上皮性卵巢癌中八聚体结合转录因子4、Notch1及DLL4的表达及其临床意义

目的探讨上皮性卵巢癌(EOC)中八聚体结合转录因子4(OCT4)、Notch1及DLL4蛋白表达之间的关系及其功能意义。方法收集207例EOC术后标本和65例卵巢良性上皮性肿瘤标本,应用免疫组化学法检测EOC和卵巢良性上皮性肿瘤组织中OCT4、Notch1以及DLL4蛋白的表达情况。结果 EOC组织和卵巢良性上皮性肿瘤组织中,OCT4、Notch1和DLL4蛋白的阳性表达率分别为60.0%、61.8%、60.9%和9.2%、6.2%、0,差异均有统计学意义(P<0.05);OCT4、Notch1和DLL4的表达与EOC的组织学分化、FIGO分期、盆腔淋巴结转移有关(P<0.05);DLL4蛋白的表达分别与OCT4和Notch1的表达呈正相关关系(r值分别为0.758和0.704,P均<0.001),同时,OCT4与Notch1蛋白的表达亦呈正相关(r=0.645,P<0.001)。Kaplan-Meier生存分析表明,OCT4、Notch1和DLL4蛋白的过表达均与患者的生存率有关,3种蛋白表达阳性组患者生存率均明显低于蛋白表达阴性组患者(P<0.05)。多因素分析:OCT4、DLL4蛋白的表达和FIGO分期是影响EOC根治术后患者预后的独立因素(P<0.05)。结论OCT4、Notch1及DLL4的过表达与EOC的组织学分化程度、转移和预后等因素密切相关,联合检测这些指标可能对于EOC患者的病情进展和预后判断给予重要提示。

八聚体结合转录因子4与蛋白激酶B1基因在卵巢浆液性肿瘤组织表达及耐药相关性研究

目的研究八聚体结合转录因子4(OCT4)和蛋白激酶B1(AKT1)基因在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达,探讨两者之间相关性及在化疗耐药中发挥的作用。方法全部病例来自中国医科大学附属盛京医院2004年1月至2010年10月。采用免疫组织化学SP法对67例卵巢浆液性腺癌(化疗耐药30例,化疗敏感37例)、10例卵巢交界性浆液性囊腺瘤、10例卵巢良性浆液性囊腺瘤和10例正常卵巢组织中OCT4和AKT1的表达情况进行检测。结果OCT4的阳性表达率在卵巢浆液性腺癌、卵巢交界性浆液性囊腺瘤、卵巢良性浆液性囊腺瘤和正常卵巢组织中依次降低,差异具有统计学意义(P=0.002);在耐药组和敏感组的阳性表达率分别为83.33%和45.95%,差异有统计学意义(P=0.002)。AKT1蛋白在正常组、良性组、交界性组和恶性组的阳性表达率分别为0、40.00%、70.00%、62.69%,差异具有统计学意义(P=0.001);在耐药组和敏感组的阳性表达率分别为76.67%和51.35%,两组比较,差异有统计学意义(P=0.033)。OCT4蛋白与卵巢浆液性癌临床病理因素无关,AKT1蛋白与卵巢浆液性癌的临床分期呈正相关(P<0.05)。OCT4与AKT1蛋白在耐药组中呈正相关(r=0.388,P=0.034);在敏感组无明显相关性(r=0.246,P=0.142)。结论 OCT4和AKT1可能与卵巢浆液性癌发生、发展相关,并可作为耐药性的预测指标;AKT1蛋白表达为卵巢浆液性癌的临床分期提供依据。

正常及炎症状态人牙髓中八聚体结合转录因子4B的表达

目的研究人正常及炎症牙髓组织中八聚体结合转录因子4B(Oct-4B)的表达特点,检测大肠杆菌脂多糖刺激后人牙髓细胞(HDPCs)中Oct-4B的表达水平,以探讨Oct-4B在牙髓炎症中的可能作用。方法采用免疫组织化学和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测正常及炎症牙髓组织中Oct-4B的表达情况。RT-PCR检测1mg/L脂多糖刺激HDPC24、48、72h后Oct-4B和热休克蛋白70(HSP70)表达水平的变化。结果正常牙髓组织中未检测到Oct-4B的表达,炎症牙髓组织病灶处牙髓成纤维细胞和炎症细胞胞质中Oct-4B表达强阳性。炎症牙髓组织中Oct-4BmRNA水平显著高于正常牙髓组织(P<0.05)。脂多糖刺激48、72h后,HDPC中Oct-4B和HSP70mRNA水平同步上调(P<0.05)。结论 Oct-4B在炎症牙髓组织中高表达,且脂多糖刺激可上调牙髓细胞内Oct-4B表达,Oct-4B可能参与牙髓炎症修复过程。

