家兔中脑导水管周围灰质(PAG)中八肽胆囊收缩素(CCK-8)对吗啡镇痛和电针镇痛的拮抗作用

CCK-8是目前所知作用最强的一种抗阿片肽。我们曾经报告，只要向大鼠脑室注射1-4ng的CCK-8即可显著对抗吗啡镇痛和电针镇痛。为探讨CCK-8的中枢抗阿片作用部位及种属特异性，我们将CCK-8注入家兔PAG，观察其对吗啡镇痛和电针镇痛的影响。

八肽胆囊收缩素(CCK_8)的人工合成

本文报道了用液相法合成八肽胆囊收缩素(H-Asp-Tyr(SO_3H)-Met-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH_2,ccK_8)。先分别合成C-端四肽和N-端四肽,然后缩合成八肽,并用温和的乙酰硫酸吡啶盐(PAS)法使其酪氨酸的酚羟基硫酯化。根据其氨基酸组成,层析行为和生物活性等证实产物为纯品。

八肽胆囊收缩素抑制脂多糖诱导的大鼠肺间质巨噬细胞CD14的表达

目的 :初步探讨八肽胆囊收缩素 (CCK - 8)对体外脂多糖 (LPS)激活大鼠肺间质巨噬细胞 (IM)的调节作用。方法 :分离大鼠肺IM ,经LPS、CCK - 8、CCK受体拮抗剂丙谷胺及溶剂单独或共同孵育后 ,测定细胞CD14的表达及上清中TNF -α含量。结果 :LPS(1mg/L)孵育 12h ,肺IMmCD14表达上调 ,上清中sCD14及TNF -α含量均明显增加 ;CCK - 8(10 -7- 10 -6mol/L)抑制了LPS的上述效应 ,且可被丙谷胺所拮抗。结论 :CCK - 8对LPS激活的肺IM的部分功能具有抑制性调节作用 ,该作用是由其受体介导的 ,可能是CCK - 8减轻内毒素血症时肺组织炎性变化的重要机制之一。

八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导离体兔胸主动脉反应性改变的影响

目的和方法 :应用离体血管环张力测定技术 ,观察八肽胆囊收缩素 (CCK - 8)对脂多糖 (LPS)诱导兔离体胸主动脉反应性变化的影响。在扫描电镜下观察内皮细胞超微结构的变化 ,以探讨CCK - 8抗内毒素休克作用的可能机制。结果 :LPS(10 0mg/L)孵育后的胸主动脉环对乙酰胆碱 (ACh )的内皮依赖性舒张反应降低 ,且呈时间依赖性 ;对苯肾上腺素 (PE)的收缩反应降低 ;孵育 7h血管内皮细胞结构损伤 ;CCK - 8(1mg/L)可减轻LPS的损伤效应 ;CCK - 8(1mg/L)单独孵育对胸主动脉的舒缩反应及内皮细胞的超微结构无明显影响。结论 :CCK - 8能减轻LPS诱导兔离体胸主动脉反应性的异常改变 ,这可能是CCK - 8抗内毒素休克作用的机制之一。

脑内八肽缩胆囊素水平与提高针刺镇痛疗效的机制研究

目的:探讨八肽缩胆囊素(CCK-8)对抗电针对大鼠尾核中痛反应神经元放电和测量甩尾潜伏期(TFL)痛阈的同时影响。方法:本实验以大鼠尾核中痛兴奋神经元(PEN)和痛抑制神经元(PIN)电变化及辐射热照大鼠尾所引起TFL三者为指标,观察了电针、CCK-8对同时记录PEN或PIN电活动和TFL的影响。结果:①辐射热照大鼠尾可使63个PEN平均放电的净增值(NIV)增加了(285.89±11.58)%或42个PIN平均放电NIV下降了(81.60±8.14)%的同时发生甩尾反射,表现出辐射热致疼痛效应。②电针双侧“足三里”15min后,19个PEN平均放电的抑制率为66.30±10.82%,而平均TFL的延长率是(76.74±9.93)%或12个PIN的平均抑制时程(ID)缩短了(51.45±9.58)%,同时使TFL延长了(77.68±11.38)%,即呈现出电针的镇痛效应。③脑室注射CCK-8(10ng)能同时对抗电针所引起PEN放电的抑制或PIN的ID缩短和TFL的延长作用。结论:CCK-8的抗电针镇痛作用在中枢痛反应神经元电活动和整体行为反射水平上是协同一致的。提示PEN和PIN的电活动作为疼痛和镇痛指标是确实可行的。

八肽缩胆囊素调节脂多糖诱导ECV-304细胞核转录因子-κB表达的受体机制研究

目的探讨八肽缩胆囊素(CCK 8)调节脂多糖(LPS)诱导血管内皮细胞核转录因子κB(NFκB)表达的受体机制。方法培养人脐静脉内皮细胞株ECV 304;用溶剂(生理盐水)、LPS、CCK 8、CCK受体(CCK R)非特异性拮抗剂丙谷胺、CCK A受体(CCK AR)特异性拮抗剂CR 1409、CCK B受体(CCK BR)特异性拮抗剂CR 2945分别或联合刺激ECV 304细胞1 h。用蛋白质免疫印迹法(W esternb lot)检测NFκB p65蛋白表达;用免疫细胞化学技术检测NFκB p65蛋白核移位。结果与溶剂对照组比较,LPS可诱导ECV 304细胞NFκB p65蛋白核移位,且其表达明显上调;CCK 8可呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的核移位及表达上调;CCK受体拮抗剂可翻转CCK 8的上述抑制效应,其中CR 1409、CR 2945、丙谷胺作用依次增强。结论CCK AR和CCK BR参与介导了CCK 8对LPS诱导ECV 304细胞NFκB表达的抑制作用,其中CCK BR的作用比CCK AR稍强。

八肽胆囊收缩素对中枢神经和小肠痛觉调制机制的研究

八肽胆囊收缩素(CCK-8)是一种典型的脑-肠肽,即存在于中枢神经系统,又存在于胃肠道.近年许多资料表明,CCK-8是迄今发现作用最强的抗阿片物质,在痛觉调制中起重要作用.

