苗药八爪金龙半仿生提取工艺优选及其提取物抑菌活性研究

目的通过均匀设计法优选八爪金龙半仿生提取工艺条件,并对其提取物的抑菌活性进行研究。方法以岩白菜素含量、HPLC总面积、干浸膏得率为指标,进行综合评判,并将3种工艺提取物的抑菌活性进行比较。结果最佳半仿生提取工艺为八爪金龙加8倍、8倍、6倍水提取3次,3次煎水pH值分别为2.0,6.5,9.0;提取时间依次为85,40,20 min。综合评价Y值及抑菌活性顺序为:醇提取法>半仿生提取法>水提法。结论优选出的半仿生工艺是可行的,且优于水提工艺。

苗药八爪金龙中生物活性成分的研究(Ⅰ)

采用水蒸气蒸馏法、索氏提取法分别提取苗药八爪金龙（Ardisia crispa（Thunb.）DC.）中的挥发油和岩白菜素.利用GC/MS法及HPLC/MS法对挥发油及岩白菜素含量进行测定.结果表明,岩白菜素在30.300～912.000 ng/mL范围内与峰面积具有良好的线性关系（r=-0.999 1）,平均回收率为97.66％（RSD=2.31％）;八爪金龙挥发油主要成分有己醛、（Z）-2-庚烯醛、3-羟基-1-辛烯、石竹烯、龙脑、9,12,15-十八三烯、3-苯基-2-丙烯醛、芳姜黄酮、n-癸酸、十二烷酸、正丁烯基苯酞、棕榈酸等,含量分别为7.72％、1.82％、1.92％、1.85％、2.48％、2.98％、3.06％、5.17％、4.08％、7.36％、3.11％、29.11％.GC/MS法测定出挥发油中的27个成分,占挥发油总量的87.17％.建立的HPLC/MS方法简单、准确、重复性好,可作为八爪金龙根药材质量检测的方法.

紫外-可见分光光度法测定八爪金龙中总皂苷的含量

目的：测定苗药八爪金龙中总皂苷的含量。方法：用紫外-可见分光光度法进行含量测定,采用正交试验优化测定条件。结果：该法测定的最优条件为加入5%香草醛-冰醋酸0.6 ml和高氯酸1.0 ml,于80℃水浴中反应20 min;线性方程为Y=44.87X＋0.365（r=0.998）,百两金皂苷B在0.045 2-3.870 0 mg范围内呈良好线性关系;平均回收率为101.3%（n=9）,RSD为1.67%。结论：该法用于测定八爪金龙中总皂苷的成分,具有简单、易操作、重复性良好的优点,可为进一步研究八爪金龙提供参考。

开喉剑及组方药材山豆根、八爪金龙挥发油的GC-MS分析

采用水蒸气蒸馏法提取开喉剑及组方药材中山豆根(Radix sophorae tonkinensis)、八爪金龙[Ardisia crispa(Thunb.)A.DC]的挥发油,并通过GC-MS联用技术对其进行分析比较。结果表明,从开喉剑挥发油中共鉴定出8个成分;山豆根、八爪金龙挥发油中分别鉴定出20、23个成分,开喉剑挥发油中成分与单味药材挥发油中成分的种类有较大差异。

高效液相色谱法测定八爪金龙及组方制剂中岩白菜素的含量

为测定八爪金龙及其组方制剂开喉剑中的有效成分岩白菜素,研究建立高效液相色谱（HPLC）法,以甲醇∶水（25∶75,V/V）为流动相,流速1.0 m L/min,柱温30℃,检测波长274 nm。结果表明,溶液中岩白菜素在0.585 6~58.560 0μg/m L时有良好的线性关系（r=0.999 5）,平均回收率为103.17%,RSD为0.28%,该方法操作简单、稳定、准确、可行,可用于开喉剑及组方药材八爪金龙中岩白菜素的含量测定。

八爪金龙为主治疗慢性咽炎的临床疗效观察——附:133例病例报告

选用以贵州中草药“八爪金龙”为主，配合具有清热解毒、清肺宣喉、养阴润燥之功效的中药复方散剂治疗慢性咽炎１３３例，结果表明，其治愈率为８８．７％，总有效率为９７％。加之该药价格低廉，服用方便，值得临床推广应用。

