川芎茶调散与六经头痛片源流关系探讨

六经头痛片是国家二级中药保护品种,在治疗头痛方面有良好的临床表现,六经头痛片由《太平惠民和剂局方》中川芎茶调散加减而成,本研究通过对川芎茶调散及其类方进行文献溯源和用药分析,结合六经头痛片的组成及功效,认为六经头痛片延续了川芎茶调散辛散祛风止痛的功效,增加了补肝肾之阴的作用,使全方发挥了上下同治、标本兼顾的效果。

固相萃取-高效液相色谱法测定六经头痛片中马兜铃酸Ⅰ的含量

目的：建立六经头痛片中马兜铃酸Ⅰ的限量检查法。方法：通过提取、固相萃取对制剂中马兜铃酸Ⅰ进行提取纯化,应用高效液相色谱法对其进行检测。色谱条件：采用Phenomenex C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈-1%冰醋酸（38∶62）,检测波长为250 nm。结果：马兜铃酸Ⅰ在0.199 6～0.997 9μg/ml范围内线性关系良好（r=0.999 7）。检测限为0.997 9 ng、定量限为1.996 ng;平均回收率为99.18%,RSD为1.47%。结论：所建立的方法简便快捷,结果准确可靠,可作为控制六经头痛片安全性的检测方法。

六经头痛片治疗偏头痛的临床观察

目的观察六经头痛片对偏头痛的疗效。方法对56例偏头痛患者分为对照组和治疗组评价六经头痛片的疗效。结果治疗组和对照组相比疗效差异显著(P﹤0.01)。结论六经头痛片对偏头痛疗效显著。

六经头痛片治疗脑缺血作用机制的网络药理学和分子对接研究

目的利用网络药理学方法预测六经头痛片治疗脑缺血的核心成分和靶点,并通过分子对接初步验证。方法在TCMSP、CRD、HERB数据库查询六经头痛片9味组成药物的化学成分,在PubChem和Swiss ADME平台获取化学成分SMILES结构并进行标准化,利用化合物SMILES结构在SEA数据库进行靶点预测;在OMIM、Drugbank、CTD数据库获得脑缺血疾病靶点,利用Venny 2.0获得药物和疾病的共同靶点,把共同靶点放入STRING 11.5数据库进行PPI分析,利用Cytoscape 3.7.2绘制PPI网络以及六经头痛片治疗脑缺血“药物-化学成分-靶点-通路”网络图;利用AutoDock 1.5.6软件进行分子对接。结果共得到六经头痛片63个有效化学成分和200个作用靶点,药物和疾病共同靶点27个,筛选得到核心化学成分β-石竹烯(Beta-Caryophyllene,BCP)、6-去氢姜二酮(6-Dehydrogingerdione,6-DG)、薄荷酮(Menthone)、落叶松脂醇(Lariciresinol),以及关键靶点白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、转录因子AP-1(Transcription factor AP-1,JUN)、半胱天冬酶3(Caspases3,CASP3)。结论六经头痛片中的β-石竹烯、6-去氢姜辣二酮、薄荷酮、落叶松脂醇可能通过作用于IL-6、TNF-α、JUN、CASP3从而发挥治疗脑缺血疾病的疗效。

HPLC法同时测定六经头痛片中4种成分

目的建立HPLC法同时测定六经头痛片(白芷、辛夷、藁本等)中4种成分的含有量。方法该药物30%乙醇提取液的分析采用Waters C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以甲醇-4%乙酸为流动相,梯度洗脱;检测波长320 nm;体积流量1.0 m L/min;柱温35℃。结果葛根素、阿魏酸、欧前胡素、异欧前胡素分别在60.6~303μg/m L(r=0.999 9)、1.59~7.95μg/m L(r=0.999 9)、1.57~7.85μg/m L(r=0.999 9)、0.752 5~3.762 5μg/m L(r=0.999 7)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率(RSD)分别为97.75%(1.7%)、97.68%(2.3%)、97.94%(1.0%)、98.29%(1.6%)。结论该方法稳定可靠,可用于六经头痛片的质量控制。