八肽胆囊收缩素对周围神经元损伤的保护作用

目的探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)对硝普钠所致大鼠周围神经元(背根神经节神经元(DRGn))一氧化氮损伤是否有保护作用。方法大鼠DRGn培养至72h后,随机分为正常对照组、模型组(硝普钠损伤)及实验组(损伤前先予3种不同浓度CCK-8进行干预),同时按浓度1×10-8mol/L、1×10-7mol/L和1×10-6mol/L将实验组分为实验组A、实验组B和实验组C。损伤后24h用荧光染色进行形态学观察、TUNEL法检测原位细胞凋亡、免疫细胞化学检测神经生长因子(NGF)及生长相关蛋白43(GAP-43)蛋白的表达。结果模型组DRGn的凋亡率达(49.77±0.0315)%,损伤后NGF及GAP-43蛋白可有轻度增加。实验组B和实验组C的DRGn凋亡率降至(28.38±0.0372)%,且NGF及GAP-43蛋白水平显著升高,与模型组相比,差异有显著性(P<0.05)。结论CCK-8对硝普钠诱导的DRGn一氧化氮损伤具有保护作用,其作用机制可能与上调NGF及GAP-43表达有关。

CCK-8对内毒素休克大鼠肺脏细胞因子的抑制效应

观察八肽胆囊收缩素 (cholecystokinin octapeptide,CCK 8)改善脂多糖 (lipopolysaccharide ,LPS)引起的大鼠内毒素性休克 (endotoxicshock ,ES)过程中血清及肺脏细胞因子的变化 ,探讨p38丝裂素活化蛋白激酶 (p38mitogen acti vatedproteinkinase ,p38MAPK)的信号转导作用。用生理多道记录仪观察尾静脉注入LPS (8mg/kgi v )复制的SD大鼠ES模型、LPS注入前 10min尾静脉注入CCK 8(40 μg/kgi v )、单独注入CCK 8(40 μg/kgi v )或生理盐水 (对照 )的四组大鼠平均动脉血压 (MAP)的改变 ,应用ELISA试剂盒检测血清和肺脏中炎性细胞因子 (TNF α、IL 1β和IL 6 )的变化。用Westernblot检测肺脏p38MAPK的表达。结果显示 :CCK 8可改善LPS引起的大鼠MAP的下降。与对照组相比 ,LPS可显著增加血清和肺脏TNF α、IL 1β和IL 6含量 ;CCK 8可显著抑制LPS诱导的血清和肺脏TNF α、IL 1β和IL 6的增加。CCK 8可增加ES大鼠肺脏磷酸化p38MAPK的表达。结果提示CCK 8可改善ES大鼠MAP的降低 ,并对肺脏促炎性细胞因子过量产生有抑制作用 。

缩胆囊素和促胰液素对豚鼠离体胃平滑肌运动的影响

用８个肌槽同时记录豚鼠胃不同部位肌条的收缩活动，以观察八肽缩胆囊素（ＣＣＫ－８）和促胰液素的影响。结果表明：ＣＣＫ－８能（１）增高各部位纵行肌和环行肌的张力；（２）加快胃体纵行肌，胃窦纵行肌、环行肌和幽门环行肌的收缩频率；（３）增大胃窦环行肌收缩波平均振幅和（４）增加幽门环行肌收缩波运动指数，但减少胃体和胃窦纵行肌收缩波平均振幅。上述作用均不能被阿托品和消炎病所阻断。而促胰液素对各部位肌条的收缩活动没有明显的影响。

固定化酶催化合成CCK-8 C-端三肽衍生物

报道胆囊收缩素 (CCK 8)C 末端片段三肽衍生物Phac Met Asp(OMe) Phe NH2 的固定化酶催化法合成 .以Phac Met OCam为起始原料 ,采用三种固定化酶———α 糜蛋白酶 /Celite 5 45、木瓜蛋白酶 /VA Epoxy、嗜热菌蛋白酶 /Celite 5 45 ,经过三步酶促反应得到目标三肽化合物 .对酶的专一性、酶的固定化、溶剂选择和合成条件等进行了研究 。

酶催化法合成CCK-8的一个四肽片段

用酶催化法合成了缩胆囊素 ( CCK-8)的 1个四肽片段 ( Phac-Met-Gly-Trp-Met-OEt) .该四肽片段是依次通过 Phac-Met-OEt与 Gly-OMe· HCl,Trp-OMe和 Met-OEt偶合得到的 ,这 3步偶合反应分别用α-糜蛋白酶、木瓜蛋白酶和α-糜蛋白酶作为催化剂 ,并对影响反应的因素进行了研究 ,反应中间体和产物均经质谱 ( FAB-MS)