六肽因的抗皱、舒缓效果及其安全性评价

通过体外抗氧化试验、透明质酸酶抑制试验结合人体临床测试评估了六肽因的抗皱、舒缓及安全性。结果显示,六肽因显示出较高的整体体外抗氧化能力,4mg/mL六肽因溶液对ABTS+自由基、DPPH自由基的清除率为92.23%±1.15%、90.24%±1.25%;80mg/mL六肽因溶液对PTIO自由基的清除率为80.29%±2.41%。在舒缓功效评价方面,80mg/mL六肽因溶液对透明质酸酶抑制率为75.00%±6.13%。临床测试结果表明,六肽因具有良好的抗皱、舒缓效果,且未出现1例1级及以上的皮肤不良反应,表明六肽因具有良好的安全性。

次血红素六肽对纳米金诱导线虫热激损伤的保护作用

通过考察Au纳米球壳对野生型秀丽隐杆线虫的光热转换作用,建立一种新型的秀丽线虫热激损伤模型.实验结果表明,在纳米金浓度为30μmol/L,红外光强为3 W/cm2,照射8 min的热激条件下加入次血红素六肽对线虫有保护作用.

玉米六肽的酶法糖基化修饰对产物生物活性的影响

以微生物转谷氨酰胺酶作为催化剂,D-氨基葡萄糖为酰基受体,通过糖基化反应修饰玉米六肽(Gln-Gln-Pro-Gln-Pro-Trp)制备玉米糖肽,对糖肽的部分生物活性进行测定,以表征糖基化修饰对玉米六肽生物活性的影响。实验结果表明,有一分子D-氨基葡萄糖与玉米六肽共价连接,且糖基化修饰改善了玉米六肽的抗氧化活性和乙醇脱氢酶激活率。其中,玉米糖肽清除DPPH自由基和ABTS自由基的半最大抑制浓度(EC_(50))值分别为1.04 mg/mL和0.80 mg/mL,分别比玉米六肽低0.25 mg/mL和0.10 mg/mL。在质量浓度为2.5 mg/mL时,糖肽的羟基自由基清除率、超氧阴离子自由基清除率、还原力、亚铁离子螯合率和乙醇脱氢酶激活率分别比玉米六肽高63.13%,16.29%,143.37%,100%和9.95%。

富含Trp/Arg六肽的抗菌作用研究

为了验证富含Trp/Arg六肽对临床分离菌的抗菌效果,试验采用肉汤稀释法和动物试验法测试了富含Trp/Arg六肽对兔致病菌大肠杆菌、支气管败血波氏杆菌、魏氏梭菌的体外抗菌活性。结果表明:该六肽对大肠杆菌和魏氏梭菌的抑菌作用好于支气管败血波氏杆菌,但该六肽不具有杀菌作用,对接种动物也无治疗效果。

环六缩酚肽化合物体外抑制人肺癌细胞增殖活性及其机制的研究

目的检测3种环六缩酚肽化合物对人肺部肿瘤细胞增殖活性的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法腐败菌素B,pseudodestruxin C和pullularin C在3种浓度100,10和1μmol/L分别作用于人非小细胞肺癌细胞(A549和QC-56)和人小细胞肺癌细胞(PC-6和QG-90),MTT比色法检测细胞存活率,计算IC_(50)。腐败菌素B,pseudodestruxin C和pullularin C在浓度1μmoL/L时作用于A549细胞24h,双荧光素酶报告基因检测系统检测p53报告基因(pG53-Luc)、bax报告基因(pGBax-Luc)、核因子-kB报告基因(Igk-Luc)和激活T细胞核因子报告基因(NFAT-Lue)的表达。结果 pullularin C对4种实验用人肺癌细胞均显示极强的抑制作用,强于阳性对照药物顺铂;而结构相似的化合物腐败菌素B和pseudodestruxin C对实验用人肺部肿瘤细胞的增殖不显示抑制活性。结论环六缩酚肽化合物pullularin C对人肺癌细胞的增殖具有较强的抑制活性,并且1μmol/L.pullularinC可明显诱导A549细胞内p-53和bax基因转录的表达,推测pullularin C对人肺肿瘤细胞增殖的抑制作用可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡来实现的。

环六缩酚肽抑制人前列腺癌细胞增殖活性及作用机制研究

目的研究从微生物次生代谢产物中纯化的3种环六缩酚肽对人前列腺癌细胞(PC-3)增殖的抑制作用,并进一步探讨其可能的作用机制。方法 MTT比色法检测细胞增殖抑制率;TUNEL技术检测PC-3细胞凋亡;Western印迹技术检测Bax和caspase-3蛋白的表达变化。结果 MTT法实验结果显示10μmol·L-1浓度的Pullularin C对PC-3细胞增殖有明显抑制作用,与对照组相比差异有显著性(P<0.01);TUNEL检测结果显示1μmol·L-1浓度的PullularinC处理组的细胞凋亡率明显高于阴性对照组(P<0.01);Western blot分析结果显示由Pullularin C处理的PC-3细胞中的Bax和caspase-3的表达与对照组相比有明显的增加(P<0.05)。结论 Pullularin C具有极强的抑制人前列腺癌细胞增殖作用,并可诱导其凋亡。Pullularin C诱导PC-3细胞凋亡可能通过Bax和caspase-3介导。