基于NF-κB信号通路探讨六经头痛片对永久性脑缺血大鼠的脑保护作用

研究六经头痛片对永久性大脑中动脉闭塞(pMCAO)模型大鼠的脑保护作用及其作用机制。采用线栓法建立pMCAO模型。将84只SPF级SD雄性大鼠随机分成6组:假手术组,模型组,尼莫地平组(0.020 g·kg^(-1)),六经头痛片高、中、低剂量给药组(2.8、1.4、0.7 g·kg^(-1))。分别采用Longa评分法、脱胶实验和激光散斑衬比成像技术对神经功能损伤程度及缺血局部脑血流量变化程度进行检测,每天记录各组大鼠的生存情况及死亡数量,造模连续给药7 d后,将各组大鼠处死,取大鼠脑组织和血液进行相应指标检测;尼氏染色法检测脑组织神经元病理变化;采用相应试剂盒检测大鼠血清中的肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、血管内皮生长因子(VEGF)、降钙素基因相关肽(CGRP)、β-内啡肽(β-EP)、和内源性一氧化氮(NO)的含量变化,运用熵权法分析各指标权重;采用蛋白免疫印迹(Western blot)法测定脑组织的核因子-κB(NF-κB)、核因子抑制蛋白(IκBα)、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)、磷酸化核因子-κB上游激酶(p-IKKα)的蛋白表达水平;采用免疫组化法检测大鼠脑组织趋化素样因子1(CKLF1)、C-C趋化因子受体5(CCR5)蛋白表达情况。与假手术组相比,模型组大鼠神经功能损伤评分显著升高,除胶时间显著延长,脑血流量显著降低,神经元损伤显著升高,生存率显著降低,大鼠血清中的TNF-α、IL-1β、IL-6、CGRP、NO水平显著增加,VEGF、β-EP水平显著降低,大鼠脑组织的NF-κB p65、p-IκBα/IκBα和p-IKKα表达显著升高,CKLF1、CCR5蛋白表达显著性增加;与模型组相比,六经头痛片高剂量组在灌胃7 d后能显著性改善pMCAO大鼠的神经功能评分,六经头痛片各剂量组均可显著降低除胶时间、恢复脑血流量,六经头痛片中、高剂量组可显著性改善神经元损伤,各剂量组的大鼠血清中的TNF-α、IL-1β、IL-6、CGRP、NO水平显著降低,VEGF、β-EP水平显著升高,各剂量组大鼠脑组织中NF-κB p65、p-IκBα/IκBα和p-IKKα水平显著降低,各剂量组大鼠脑组织中CCR5蛋白表达显著降低。结合熵权分析发现,造模过程对CGRP、β-EP影响较大,同时六经头痛片在减少TNF-α、IL-1β等炎症因子的释放作用较强。六经头痛片可能通过降低神经炎症损伤发挥永久性脑缺血大鼠的脑保护作用,其机制可能与抑制NF-κB信号通路进而调控CKLF1/CCR5轴的作用有关。此外,六经头痛片还可能通过降低CGRP和NO水平、升高β-EP水平,发挥一定的镇痛作用。

基于GC-MS的六经头痛片挥发性化学成分研究

目的通过GC-MS法分析六经头痛片中挥发性成分。方法利用水蒸气蒸馏法提取六经头痛片挥发油,运用GC-MS联用技术对提取物进行成分分析,谱库检索结合药材色谱峰归属对六经头痛片挥发油进行定性分析,应用峰面积百分比法计算相对量。结果从六经头痛片挥发油中共鉴定出102个成分,其中薄荷酮(11.887%)相对量最高,另对各色谱峰进行药材归属,其中87个色谱峰已归属至药材,占已鉴定总峰个数的85.3%。结论通过GC-MS法能够快速有效地分析六经头痛片中的挥发性成分,为六经头痛片药效成分的研究和质量控制提供参考。

基于HPLC-Q/TOF-MS的六经头痛片血中移行成分研究

目的对中药复方制剂六经头痛片进行血清药物化学研究,为确定六经头痛片药效物质成分奠定基础。方法采用HPLC-Q/TOF-MS技术,对ig给予六经头痛片后的大鼠血浆进行分析。结果综合分析六经头痛片体外样品、给药组血浆、空白组血浆的总离子流图、提取离子流图及质谱图等信息,鉴定了含药血浆中出现的46个移行成分,包括葛根素等24个吸收原型成分及22个代谢产物。结论血浆中检测到的吸收原型成分和代谢产物,可能是六经头痛片的真正活性成分,为明确六经头痛片药效物质基础提供了科学依据。

