家兔中脑导水管周围灰质(PAG)中八肽胆囊收缩素(CCK-8)对吗啡镇痛和电针镇痛的拮抗作用

CCK-8是目前所知作用最强的一种抗阿片肽。我们曾经报告，只要向大鼠脑室注射1-4ng的CCK-8即可显著对抗吗啡镇痛和电针镇痛。为探讨CCK-8的中枢抗阿片作用部位及种属特异性，我们将CCK-8注入家兔PAG，观察其对吗啡镇痛和电针镇痛的影响。

八肽胆囊收缩素(CCK_8)的人工合成

本文报道了用液相法合成八肽胆囊收缩素(H-Asp-Tyr(SO_3H)-Met-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH_2,ccK_8)。先分别合成C-端四肽和N-端四肽,然后缩合成八肽,并用温和的乙酰硫酸吡啶盐(PAS)法使其酪氨酸的酚羟基硫酯化。根据其氨基酸组成,层析行为和生物活性等证实产物为纯品。

八肽胆囊收缩素对中枢神经和小肠痛觉调制机制的研究

八肽胆囊收缩素(CCK-8)是一种典型的脑-肠肽,即存在于中枢神经系统,又存在于胃肠道.近年许多资料表明,CCK-8是迄今发现作用最强的抗阿片物质,在痛觉调制中起重要作用.

中风星蒌通腑胶囊介导CCK-8调控IL-10/STAT3信号通路改善脑出血小鼠的炎症损伤

目的探讨中风星蒌通腑胶囊介导胆囊收缩素八肽(CCK-8)对白细胞介素10(IL-10)/信号转导与转录激活子3(STAT3)信号通路对脑出血小鼠的脑部炎症反应的调控作用及机制。方法将110只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术组、脑出血组及中风星蒌通腑胶囊低、中、高剂量组,每组22只。采用胶原酶法建立脑出血模型,模型复制2 h后进行中风星蒌通腑胶囊混悬液灌胃(10 mL·kg^(-1)),假手术组与脑出血组灌以等量的生理盐水。记录小鼠的神经功能学评分及左转率;于术后72 h采用干湿质量法检测脑含水量;于术后72 h采用Western Blot法检测小鼠血肿周围肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)以及Janus激酶1(JAK-1)、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)通路蛋白的相对表达水平;于术后第3、5天采用Elisa法检测小鼠CCK-8的相对表达水平;采用荧光定量PCR(qPCR)法检测IL-10、STAT3的mRNA的表达水平。结果与脑出血组比较,中风星蒌通腑胶囊低、中、高剂量组干预治疗后,第3天及第5天小鼠改良神经功能缺陷(NDS)评分明显降低(P<0.01),低剂量组第3天及第5天左转率降低(P<0.05),中剂量组第3天(P<0.05)及第5天(P<0.01)左转率降低,高剂量组第3天及第5天左转率明显降低(P<0.01)。低剂量组小鼠脑含水量减少(P<0.05),中、高剂量组小鼠脑含水量明显减少(P<0.01)。低剂量组促炎因子TNF-α、IL-6及JAK-1、STAT3、p-STAT3通路蛋白的表达均明显减少(P<0.01),IL-1β表达减少(P<0.05),抑炎因子IL-10表达明显增加(P<0.01);中、高剂量组促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6及JAK-1、STAT3、p-STAT3通路蛋白的表达均明显减少(P<0.01),抑炎因子IL-10表达明显增加(P<0.01)。低剂量组CCK-8的含量在用药后第3天增加(P<0.05),第5天含量明显增加(P<0.01);中、高剂量组CCK-8的含量在用药后第3天及第5天明显增加(P<0.01)。IL-10的mRNA相对表达水平在用药后均明显增高(P<0.01),STAT3 mRNA相对表达水平在用药后均明显降低(P<0.01)。结论中风星蒌通腑胶囊可以增加脑肠肽CCK-8的表达,调控IL-10/STAT3信号通路,从而减轻小鼠脑出血后的继发性炎症反应及细胞毒性脑水肿。

酶催化法合成CCK-8的一个四肽片段

用酶催化法合成了缩胆囊素 ( CCK-8)的 1个四肽片段 ( Phac-Met-Gly-Trp-Met-OEt) .该四肽片段是依次通过 Phac-Met-OEt与 Gly-OMe· HCl,Trp-OMe和 Met-OEt偶合得到的 ,这 3步偶合反应分别用α-糜蛋白酶、木瓜蛋白酶和α-糜蛋白酶作为催化剂 ,并对影响反应的因素进行了研究 ,反应中间体和产物均经质谱 ( FAB-MS)