Oct4B1基因沉默通过调控AKT/GSK-3β/β-catenin通路对膀胱癌T24细胞上皮间质转化的影响及机制研究

目的探讨Oct4B1基因沉默通过蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β/β-连环素(AKT/GSK-3β/β-catenin)通路对膀胱癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法Oct4B1-shRNA质粒和阴性对照质粒转入T24细胞,为shRNA组、shRNA-NC组,转染后AKT激动剂处理,为shRNA+AKT激动剂组、shRNA-NC+AKT激动剂组。检测4组侵袭、迁移及E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、p-AKT、p-GSK-3β及β-catenin蛋白表达。结果与shRNA组比较,shRNA+AKT激动剂组、shRNA-NC组、shRNA-NC+AKT激动剂组穿膜细胞数、迁移率、E-cadherin蛋白表达量较高(P<0.05),且shRNA+AKT激动剂组<shRNA-NC组<shRNA-NC+AKT激动剂组(P<0.05)。与shRNA组比较,shRNA+AKT激动剂组、shRNA-NC组、shRNA-NC+AKT激动剂组Vimentin、N-cadherin、p-AKT、p-GSK-3β、β-catenin蛋白表达量较低(P<0.05),且shRNA+AKT激动剂组>shRNA-NC组>shRNA-NC+AKT激动剂组(P<0.05)。结论沉默Oct4B1可抑制膀胱癌细胞侵袭、转移及EMT过程,其机制可能与AKT/GSK-3β/β-catenin有关。

八聚体结合转录因子4与磷酸化蛋白激酶B在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的分析结直肠癌组织中八聚体结合转录因子4（Oct4）与磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）表达情况，探索两者在结直肠癌组织中的临床价值及联合检测意义。方法选择2011年1月至2016年12月于无锡市第二中医医院和无锡市第一人民医院行结直肠癌根治术的78例患者，采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中Oct4蛋白与p-Akt蛋白的表达情况，并分析其与患者临床病理特征的关系。结果在结直肠癌组织中，Oct4蛋白阳性表达率高于癌旁组织[74.36 %（58/78）和35.90 %（20/78），χ2=23.32，P〈0.01]，p-Akt蛋白阳性表达率高于癌旁组织[67.95 %（53/78）和28.21 %（25/78），χ2=24.68，P〈0.01]。Oct4蛋白与p-Akt蛋白表达双阳性与双阴性共占80.8 %（63/78），两者表达呈正相关（r=0.455，P〈0.000 1）。在78例结直肠癌患者中，Oct4蛋白的表达与组织学分级、淋巴结转移以及Duke分期均有相关性（均P〈0.05），p-Akt蛋白的表达则与组织学分级和淋巴结转移有相关性（均P〈0.05）。多因素logistic回归分析结果表明Oct4蛋白的表达水平仅与组织学分级及Duke分期有相关性（均P〈0.05），而p-Akt蛋白的表达仅与淋巴结转移有相关性（P〈0.05）。结论Oct4蛋白与p-Akt蛋白联合检测对于结直肠癌组织学分级、淋巴结转移的倾向及Duke分期的推断有临床参考意义。

OCT4及其假基因POU5F1B在子宫内膜腺癌中的表达及临床意义

目的分析八聚体结合转录因子4(OCT4)及其假基因POU结构域5类转录因子1B(POU5F1B)在子宫内膜腺癌中的表达情况,并探讨两者在子宫内膜腺癌中的临床意义。方法纳入60例子宫内膜腺癌患者,并收集其子宫内膜腺癌组织,同时纳入50例子宫内膜良性病变患者,并收集其增生期子宫内膜组织。采用实时荧光定量PCR检测组织中的OCT4 mRNA、POU5F1B mRNA的表达水平。用免疫组织化学法检测组织中OCT4蛋白的阳性表达情况。分析OCT4蛋白阳性表达率与子宫内膜腺癌患者临床病理参数的关系。结果子宫内膜腺癌组织中POU5F1B mRNA、OCT4 mRNA的表达水平均高于增生期子宫内膜组织(均P<0.05)。子宫内膜腺癌组织中的OCT4蛋白高表达率高于增生期子宫内膜组织(P<0.05)。临床分期为Ⅱ~Ⅳ期、肌层浸润深度>1/2、有淋巴结转移的子宫内膜腺癌患者的OCT4蛋白高表达率分别高于临床分期为Ⅰ期、肌层浸润深度≤1/2、无淋巴结转移的患者(均P<0.05)。结论OCT4及其假基因POU5F1B在子宫内膜腺癌中的表达上调,并且OCT4蛋白的表达情况与患者的临床分期、浸润深度、淋巴结转移有关。假基因POU5F1B可能通过调控OCT4来影响子宫内膜腺癌的发生和发展。