苗药八爪金龙中岩白菜素的碱法提取工艺研究

准确测定八爪金龙各部位岩白菜素含量后,以八爪金龙的根茎混合粉末为研究对象,采用碱法提取其中的岩白菜素,并采用重结晶原理得到较纯的岩白菜素粗晶,即:以pH值为11.5～13的碱溶液为提取剂,八爪金龙与提取剂的固液比(g∶mL)为1∶10(分两次提取,第1次1∶7,第2次1∶3),室温搅拌2h,提取率可达98.6％.将提取液合并,浓缩至密度为1.15 ～1.20,用浓盐酸逐滴调液体pH至2～3,然后80℃左右水浴加热10min,再用冰水冷却10min,抽滤,得岩白菜素粗晶.粗晶用水洗至无色,烘干,岩白菜素盐还原为岩白菜素的还原率为63％(按析出的晶体中岩白菜素量计算),晶体中岩白菜素纯度为84％.

不同基原八爪金龙药材中黄酮、香豆素类化学成分分析

目的:鉴定并分析不同基原八爪金龙药材中黄酮及香豆素类成分。方法:采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-QE-HF-MS/MS)。色谱柱为Zorbax Eclipse-C18,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液(梯度洗脱),柱温为30℃,流速为0.3 mL/min,自动进样器温度为4℃,进样量为2μL。离子源为电喷雾离子源,扫描模式为正、负离子模式,加热器温度为325℃,鞘气压力为45 arb,辅助气压力为15 arb,吹扫气压力为1 arb,电喷雾电压为3.5 kV,毛细管温度为330℃,透镜电压为55%,扫描模式为一级全扫描(m/z 100~1500)、数据依赖性二级质谱扫描(dd-MS2,Top N=10),分辨率为70000(一级质谱)、17500(二级质谱),碰撞模式为高能量碰撞解离。通过参考ChemSpider、mzCloud、mzVault、PubChem等国内外专业数据库,同时结合相关文献和对照品数据对化合物结构进行鉴定并比较含量。结果与结论:从朱砂根、百两金、红凉伞等3种不同基原的八爪金龙药材中共分离47个成分,鉴定出17个黄酮类化合物,包括9个黄酮醇类(槲皮素3-O-鼠李糖苷7-O-葡糖苷、杨梅素、芦丁、毛里求斯排草素、山柰酚、槲皮素、异鼠李素、槲皮苷、美恩西汀)、3个黄烷-3-醇类(表棓儿茶素、儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯)、2个二氢黄酮类(黄颜木素、圣草酚)及3个其他类{3-(2,3-二氢苯并[1,4]二噁英-6-基)-7-羟基-2-三氟甲基-4-酮、墨沙酮、Oriciacridone F},10个香豆素类化合物{岩白菜素、[(7-羟基-4-甲基-2-氧代-2H-色烯-6-基)氧基]乙酸、[7-(羧基甲氧基)-4-甲基-2-氧-2-羟色基-3-基]乙酸、4,9-二羟基7H-呋喃并[3,2-g]色烯-7-酮、6,7-二羟基-4-甲基香豆素、七叶内酯、秦皮素、7,8-二羟基-4-甲基香豆素、4-甲基伞形酮葡萄糖醛酸、二十烷酮}。含量分析结果显示,黄酮、香豆素类化合物中,3种不同基原八爪金龙药材中共有5个共有成分,分别为岩白菜素(2号峰)、[7-(羧基甲氧基)-4-甲基-2-氧-2-羟色基-3-基]乙酸(5号峰)、墨沙酮(16号峰)、槲皮素(18号峰)、Oriciacridone F(26号峰),且共有成分的含量存在明显差异。除5个共有成分外,其余22个成分均为差异化学成分,分别为1、3、4、6~15、17、19~25、27号峰对应的化合物,其中3、6、8、23号峰对应的化合物仅存在于红凉伞中;12~15、19号峰对应的化合物仅存在于百两金中。UPLC-QE-HF-MS/MS法可高效、精确、快速地鉴别不同基原八爪金龙药材中黄酮类、香豆素类化学成分。

