .

蒲地蓝消炎口服液联合干扰素对肠道病毒71型感染致手足口病患儿病情进展和血清角蛋白18裂解片段M30及全长片段M65的影响

目的:研究蒲地蓝消炎口服液联合干扰素对肠道病毒71型(EV71)感染致手足口病(HFMD患儿病情进展和血清角蛋白18(CK18)裂解片段M30(CK18-M30)及全长片段M65(CK18-M65)的影响。方法:选取2018年5月~2018年10月本院收治的260例HFMD患儿的临床资料及随访资料,将其分为对照组(n=130)和观察组(n=130)。对照组采取干扰素治疗,观察组在对照组基础上加用蒲地蓝消炎口服液治疗。分别比较两组临床疗效、临床症状消退时间、治疗前和治疗后C反应蛋白(CRP)、心肌酶谱[磷酸肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)]、肝功能[丙氨酸氨基转移酶(ALT)]、血清CK18-M30、CK18-M65水平变化及不良反应。结果:对照组与观察组临床总有效率分别为79. 23%和95. 38%(P <0. 05);观察组临床症状消退时间均短于对照组(P <0. 05);与治疗前相比,两组治疗后CK、LDH、CK-MB、ALT、CRP、CK18-M30和CK18-M65水平均有所降低,且观察组降低程度大于对照组(P <0. 05);对照组与观察组不良反应发生率分别为21. 54%和11. 54%(P <0. 05)。结论:蒲地蓝消炎口服液联合干扰素治疗EV71感染致HFMD患儿,能有效提高临床疗效,减轻患儿肝功能损害,增强患儿免疫功能,减少心肌损伤,降低血清CK18-M30、CK18-M65水平,抑制炎症反应,减少不良反应发生率,值得临床进一步推广。

一条新的人肺腺癌耐药相关基因全长cDNA片段的克隆及序列分析

背景与目的:肺癌细胞的多药耐药(multi-drugresistance,MDR)是药物治疗失败的重要原因,但其机制尚未完全清楚。我们已经通过SSH发现了1条新的耐药相关基因片段,经检索GenBank,发现其与2001年4月公布的一条新的基因序列BC006151同源性高达99%。本研究旨在克隆该基因的全长,并检验该基因在几种肺癌细胞株中的表达,为进一步研究其功能和调控奠定基础。方法:根据BC006151基因序列设计引物,通过RT-PCR证实肺腺癌MDR细胞SPC-A-1/cDDP确实包含BC006151基因后,扩增该基因全长cDNA,通过测序对所得序列进行分析,并对其编码蛋白的氨基酸序列进行预测。应用半定量RT-PCR方法检验小细胞肺癌SH77、大细胞肺癌H460、肺腺癌SPC-A-1和SPC-A-1/cDDP等细胞株中该基因mRNA的表达。结果:成功克隆了BC006151基因的全长cDNA片段,长1298bp,它具有完整的阅读框和编码区,并与经SSH获得的片段有极高的同源性。该基因在MDR细胞株SPC-A-1/cDDP的表达明显高于其亲代细胞株;SPC-A-1表达高于H460,SH77未见表达。结论:BC006151基因是与cDDP致肺腺癌MDR密切相关的一条新基因。该基因全长cDNA片段的克隆将有助于阐明其在肺癌MDR发生中的作用。

三种去除非全长cDNA片段方法的比较研究

以小桐子的雌花为材料,用胶回收法、CHROMA-SPIN 400柱离心法和CHROMA-SPIN 400柱自流法分别去除全长cDNA文库构建中非全长cDNA小片段,从去除效果、回收率、成本、实验时长、一次处理量这5个方面对3种方法进行了综合比较与评价。结果表明:CHROMA-SPIN 400柱自流法在回收率方面有明显优势;胶回收法与CHROMA-SPIN 400柱离心法的回收率接近,但胶回收法成本低于CHROMA-SPIN 400柱法,且对非全长片段去除更彻底。反倒是最新的CHROMA-SPIN 400柱离心法在关键方面都不及另两种方法,不提倡使用,结论为胶回收法是去除全长cDNA溶液中非全长片段的理想方法。

含2A片段的重组黄热病毒17D疫苗表达载体的构建

黄热疫苗是一种减毒的黄热病毒17D(YF-17D)活疫苗,是现有疫苗中最安全、最有效的疫苗之一,适于发展为疫苗载体。用RT-PCR法扩增出覆盖YF-17D全长基因组的3个cDNA片段:5′cDNA(A)、3′cDNA(B)和中间cDNA(C),同时引入SP6增强子序列、酶切位点和重复序列。顺序将A和B同E.coli-yeast穿梭质粒pRS424连接,再与C共转染酵母菌,利用缺少色氨酸和尿嘧啶的选择性固体培养基筛选出含YF-17D全长基因组的cDNA质粒。以该质粒为模板,经过DNA重组和酵母同源重组,获得含有口蹄疫病毒蛋白水解酶2A片段的重组YF-17D表达载体。将该表达载体体外转录后,电击转染BHK-21细胞。间接免疫荧光检测结果表明,RNA转录体在BHK-21细胞中进行了稳定的表达;滴度测定与形态学观察结果表明,重组病毒在细胞中的生长曲线等特征同母本YF-17D十分相似。结果提示,利用酵母菌同源重组在2A部位引入异种抗原基因,重组YF-17D表达载体pRS-YF-2A1具有成为高效活疫苗表达载体的潜力。

江苏省新型布尼亚病毒分离株全长S片段基因特征分析

目的分析江苏省新型布尼亚病毒(SFTSV)分离株全长S片段基因的特征,为SFTSV监测和防控提供依据。方法通过GenBank获取江苏省上传的SFTSV毒株全长S片段基因序列信息,通过构建系统进化树鉴定基因型,分析各毒株间核苷酸和氨基酸序列的同源性。结果获取江苏省上传的35株SFTSV毒株基因信息,毒株分离年份为2010—2014年,主要为人源毒株,有28株,占80.00%。基因亚型主要为C4和C2,分别有16和14株,分别占45.71%和40.00%。35株SFTSV毒株全长S片段基因核苷酸序列同源性百分比为94.38%~100.00%,氨基酸序列同源性百分比为89.42%~100.00%;35株毒株与各亚型参考毒株间核苷酸序列同源性百分比为94.11%~100.00%,氨基酸序列同源性百分比为89.18%~100.00%;人源毒株与宿主动物分离株间核苷酸和氨基酸同源性为94.74%~99.91%和91.42%~99.80%。结论江苏省SFTSV分离株序列间亲缘性较近,其核苷酸和氨基酸高度同源。