筛选和鉴定抗卵巢癌活性六肽的靶点蛋白

目的采用pull-down技术筛选乳源抗癌六肽(PGPIPN)在人卵巢癌细胞株(SKOV3)上的靶点蛋白(受体)并进行鉴定。方法以PGPIPN的序列为参照,设计出PGPIPN基因,以BamHⅠ/XhoⅠ为酶切位点,将PGPIPN基因构建到表达质粒载体pGEX-4T-1中,转化到E.coli BL21中,用诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)低温诱导表达的谷胱甘肽S转移酶(GST)标签融合蛋白作为诱饵蛋白;从SKOV3中提取的总蛋白作为捕获蛋白,运用GST pulldown技术,筛选出靶点蛋白质,运用SDS-PAGE电泳进行初步鉴定,并用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的PGPIPN孵育鉴定。结果 SDS-PAGE电泳中有两条条带,一条为诱饵蛋白,一条为目的条带,在免疫荧光显微镜下观察到荧光PGPIPN结合到该条带上。结论筛选和鉴定了PGPIPN作用于卵巢癌细胞上的靶蛋白,为研究其抗癌的作用机制及其信号转导通路奠定了基础。

六胜肽的固相合成

采用多肽同相合成方法,全程在无水环境中,以Fmoc-保护基保护的氨基酸和氨基树脂为原料,经N-二异丙基乙胺(DIEA)、六氟磷酸苯骈三唑-1-基-氟基三吡咯烷基(PyBoP)、I-氧-3-双二甲胺羰基苯骈三氮唑四氟化硼盐(TBTU)缩合,再用切割试剂把粗品从氨基树脂上切下来,得到目标粗肽,最后经纯化分离得到纯度在95%以上的目标肽。

用噬菌体展示六肽库筛选与G-CSF具有结合活性的小分子多肽

目的筛选与人重组G-CSF分子有结合活性的小分子多肽。方法将靶分子G-CSF固定在塑料平皿上,对随机噬菌体六肽库进行3轮筛选。经孵育、洗脱、扩大培养和ELISA分析,随机挑取出第3轮得到的4个阳性克隆测序,然后进行同源性比较。结果找到1个保守性肽段序列模式“SXXRVX”,此模式在人和小鼠的受体中都未见到其同源序列。结论此小肽可与G-CSF结合,故在一定程度上有可能抑制G-CSF与受体的结合,为临床治疗炎症反应和研究G-CSF与受体相互作用的机制提供了一定的帮助。

六肽对犬血小板聚集功能的影响

目的研究六肽对犬血小板聚集功能的影响。方法采集犬股动脉血,以枸橼酸钠抗凝,用比浊法测犬血小板在不同诱导剂诱导时的聚集率。结果 1×10^-6 mol·L^-1六肽,抑制由二磷酸腺苷、花生四烯酸和凝血酶诱导的犬血小板聚集的抑制率分别为88.47%±1.15%,97.68%±0.72%和32.02%±3.78%;六肽1×10^-8~1×10^-5 mol·L^-1组对由ADP诱导的血小板聚集率显著低于对照组（P〈0.01或P〈0.05）,且各剂量对之间相应的血小板聚集率有显著差异（P〈0.01或P〈0.05）。六肽抑制犬由花生四烯酸、二磷酸腺苷和凝血酶诱导的血小板聚集的IC50分别为1.29×10^-9,7.24×10^-8和2.88×10^-6 mol·L^-1;对于依替巴肽,同等条件下测得其IC50分别为6.76×10^-10,5.74×10^-8和1.62×10^-6 mol·L^-1。结论六肽在体外可以抑制犬血小板聚集,其作用效果类似于依替巴肽。

酵母来源血管紧张素转移酶抑制六肽性质研究

对具有良好ACE抑制效果的酵母来源ACE抑制六肽(TPTQQS)进行了性质研究。建立了TPTQQS的RP-HPLC的检测方法,并考察了其热稳定性及抗消化性能。结果证实,以含0.05%TFA的超纯水为流动相对TPTQQS进行分析,该方法具有良好的精密度及准确度,能够对TPTQQS进行定性及定量分析,该方法的平均加样回收率为99.08%。在该检测条件下研究该六肽的热稳定性及抗消化性能,结果证实,该多肽在37～60℃下具有良好的热稳定性,并且能够有效抵抗胃肠道蛋白酶的消化。