六经头痛片镇痛作用特点与比较优势研究

目的通过不同镇痛药效学模型、实验性偏头痛模型及气滞血瘀模型,与同类药正天丸对比,探讨六经头痛片的镇痛作用特点及优势。方法通过小鼠热板实验、醋酸扭体实验,观察六经头痛片对温热刺激、化学刺激引起疼痛的影响;采用硝酸甘油诱发实验性大鼠偏头痛模型,观察其对搔头反应潜伏期及搔头次数的影响,检测大鼠血清一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)及β-内啡肽(β-EP)水平;采用sc盐酸肾上腺素联合冰水浴的方法制备气滞血瘀模型,观察其对脑血流速率及血液流变学指标的影响。结果六经头痛片可显著增加热板实验小鼠痛阈值,减少醋酸引起的小鼠扭体次数;显著延长偏头痛模型大鼠搔头反应的潜伏期,减少搔头次数,显著降低偏头痛大鼠血清NO、NOS水平,升高β-EP水平;可显著升高气滞血瘀模型大鼠脑血流速率,降低全血黏度及血浆黏度。结论六经头痛片对中枢疼痛、炎性疼痛及实验性偏头痛模型具有显著的镇痛作用,对气滞血瘀模型具有显著的活血化瘀作用,具有起效早,药效持续时间长的特点。与同类药正天丸比较,镇痛作用相当,但起效快,多靶点。

六经头痛片治疗大鼠偏头痛的作用及机制研究

目的探讨六经头痛片治疗偏头痛的作用及可能的机制。方法通过sc硝酸甘油复制大鼠偏头痛模型,观察大鼠搔头次数和搔头反应潜伏期;采用酶联免疫实验(ELISA)检测脑组织中5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)水平及血清中β-内啡肽(β-EP)、降钙素基因相关肽(CGRP)、内皮素(ET)的量,采用生化法测定血清中一氧化氮(NO)量及一氧化氮合酶(NOS)活性。结果模型组大鼠在sc硝酸甘油后1~3 min即出现搔头,且次数频繁。与模型组比较,六经头痛片1.4、0.7 g/kg组可显著减少偏头痛模型大鼠的搔头次数(P<0.001),并呈剂量相关性,能够明显延长大鼠搔头反应的潜伏期(P<0.01);六经头痛片1.4、0.7 g/kg组可显著升高模型大鼠血清β-EP、ET及脑内DA的量,显著降低血清CGRP的量和NOS活性,六经头痛片1.4 g/kg组可明显降低血清NO的量,对脑内5-HT、NE的量基本无影响。结论六经头痛片有显著的治疗偏头痛作用,可以升高血清β-EP、ET、DA的量,降低CGRP、NO的量及NOS活性,其作用机制与收缩血管及中枢镇痛有关。

六经头痛片中辛夷和细辛GC指纹图谱研究

目的建立六经头痛片原料药材辛夷和细辛的GC指纹图谱,为六经头痛片质量评价提供依据。方法采用Aglient DB-WAX(20 m×0.18 mm,180μm)气相色谱柱,优化程序升温条件,测定11批辛夷、细辛原料药材,利用SPSS聚类分析和中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)建立辛夷药材指纹图谱,并通过Agilent 7890A-5975C气-质联用仪对共有峰进行指认。结果通过11批样品的测定和SPSS聚类分析将10批辛夷药材聚为一类,并建立辛夷药材GC指纹图谱,相似度均在0.9以上,共得22个共有峰,其中归属至全方的成分为14个,药材独有成分8个;将10批细辛药材聚为一类,并建立细辛药材GC指纹图谱,相似度均在0.9以上,共得11个共有峰,其中归属至全方的成分为4个,药材独有成分为7个。结论本方法专属性强、准确性高、重复性良好,可为辛夷、细辛药材的质量控制提供依据。

六经头痛片的二次开发研究

中药大品种二次开发研究是中药创新研究的重要内容,是继承和发展中医药理论,突破制约中医药理论和中药产业发展瓶颈的重要路径。以六经头痛片为研究对象,进行系统的二次开发研究,通过药材、成品以及口服入血成分的辨识和表征,阐释了六经头痛片的化学物质组,进一步通过G-蛋白偶联受体结合实验以及网络药理学分析,筛选和明确了主要药效物质基础;通过与头痛相关的整体及动物模型、离体器官、细胞、相关功能受体以及网络药理学研究,揭示六经头痛片的作用机制;通过拆方研究并与同类中药以及化学药比较,阐释该药的组方特点和配伍规律,提炼和发现其作用特点、比较优势和临床核心价值;通过从化学物质组的辨识与指认、成品质量信息的各原料药材的来源与归属、多指标成分的定量测定、指纹图谱共有模式的建立以及多批样品测定等方面进行系统研究,建立六经头痛片的药材与成品的质量控制体系,对原有的质量标准进行了全面的提升,保证产品的质量均一、稳定、可控。为该品种的临床推广应用和指导临床实践提供了重要的理论和实验依据,并为其他中药大品种的二次开发研究提供了可参考的思路与模式。