肿瘤干细胞标志物Oct4和ALDH1A1在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨肿瘤干细胞标记物八聚体结合转录因子4(Oct4)和乙酰脱氢酶家族成员A1(ALDH1A1)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测208例乳腺癌组织和80例乳腺腺瘤组织中的Oct4和ALDH1A1蛋白的表达,分析其表达与临床病理参数及预后的相关性,并分析二者表达的相关性;同时采用western blot法检测20例乳腺癌组织和20例乳腺腺瘤组织中Oct4和ALDH1A1蛋白的表达,并分析二者表达的相关性。结果Oct4和ALDH1A1蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达明显高于乳腺腺瘤组织(P<0.05)。Oct4和ALDH1A1的表达与乳腺癌组织学分级、组织学类型、TNM分期、淋巴结转移及三阴性乳腺癌密切相关。Oct4和ALDH1A1高表达的患者预后明显差于低表达的患者(P<0.05)。乳腺癌组织中OCT4和ALDH1A1表达具有显著相关性(P<0.05)。结论乳腺癌组织中,Oct4和ALDH1A1表达与组织学分级、组织学类型、TNM分期、淋巴结转移及三阴性乳腺癌密切相关;Oct4和ALDH1A1高表达提示乳腺癌预后不良;OCT4和ALDH1A1表达具有相关性。

灵芝烯酸B诱导Oct4去SUMO化激活G0期胃癌侧群细胞

[目的]从蛋白质类泛素化修饰角度研究灵芝烯酸B(GAB)对静息期G0胃癌侧群细胞的活化作用,为胃癌侧群细胞靶向治疗提供新策略。[方法]流式细胞术分离CD133+的SGC-7901胃癌侧群细胞,培养细胞克隆球,给予GAB处理96 h,于不同时间点检测克隆球大小,绘制克隆球变化曲线;流式细胞术检测胃癌侧群细胞周期变化;蛋白免疫印迹(Western Blot)方法检测小泛素样修饰蛋白-1(SUMO-1)、八聚体结合转录因子4(Oct4)、细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin E1、Cyclin A2和Cyclin B1的表达水平;四甲基噻唑蓝(MTT)法检测顺铂对CD133+胃癌侧群细胞的半数致死量(IC50)。[结果] GAB组胃癌侧群细胞克隆球生长速度明显低于对照组;对照组CD133+胃癌侧群细胞主要集中于G0/G1期,而GAB组CD133+则主要集中于G2/M期;与对照组比较,GAB组胃癌侧群细胞的SUMO-1、Oct4和Cyclin D1蛋白表达水平降低,而Cyclin E1、Cyclin A2和Cyclin B1蛋白表达水平升高(P<0.05);GAB处理使顺铂对胃癌侧群细胞IC50从69.84μg/mL下降至35.67μg/mL。[结论] GAB能够通过诱导Oct4去SUMO化激活G0期胃癌侧群细胞,增加胃癌侧群细胞对顺铂的化疗敏感性。

骨髓增生异常综合征患者外周血单个核细胞中OTC4,Gli1基因的表达及与预后的COX回归分析

目的探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者外周血单个核细胞中八聚体结合转录因子4(octamer binding transcription factror 4,OTC4),Gli1基因的表达及与预后的COX回归分析。方法对2017年3月~2018年3月收治的54例MDS患者进行临床及随访研究,另选取40例同期体检健康者为对照组,采集所有受试者骨髓后分离单个核细胞,以实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测OTC4和Gli1基因相对表达情况,并分析其与MDS患者临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier法绘制MDS患者生存曲线,并采用COX回归分析MDS患者预后的影响因素。结果OTC4(2.78±0.31),Gli1(1.35±0.33)基因在MDS患者外周血单个核细胞中的相对表达水平明显高于健康对照组(1.07±0.17,0.53±0.13),差异有统计学意义(t=31.524,14.868,均P<0.05)。OTC4基因表达与MDS患者Hb,PLT,IPSS-R危险分层有关;Gli1基因表达与MDS患者PLT,IPSS-R危险分层有关(t=2.722,2.282,均P<0.05),而与Hb无关(t=0.711,P>0.05)。OTC4基因低表达MDS患者OS(36.73±1.46个月),PFS(26.28±0.91个月)均明显长于OTC4基因高表达MDS患者水平(29.10±1.26个月,22.54±1.08个月)(Log-rankχ^(2)=10.038,13.623,均P<0.05);Gli1基因低表达MDS患者OS(35.74±1.29个月),PFS(27.81±0.94个月)均明显长于OTC4基因高表达MDS患者水平(26.16±1.37个月,19.61±0.96个月)(Log-rankχ^(2)=16.210,20.135,均P<0.05)。COX多因素回归分析显示,WBC,WHO(2008)分型、IPSS-R危险分层、OTC4基因相对表达水平、Gli1基因相对表达水平均为阳性MDS患者预后的独立影响因素(P<0.05)。结论OTC4,Gli1基因在MDS患者外周血单个核细胞中呈高表达,且与WBC,WHO(2008)分型、IPSS-R危险分层均为影响MDS患者预后的独立因素。抑制OTC4,Gli1基因表达有望成为MDS潜在治疗靶点。