基于SLAF-seq技术的苗药八爪金龙遗传分析

为探究苗药八爪金龙群体遗传进化和亲缘关系的远近,该研究利用简化基因组测序技术(SLAF-seq)对42份八爪金龙样品进行测序,获得多态性SLAF标签。同时采用GATK和SAMtools软件在多态性SLAF中检测单核苷酸多态性(SNP)分子标记,并利用SNP分子标记分析八爪金龙样品间的遗传分化关系。结果表明:(1)42份八爪金龙共获得246.35 Mb reads,测序质量值Q30的平均值为95.66%,GC含量的平均值为41.14%。(2)通过生物信息学的分析,获得1769265个SLAF标签,其中379829个多态性SLAF标签,共开发2299640个SNPs分子标记。(3)利用开发的SNPs数据构建八爪金龙的系统发育树,42份八爪金龙分成两个大的类群。第一类群为细柄百两和原变种百两金;第二类群由贵州朱砂根、红凉伞、湖北朱砂根和江西朱砂根组成。江西朱砂根与其余群体关系较远,有明显的分群现象。该研究从基因组水平揭示不同地区八爪金龙资源之间的遗传关系,为八爪金龙种质资源的鉴定和遗传多样性分析提供了理论基础,所开发的SNP位点可进一步用于挖掘与品质、抗逆性等相关的基因。

基于HPLC图谱探究苗药八爪金龙3个基原不同药用部位的差异

目的建立苗药八爪金龙3种基原朱砂根、红凉伞、百两金不同药用部位的高效液相色谱(HPLC),并对指标性成分岩白菜素进行含量测定,通过HPLC图谱和岩白菜素含量的异同来区分八爪金龙的3种基原。方法采用HPLC法,YMC-Pack ODS-A(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱;以流动相为乙腈-0.1%H3PO4溶液,梯度洗脱;柱温25℃;流速0.5m L·min-1;进样量:5μL;DAD检测波长:214nm的实验条件,并利用相似度软件对八爪金龙不用药用部位进行相似度分析。又以甲醇-水(25∶75)的流动相;柱温为30℃;1.0m L·min-1的流速;进样量大小为5μL;DAD检测波长为214nm的色谱条件对八爪金龙的不同药用部位进行岩白菜素的含量测定。结果朱砂根与红凉伞在根和茎的部分相似度大于0.9,在岩白菜素的含量方面也极为相近,含量介于14.47~20.47mg·g-1之间。朱砂根叶与红凉伞叶的化学成分存在着较大的差异,相似度只有0.348,朱砂根叶中的岩白菜素含量要明显的高于根和茎中,然而红凉伞叶中的岩白菜素含量比较低。百两金与朱砂根和红凉伞之间无论是化学成分还是岩白菜素的含量的差异性都特别明显。结论该研究结果可为八爪金龙3种基原(朱砂根、红凉伞、百两金)的质量控制、临床应用和资源的合理开发利用提供依据。

ITS2序列鉴定苗药八爪金龙药材及其近缘混伪品的研究

目的:探讨ITS2序列在苗药八爪金龙药材及其混伪品中鉴定的可行性,为八爪金龙临床用药的安全、有效提供参考。方法:对收集的63份八爪金龙药材及其同属植物样品进行DNA提取,ITS2引物PCR扩增及其双向测序,使用DNASTAR 7.1进行序列拼接校对,经隐马尔可夫模型的HMMer注释,并预测其二级结构。候选序列在Geneious R11.0.2中应用MAFFT alignment进行比对,应用MEGA 7.0计算遗传距离,构建NJ进化树。结果:ITS2序列能较好地将八爪金龙与同属植物区分开,通过比较ITS2序列的二级结构螺旋区茎环大小、数目及茎环上碱基等特征可以鉴别八爪金龙及其混伪品。结论:DNA条形码ITS2序列能有效区分八爪金龙药材及其同属植物,为临床应用的安全有效提供了新的鉴别方法。