六经头痛片对离体大鼠主动脉收缩及三叉神经降钙素基因相关肽表达的影响

目的观察六经头痛片对大鼠离体血管平滑肌收缩活动及三叉神经降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响。方法制备大鼠离体主动脉血管环,采用麦氏浴槽法观察六经头痛片对血管平滑肌收缩活动的影响;培养三叉神经节组织,观察六经头痛片对三叉神经节CGRP表达的影响。结果六经头痛片可以减弱KCl及去甲肾上腺素(NE)引起的胸主动脉环收缩反应,对KCl收缩的半数抑制浓度(IC_(50))为0.97 mg/m L,对NE收缩的IC_(50)为0.55 mg/m L。而且,六经头痛片在1.4、0.14mg/m L时可明显减少离体培养24、48 h后三叉神经节CGRP阳性细胞的数量(P<0.05)。结论六经头痛片既可以对抗血管平滑肌的收缩,又可以降低三叉神经具有扩张血管作用的CGRP的量,说明六经头痛片具有稳定血管舒缩的作用。

HPLC法测定六经头痛片中的胡薄荷酮

目的建立测定六经头痛片中胡薄荷酮的高效液相色谱法。方法采用Agilent Zorbax SB C18色谱柱（250 mm×4.6mm,5μm）;以乙腈–0.05%磷酸水溶液为流动相,进行梯度洗脱;检测波长256 nm;柱温30℃;体积流量1.0 mL/min;进样量10μL。结果胡薄荷酮在0.442 3-1 105.8 ng与峰面积线性良好（r=0.999 9）,平均回收率为97.59%,RSD值为1.54%（n=6）。结论建立的方法专属性强、准确、快速,可有效地控制六经头痛片的质量。

六经头痛片HPLC指纹图谱建立及多指标成分定量测定研究

目的建立六经头痛片(LTT)HPLC指纹图谱,并采用波长切换技术同时定量测定3′-羟基葛根素、葛根素、大豆苷、特女贞苷和大豆苷元,为评价LTT质量提供依据。方法采用HPLC法,以Diamonsil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-0.1%磷酸水为流动相,分别建立LTT高极性和低极性部分指纹图谱,并采用波长切换技术同时测定LTT中3′-羟基葛根素、葛根素、大豆苷、特女贞苷和大豆苷元5种指标性成分量。结果分别建立了11批LTT高、低极性部分指纹图谱,其相似度均大于0.90;低极性指纹谱确定了16个共有峰,对其中12个共有峰进行了归属,11、12、13号峰来源于白芷,1、2、3、7号峰来源于葛根,8号峰来源于女贞子,5、6号峰来源于川芎,15号峰来源于藁本,4号峰为川芎和藁本的共有峰,对其中7个共有峰经对照品指认,分别为葛根素(1号峰)、3′-甲氧基葛根素(2号峰)、大豆苷(3号峰)、阿魏酸(4号峰)、大豆苷元(7号峰)、欧前胡素(11号峰)和异欧前胡素(13号峰);高极性指纹图谱确定了10个共有峰,其中2~9号峰来源于葛根,1、10号峰来源于女贞子,对其中5个共有峰经对照品指认,分别为3′-羟基葛根素(2号峰)、葛根素(3号峰)、3′-甲氧基葛根素(4号峰)、大豆苷(7号峰)和特女贞苷(10号峰)。多成分定量测定中,3′-羟基葛根素在71.60~716.00 ng(r=0.999 1)、葛根素在407.78~4 077.80 ng(r=0.999 4)、大豆苷在90.72~907.20 ng(r=0.999 9)、特女贞苷在95.80~958.00 ng(r=0.999 1)、大豆苷元在21.98~219.80 ng(r=0.999 9)线性关系良好,平均加样回收率和相应的RSD分别为101.1%、1.38%,97.8%、0.72%,99.1%、0.75%,97.8%、2.75%,98.7%、0.70%;10批样品中3′-羟基葛根素量为3.08~3.84 mg/m L、葛根素17.71~21.24 mg/m L、大豆苷3.51~4.71 mg/m L、特女贞苷1.40~5.69 mg/m L、大豆苷元0.66~0.86 mg/m L。结论该法稳定可靠、重复性好,通过HPLC指纹图谱结合多指标定量测定方法较全面地反映了LTT内在质量,为其质量控制提供了可靠的科学依据。