固定化酶催化合成CCK-8 C-端三肽衍生物

报道胆囊收缩素 (CCK 8)C 末端片段三肽衍生物Phac Met Asp(OMe) Phe NH2 的固定化酶催化法合成 .以Phac Met OCam为起始原料 ,采用三种固定化酶———α 糜蛋白酶 /Celite 5 45、木瓜蛋白酶 /VA Epoxy、嗜热菌蛋白酶 /Celite 5 45 ,经过三步酶促反应得到目标三肽化合物 .对酶的专一性、酶的固定化、溶剂选择和合成条件等进行了研究 。

胆囊收缩素受体在胰腺癌细胞中的表达及胆囊收缩素对胰腺癌细胞周期的影响

目的:观察胆囊收缩素受体(CCKR)在人胰腺癌细胞株SW1990中的表达及胆囊收缩素(CCK)-8肽对胰腺癌细胞周期的影响. 方法:应用RT-PCR方法检测人胰腺癌细胞株SW1990中胆囊收缩素受体(CCKR)mRNA的表达,细胞化学法检测SW1990 细胞中胆囊收缩素受体(CCKR)蛋白水平的表达,流式细胞仪检测不同浓度的CCK-8肽对SW199细胞周期的影响. 结果:在人胰腺癌细胞株SW1990中不表达CCK-A亚型受体,但表达CCK-B亚型受体;CCKR在癌细胞株SW1990 中的表达主要位于细胞膜上,细胞浆内也可见.在10-8g/L- 10-5g/L浓度范围内,CCK-8肽促进SW1990细胞的增殖, 呈剂量依赖性,细胞周期分析发现S期细胞增加,G2/M 期细胞减少. 结论:CCKB受体在人胰腺癌细胞株SW1990中表达, CCK-8肽能促进SW1990细胞的增殖,抑制细胞的凋亡, CCK通过CCKR在胰腺癌细胞的增殖中发挥重要作用.

c-fos在CCK-8抗LPS所致的肺动脉平滑肌细胞损伤中的变化

目的 :观察c -fos在八肽胆囊收缩素 (CCK - 8)减轻脂多糖 (LPS)所致的肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)损伤中的变化。方法 :贴块法培养大鼠PASMC。应用电镜技术和生化方法 ,观察细胞形态和测定细胞丙二醛 (MDA)含量及乳酸脱氢酶 (LDH)释放率 ;台盼蓝染色法记录PASMC蓝染率的变化 ;免疫细胞化学技术检测细胞内c -fos蛋白的表达情况。结果 :CCK - 8可减轻LPS引起的细胞超微结构损伤 ;CCK - 8可降低LPS引起的细胞台盼蓝摄取率、MDA含量与LDH释放率的增高 ;LPS可轻微上调PASMC内c-fos蛋白表达 ,CCK - 8可使该上调作用显著上升。结论 :CCK - 8可减轻LPS所致的PASMC损伤 ;CCK - 8可能通过使c -fos蛋白表达上调来发挥其抗损伤作用。

在尾核痛反应神经元和整体甩尾反射水平上研究CCK-8对抗电针的镇痛作用

目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对抗电针(EA)对大鼠尾核(Cd)中痛反应神经元放电和甩尾潜伏期(TFL)痛阈的同时影响。方法采用同步记录大鼠Cd中痛兴奋神经元(PEN)或痛抑制神经元(PIN)电变化与辐射热照大鼠尾所引起TFL的方法。结果(1)辐射热照大鼠尾可使PEN诱发放电增加或PIN诱发放电减少的同时发生甩尾反射,表现出辐射热致疼痛效应。(2)EA双侧“足三里”15min,可抑制PEN的电活动或加强PIN的电活动,同时使TFL延长,即呈现出EA的镇痛效应。(3)脑室(icv)注射CCK-8(10ng/10μl)能同时对抗EA所引起的PEN或PIN和TFL的镇痛作用。结论CCK-8的抗EA镇痛作用,在中枢痛反应神经元电活动和整体行为反射水平上是协调一致的。揭示,PEN和PIN的电活动作为疼痛和镇痛指标是确实可行的。

“肺病”模型大鼠肺与结肠组织中CGRP,CCK-8表达变化的探讨

目的:通过观察空白对照组、肺病(哮喘)组大鼠肺、结肠等组织切片中降钙基因相关肽(CGRP)、八肽胆囊收缩素(CCK-8)的表达,来探讨"肺"与"大肠"在病理状态下相互影响的物质基础。方法:将大鼠分为空白对照组、肺病组两个组别,每组10只。造模成功后,处死大鼠,分别取肺、结肠等组织,用免疫组化法检测各组织病理切片中CGRP与CCK-8的表达。结果:肺组织中CCK-8的表达与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01);结肠组织中CCK-8的表达与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01);肺组织中CGRP的表达与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01);结肠组织中CGRP的表达与空白对照组比较有差异(P<0.05)。结论:肺与大肠在病理状态下有一定的相关性,CCK-8为其联系的物质基础之一。