OCT4B1在牙髓细胞的表达及其对凋亡相关因子的调控作用

目的研究人牙髓细胞(HDPCs)中八聚体转录结合因子4剪接异构体B1(OCT4B1)的表达及基因转染OCT4B1后对凋亡相关因子的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和荧光原位杂交(FISH)技术检测正常HDPCs中OCT4B1的表达;利用慢病毒载体构建OCT4B1高表达模型并转染HDPCs,检测半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶(Caspase)3和7的表达变化。结果 OCT4B1表达于正常HDPCs且在第三代中表达最高;上调OCT4B1后与空载体组相比,OCT4B1高表达组Caspase-3、Caspase-7 mRNA表达降低(P<0.05)。结论 HDPCs中上调OCT4B1可抑制Caspase-3和Caspase-7的表达,说明OCT4B1参与细胞应激反应,可能与细胞凋亡相关。

胃癌组织中SOX1与OCT4的交互作用及其对胃癌患者术后复发和生存预后的预测价值

目的研究胃癌组织中性别决定区相关高迁移率组盒蛋白1(SOX1)与八聚体结合转录因子4(OCT4)的交互作用及其对胃癌患者术后复发和生存预后的预测价值。方法采用前瞻性研究,选择2018年1月至2019年6月在南阳市中心医院诊断并治疗的94例胃癌患者为研究对象,收集其就诊资料并随访3年生存情况。通过免疫组织化学染色分析患者癌旁组织组与癌组织组、未复发组与复发组、以及生存组与死亡组SOX1与OCT4蛋白水平的差异,并通过Logistic回归分析和ROC曲线研究SOX1与OCT4对胃癌患者复发及死亡的预测效能。结果(1)癌组织组SOX1(t=24.238,P<0.001)与OCT4蛋白表达(t=16.843,P<0.001)显著低于癌旁组织组;复发组SOX1(t=16.565,P<0.001)与OCT4(t=12.444,P<0.001)显著低于未复发组;死亡组SOX1(t=11.759,P<0.001)与OCT4(t=13.854,P<0.001)显著低于生存组。(2)通过Logistic回归分析,SOX1与OCT4蛋白的表达水平与胃癌患者的预后(复发、死亡)密切相关。(3)通过ROC曲线分析,SOX1与OCT4联合诊断对复发以及死亡的曲线下面积高于SOX1、OCT4单独检测,针对复发胃癌患者而言,SOX1与OCT4的截断值分别为0.44、0.35,针对死亡胃癌患者而言,SOX1与OCT4的截断值分别为0.41、0.42,SOX1与OCT4联合诊断对于复发以及死亡的诊断灵敏度与特异度显著高于单独诊断。结论胃癌组织中SOX1与OCT4对胃癌患者术后复发和生存预后具有显著的预测价值,可作为临床诊断以及预后判定的重要参考。

曲古抑菌素A对卵巢癌细胞分化、增殖的影响及其机制

目的观察曲古抑菌素A(TSA)对卵巢癌细胞分化、增殖及细胞周期的影响,并探讨其机制。方法培养卵巢癌上皮细胞系HO8910,将细胞分为A、B、C、D组,分别加入0、100、200、400 nmol/L TSA。分别于培养24、48、72 h观察A、C组细胞形态变化;于培养24 h后采用Western blotting法检测四组细胞中的Y染色体上的性别决定区盒2(SOX-2)、八聚体结合转录因子4(OCT-4)和叉头样转录因子A2(FOXA-2)。分别采用MTT法及Ed U染色法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测不同周期细胞。采用Western blotting法检测各组细胞中的Cyclin D1和p21Cip1蛋白。结果 A组细胞多为类圆形或椭圆形,外表规整,成簇生长。C组细胞发生形态转变,细胞密度有所下降。与A组相比,B、C、D组细胞中SOX-2、OCT-4表达下调,FOXA-2表达升高(P均<0.05)。与A组相比,B、C、D组细胞增殖率降低,G_0/G_1期细胞比例增高,S期细胞比例减小,Cyclin D1蛋白表达下调,p21Cip1蛋白表达上调(P均<0.05)。结论 TSA可诱导卵巢癌HO8910细胞分化,抑制细胞增殖,其机制可能与调节细胞分化相关蛋白及细胞周期相关蛋白表达有关。