基于网络药理学的六经头痛片治疗偏头痛的作用机制探讨

目的对六经头痛片进行网络药理学研究,探究其治疗偏头痛的作用机制。方法选取六经头痛片中的18个入血及活性成分为研究对象,依据反向药效团匹配方法预测化合物的作用靶点,借助MAS 3.0生物分子功能软件及京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库获取相关通路并进行关联分析,最后利用Cytoscape软件构建六经头痛片"化合物-靶点-通路-疾病"的网络药理图。结果实验表明,18个化合物可通过72个作用靶标作用于88条通路,其中36个蛋白靶点和22条通路与偏头痛相关。结论六经头痛片可能通过干预与血管内稳态、炎症、神经中枢、免疫及激素调节等相关通路,起到疏风活络、利窍止痛的作用从而治疗偏头痛。

基于HPLC-Q-TOF/MS的六经头痛片化学成分分析

目的运用高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术(HPLC-Q-TOF/MS),对六经头痛片中的化学成分进行分析鉴定。方法采用Diamonsil C_(18)(250 mm×4.6μm,5μm)反相HPLC梯度洗脱法分离各主要成分,电喷雾电离源正负离子模式下对色谱流出物进行高分辨四级杆飞行时间串联质谱检测,对各主要色谱峰进行归属;同时结合化合物准确相对分子质量、质谱碎片离子信息及相关文献数据分析鉴定化合物。结果通过质谱裂解规律结合自建的8味组方药材的化学成分库信息,共鉴定出95个化合物,主要包括异黄酮类、香豆素类、环烯醚萜类和苯酞类等成分,并对化合物的药材来源进行了归属。结论采用HPLC-Q-TOF/MS联用技术比较全面地阐明了六经头痛片的化学组成,为其药效物质基础研究和质量控制提供了参考。

六经头痛片质量标准

目的:研究六经头痛片以提高其质量标准。方法:采用薄层色谱法对制剂中白芷、葛根进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定制剂中葛根素含量,岛津C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流速1 mL.min-1,流动相甲醇-0.025 mol.L-1磷酸溶液(20∶80),柱温30℃,检测波长250 nm。结果:在薄层色谱中均可检出白芷、葛根的特征斑点;葛根素在0.042～0.378μg线性关系良好(r=0.999 9),回收率98.368%(RSD 1.87%)。结论:方法简便可行、重复性好,能有效控制该制剂的质量。

六经头痛片联合氟桂利嗪治疗偏头痛的临床研究

目的观察六经头痛片联合盐酸氟桂利嗪治疗偏头痛的临床效果。方法选择2017年1月—2018年11月郑州煤炭工业(集团)有限责任公司米村煤矿职工医院收治的偏头痛患者123例,随机分为对照组(62例)和治疗组(61例)。对照组患者睡前口服盐酸氟桂利嗪胶囊,2粒/次,1次/d。治疗组在对照组用药基础上口服六经头痛片,3片/次,3次/d。两组患者连续治疗3个月。观察两组患者临床疗效,同时比较治疗前后两组患者同型半胱氨酸(Hcy)、降钙素基因相关肽(CGRP)、5-羟色胺(5-HT)水平,大脑后动脉(PCA)、大脑前动脉(ACA)和大脑中动脉(MCA)血流速度,以及视觉模拟评分法(VAS)评分和头痛发作频率。结果治疗后,对照组和治疗组临床有效率分别为77.42%和93.44%,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者Hcy和CGRP水平显著降低(P<0.05),而5-HT水平显著升高(P<0.05);且治疗组患者Hcy、CGRP和5-HT水平改善效果明显优于对照组(P<0.05)。治疗后,两组患者PCA、ACA和MCA血流速度水平,以及VAS评分和头痛发作频率均明显降低(P<0.05),且治疗组患者明显比对照组低(P<0.05)。结论六经头痛片联合盐酸氟桂利嗪治疗偏头痛可降低患者疼痛次数,降低脑血流速度,安全可靠,具有一定的临床推广应用价值。

高效液相色谱法测定六经头痛片中欧前胡素的含量

目的：建立六经头痛片中欧前胡素的高效液相色谱含量测定方法。方法：采用Shim-packVp-（）DSC，8（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱；流动相为乙腈一水（55：45）；流速为1．0mL·min^-1，检测波长为300nm。结果：欧前胡素在0．1088～0．544μg范围内，呈良好的线性关r=0．9999（n=5），平均回收率为97．8％，RSD为1．02％。结论：本方法灵敏度高，准确，重复性好，可作为六经头痛片中欧前胡素含量测定方法。