针刀松解对腰椎间盘突出症根性神经痛大鼠中枢与外周血CCK-8、5-HT的影响

目的探讨针刀松解对腰椎间盘突出症(LDH)根性神经痛SD大鼠中枢与外周血八肽胆囊收缩素(CCK-8)、5-羟色胺(5-HT)的影响及其作用机制。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、针刀组和电针组,每组10只,假手术组正常造模但不环扎神经根,模型组、针刀组、电针组参照陆志东非压迫性腰椎间盘髓核突出模型造模方法进行造模。在造模3 d后,假手术组正常饲养,针刀组给予针刀干预,每周1次,共3次;电针组进行电针干预,取环跳、委中,隔日治疗1次,每次20 min,1周治疗3次,共治疗3周。在实验过程中检测后肢热刺激缩爪的潜伏期,3周后检测各组大鼠下丘脑与外周血中CCK-8、5-HT含量的变化。结果模型组在术后第1周时开始出现热刺激痛觉过敏现象,与术前及假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05);第3周时潜伏期缩短最明显,与术前及假手术组比较差异有统计学意义(P<0.01);针刀组、电针组大鼠在治疗第2周时开始出现热刺激痛觉过敏现象减轻,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);假手术组大鼠在各时相点热刺激缩爪潜伏期差值与针刀组、电针组比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组下丘脑及血浆中CCK-8浓度明显高于假手术组(P<0.01);针刀组下丘脑及血浆中CCK-8浓度明显下降,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01),与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05);电针组下丘脑及血浆中CCK-8浓度亦有所下降,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。模型组下丘脑及血浆中5-HT浓度明显低于假手术组(P<0.01);针刀组下丘脑及血浆中5-HT浓度明显上升,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01),与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05);电针组下丘脑及血浆中5-HT浓度亦有所上升,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论针刀和电针均可降低LDH根性神经痛大鼠中枢与外周血CCK-8含量,提高5-HT的含量,但针刀效果比电针更为明显。

八肽胆囊收缩素对大鼠滑膜细胞株RSC-364基质金属蛋白酶-2和-9产生的影响

目的探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364细胞金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9产生的影响及其可能的分子机制。方法通过酶谱分析法检测不同浓度的CCK-8对大鼠滑膜细胞株RSC-364细胞MMP-2和MMP-9产生的影响。结果RSC-364细胞在无干预因素存在的情况下,仅有MMP-2的表达,MMP-9无明显表达;TNF-α(10ng/L)可诱导RSC-364细胞MMP-9的表达,使MMP-2的表达增加;在TNF-α(10ng/L)存在的情况下,10-6、10-7和10-8mol/L浓度的CCK-8对RSC-364细胞MMP-2和MMP-9的表达均有明显的抑制作用,CCK的受体拮抗剂丙谷胺可拮抗此作用。结论CCK-8可抑制TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364细胞MMP-2和MMP-9的产生,提示CCK-8可能具有潜在的调控类风湿关节炎发病过程的作用。

CC-K8抑制LPS诱导的大鼠肺间质巨噬细胞TLR4及IL-1β的表达

目的观察八肽胆囊收缩素(cholecystokininoctapeptide ,CCK 8)对外源性脂多糖(lipopolysaccharide ,LPS)激活大鼠肺间质巨噬细胞(pulmonaryinterstitialmacrophages,PIMs)Toll样受体4 (Tolllikereceptor4 ,TLR4 )及IL 1β表达的影响,探讨CCK- 8的抗炎作用机制。方法分离培养大鼠PIMs ,经LPS、CCK- 8及溶剂单独或共同孵育不同时间后,采用Northernblot、ELISA、RT PCR技术检测TLR4mRNA、IL- 1β及IL- 1βmRNA表达的变化。结果LPS(1mg/L)刺激可使PIMs中TLR4mRNA表达明显增强;随着LPS孵育时间的延长,细胞中的IL -1β含量逐渐增多,2 4h达高峰,IL- 1βmRNA表达水平同时明显升高;CCK 8可剂量依赖性抑制LPS诱导的大鼠PIMsTLR4mRNA、IL- 1β及IL 1βmRNA的表达。结论CCK 8对LPS激活的PIMsTLR4及IL- 1β表达有负性调节作用,是CCK- 8抗炎作用机制之一。