苗药八爪金龙基原植物DNA条型码的筛选与鉴定

八爪金龙属紫金牛科(Myrsinaceae)紫金牛属(Ardisia)植物,是常用民族药,其抗病毒、抗心律失常、抗肿瘤的效果显著。八爪金龙的基原植物表型极度相似,导致其应用混乱。本研究筛选适用于八爪金龙基原植物鉴定的DNA条形码序列,以探索高效准确鉴定八爪金龙基原植物的新方法。提取了百两金、朱砂根和红凉伞的植物基因组DNA,利用DNA条形码序列(ITS, ITS2, RbcL, PsbA-trnH)对其进行PCR扩增和测序,比较各序列的扩增率和测序率,应用Blast方法来评估各序列的鉴定效率。同时与9种紫金牛属植物的相应序列进行比对,构建NJ树。结果表明:ITS、ITS2、RbcL序列的扩增成功率和测序成功率均为100%,PsbA-trnH序列的扩增成功率和测序成功率分别为97.7%和96.7%。4个候选序列的BLAST成功率结果:ITS=ITS2 (100%)>PsbA-trnH (99.2%)>RbcL (33.3%)。ITS序列的平均种间遗传距离大于平均种内遗传距离。系统发育树构建结果显示,ITS2序列的NJ树可将百两金、朱砂根和红凉伞单聚成一支,与同属植物区别开;PsbA-trnH片段将朱砂根、红凉伞单聚为一支,区别于其他同属植物;ITS序列能将不同基原聚成不同的分支,区别于同属植物,但朱砂根和红凉伞需进一步研究。各结果显示ITS序列较其他序列有明显优势,本研究建立了基于ITS序列的八爪金龙基原的DNA条形码鉴定技术方法,为临床准确用药提供依据。

苗药八爪金龙转录组测序与次生代谢产物合成相关基因的挖掘

目的对八爪金龙根进行转录组测序,挖掘次生代谢合成相关基因,探索八爪金龙次生代谢产物生物合成的分子基础。方法采用IlluminaHi Seq4000高通量测序技术,对八爪金龙根进行转录组测序。使用Trinity软件对获得的Unigenes数据进行过滤组装,运用KEGG数据库对Unigenes进行注释。结果共获得52249条Unigenes,其中31391条被公共数据库成功注释,1507条Unigenes被注释到次生代谢产物合成。通过对转录组数据深入挖掘发现,参与八爪金龙苯丙素生物合成的Unigenes共有126条,参与萜类化合物骨架生物合成的Unigenes数量为73条,参与黄酮类化合物生物合成Unigenes有58条,参与次生代谢后修饰的Unigenes共有253条。筛选出9条Unigenes编码4个与八爪金龙香豆素生物合成的关键酶,23条Unigenes编码8个与黄酮生物合成的关键酶,39条Unigenes编码19个与萜类生物合成的关键酶,140条CYP450基因和113条UGT基因可能参与次生代谢物的修饰。微卫星识别软件(microsatellite identification tool,MISA)分析发现八爪金龙转录组包含17 400个简单重复序列(simple sequence repeats,SSR)。结论通过高通量转录组测序,初步揭示了参与八爪金龙次生代谢产物合成相关的基因,为进一步研究八爪金龙次生代谢产物合成途径关键酶的功能及其调控机制奠定了基础。

慢咽散治疗慢性咽炎133例

慢咽散治疗慢性咽炎１３３例贵州省中医研究所附院（５５００００）项楠多年来临床上我们以西医方法检查诊断，中医方法辨证论治诊治慢性咽炎数百例，取得很好疗效。同时也筛选出以贵州治疗咽喉病草药───八爪金龙为主而制成的慢性咽炎散，于１９９３年６月至１９９５年...

中药百两金的药理作用研究

百两金醇提物对巴豆油所致小鼠耳部炎症,蛋清所致大鼠足趾肿胀有明显抑制作用;对蛋清所致小鼠皮肤毛细血管通透性增高有显著对抗作用;对大鼠肩部纸片肉芽肿增生亦有显著抑制作用;醇提后的水提液无上述抗炎效果。醇提物有明显解热作用。小鼠灌胃、腹腔注射LD50分别为2.567～2.143g/kg（P=0.95）和19.23～17.14mg/Kg（P=0.95）。

自拟“慢咽平”汤治疗100例慢性咽炎的疗效观察

慢性咽炎是咽部黏膜的慢性炎症,其中弥漫性炎症常为上呼吸道慢性卡他性炎症的一部分,局限性炎症多伴有咽淋巴样组织的炎症。多为急性咽炎的反复发作或延误治疗转为慢性或者各种鼻病后因鼻阻塞而长期张口呼吸及鼻腔分泌物下流,致长期刺激咽部、慢性扁桃体炎等影响所致。

乡情

国庆节期间,我们一家人一起到乡下的几个表叔家度假。在那儿,我们度过了愉快的三天。表叔家住在几座大山环抱的一个小盆地里。第一天,按照我们的旅游计划,最重要的内容是爬山。下午一点正,我们开始爬山。刚开始时,我和两个弟弟一边登山一边玩。山上风景很美,小路边开满了各种各样的花,有玲珑小巧的红花,