盐酸胍诱导八肋游仆虫中心蛋白与XPC肽复合物的解折叠

为探索真核生物核苷酸切除修复的可能性,选择人着色性干皮病(XPC)包含中心蛋白结合的多肽为研究对象,采用圆二色谱(CD)、荧光光谱与等温滴定量热法(ITC)对八肋游仆虫中心蛋白(EoCen)的靶肽结合进行了构象与热力学表征.结果表明C端结构域是XPC结合的关键位点,XPC发生构象变化由无规则状态转变为α-螺旋,色氨酸残基镶嵌在C端EF-手形成的疏水腔中,靶肽识别是放热反应,焓变对吉布斯自由能的贡献很大.盐酸胍诱导EoCen-XPC复合物的解折叠机理,并不是使复合物解离,而是使容纳XPC的C端疏水腔瓦解,XPC游离出来.

八肋游仆虫中心蛋白的DNA结合性质与切割活性

为了探究中心蛋白在核苷酸切除修复识别中的可能作用,选择八肋游仆虫中心蛋白(EoCen)作为研究对象,采用荧光光谱,圆二色光谱,等温滴定量热(ITC)以及电泳等方法研究了EoCen与DNA之间的相互作用.结果表明,在室温下pH为7.4的10 mmol·L^(-1)N-2-羟乙基哌嗪-N′-乙磺酸(hepes)缓冲溶液中,EoCen与DNA的结合导致EoCen二级结构发生改变,α-helix含量减小,DNA双螺旋结构发生微扰.同时DNA的结合会抑制EoCen的聚集.荧光光谱与ITC分析发现,EoCen与DNA以化学计量比1∶1结合形成配合物,结合常数约为10^(4) L·mol^(-1).琼脂糖凝胶电泳分析表明EoCen具有切割活性,能够将超螺旋质粒DNA首先切成缺口型,最后变成线型.

光谱法、量热法以及分子对接研究酸枣仁皂苷A与中心蛋白的作用

目的研究酸枣仁皂苷A(jujuboside A,JuA)与八肋游仆虫中心蛋白(Euplotes octocarinatus centrin,EoCen)的相互作用。方法采用圆二色光谱(circular dichroism spectroscopy,CD)以及三维荧光光谱研究EoCen的构象变化;采用稳态荧光光谱与等温滴定量热法(isothermal titration calorimetry,ITC)研究JuA与EoCen作用的机制;分子对接技术模拟JuA与EoCen的结合位点。结果JuA以摩尔比1:1结合于EoCen的C端(二者反应的结合常数约为10^(5)L/mol),由ITC拟合结果可知,JuA与EoCen复合物的形成是放热的过程,熵变对自由能的贡献较小,主要由焓变驱动。EoCen与JuA结合后,构象发生变化,α-螺旋含量减少,酪氨酸残基的微环境变化,EoCen的C端不再结合蜂毒素。结论JuA主要通过范德华力与EoCen结合,从而改变EoCen的构象,抑制其与靶蛋白的结合。

光谱法、量热法以及分子对接技术研究阿霉素与中心蛋白的作用

目的:研究阿霉素(doxorubicin,DOX)与八肋游仆虫中心蛋白的N-端部分(N-terminal domain of Euplotes octocarinatus centrin,N-EoCen)的相互作用。方法:采用圆二色光谱以及三维荧光光谱法研究N-EoCen的构象变化,采用稳态荧光光谱法与等温滴定法(ITC)研究DOX与N-EoCen的作用机制,采用分子对接技术模拟DOX与N-EoCen的结合位点。结果:N-EoCen与DOX结合后,构象发生变化,α-helix含量减少。DOX以摩尔比1∶1与N-EoCen结合,结合常数约为105 L/mol。该反应为放热反应,熵变对自由能的贡献较小,反应主要由焓变驱动。结论:DOX主要通过疏水作用、范德华力以及氢键等多种作用与N-EoCen结合,从而使N-EoCen的构象发生改变。

光谱法、量热法以及分子对接研究槲皮素与中心蛋白的相互作用

通过光谱法、等温滴定量热法(ITC)以及分子对接等技术研究了八肋游仆虫中心蛋白N端分子(N-EoCen)与槲皮素(Quercetin,Q)之间的相互作用以及Q对N-EoCen构象的影响.结果表明,在室温下Hepes(pH=7.4)缓冲溶液中,Q可以与N-EoCen以物质的量比1∶1结合于N-EoCen的第二个EF-hand的E,F螺旋之间,条件结合常数约为104L·mol^(-1),复合物的形成是放热的过程,Q与N-EoCen之间存在氢键、疏水作用以及范德华力等多种作用.Q与N-EoCen中酪氨酸残基(Tyr72)的结合距离为1.54 nm.复合物的形成使得蛋白的构象发生变化,α-helix含量减少.本文的研究成果对于进一步了解中心蛋白分子识别多样性的结构基础,以及相关药物的研发具有参考价值.