液相色谱-串联质谱法测定化妆品中谷胱甘肽和乙酰基六肽-8的含量

建立了以液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定化妆品中谷胱甘肽和乙酰基六肽-8含量的方法。样品经水提取,用Agilent Poroshell 120 EC-C18柱(4.6 mm×100 mm×2.7μm)分离,以乙腈和含有体积分数0.1%乙酸水溶液等度洗脱,流速0.3 mL/min,以多反应模式(MRM)监测,外标法定量。结果表明,谷胱甘肽和乙酰基六肽-8在1~200 ng/mL范围内线性良好,相关系数(r)均大于0.995,检出限(LOD)分别为0.08μg/g和0.15μg/g,平均回收率为85.1%~105.6%,相对标准偏差(RSD,n=6)为0.5%~4.4%。该方法快速简便、灵敏度高,可用于化妆品中谷胱甘肽和乙酰基六肽-8的快速准确检测。

可降解聚合物包覆次血红素六肽微球的制备及生物活性

采用水包油包水(W1/O/W2)复乳溶剂挥发法制备了包覆次血红素六肽(DhHP-6)的2种聚酯微球.通过扫描电子显微镜、体外缓释行为、高效液相(HPLC)检测、酶活力测定和初步的动物实验等表征,综合评价了载药微球的体外释放及体内生物活性.实验结果表明,载药微球球体圆整,粒径分布均匀,载药量高,能够实现体外缓释,并对细胞过氧化损伤和小鼠脑缺血损伤均有一定的保护作用.

L-天冬氨酸六肽-布洛芬的合成

目的合成可能具有骨靶向性的非甾体抗炎药。方法使用混合酸酐法制备L-天冬氨酸六肽,分别用混合酸酐法和DCC法连接布洛芬,氢化还原得产物。结果制备得到L-天冬氨酸六肽-布洛芬,产物经MS确证。结论所用方法经济,可靠。

基于次血红素六肽的过氧化氢和葡萄糖灵敏比色方法

采用次血红素六肽(DhHP-6)催化H2O2氧化4-氨基安替吡啉-氯代苯酚显色体系,建立了测定H2O2和葡萄糖的方法。研究了pH值、底物浓度和DhHP-6浓度对实验的影响,检测了比色方法的反应线性、稳定性、相关性和回收率。在最佳反应条件下,DhHP-6在不同时间及温度条件下,活性要优于过氧化物酶(POD);DhHP-6催化H2O2的米氏常数(Km)和最大反应速率(vmax)分别为0.171mmo/L和4.22×10^-6mol/s;H2O2响应的线性范围为0.39~25.0mmol/L;高、中、低3水平测定的变异系数(CV)和加标回收率分别在1.29%~2.16%和94.5%~101.1%之间;与葡萄糖商品试剂盒比较相关系数R^2=0.9946;36例血液样品中的葡萄糖浓度在4.26~17.48mmol/L之间。与葡萄糖检测商品试剂盒之间的两组数据经统计差异不显著(P>0.05)。该方法是一种简单、廉价、方便、灵敏的比色测定方法。

环六缩酚肽抑制人前列腺癌细胞增殖活性及作用机制

目的:分析环六缩酚肽对人前列腺癌细胞(PC-3)的增殖活性作用,并对其作用机制进行研究。方法:设置空白对照组(加入0.1%二甲基亚砜)、阳性对照组(加入奥沙利铂)和环六缩酚肽组(加入环六缩酚肽)3组,利用噻唑蓝(MTT)法测定各组人PC-3细胞的增殖率,利用TUNEL法测定各组人PC-3细胞的凋亡率,利用Western blot法测定各组人PC-3细胞Caspase-3、bcl-2及bax蛋白表达的调控情况。结果:培养24h和48h后,阳性对照组和环六缩酚肽组人PC-3细胞增殖率为(35.8±2.78)%、(44.8±3.00)%和(32.3±1.96)%、(38.1±2.12)%,人PC-3细胞凋亡率为(45.2±3.60)%、(48.2±3.71)%和(48.3±3.07)%、(50.1±4.15)%,与空白对照组的(100.0±2.16)%、(100.0±2.61)%和(6.0±0.95)%、(6.3±1.05)%对比具有统计学差异(P<0.05);阳性对照组和环六缩酚肽组前列腺癌细胞中bax和Caspase-3蛋白表达水平增加,bcl-2蛋白表达水平降低,与空白对照组对比具有统计学差异(P<0.05)。结论:环六缩酚肽具有抑制人PC-3细胞增殖及凋亡的作用,通过caspase-3和Bax可对PC-3细胞的凋亡进行诱导。

乳铁蛋白活性六肽(LfcinB 4-9)增加人宫颈癌细胞对顺铂的敏感性及其机制

目的研究乳铁蛋白活性六肽(LfcinB 4-9)增加人宫颈癌细胞对顺铂的敏感性并探究其作用机制。方法MTT检测顺铂(DDP)联合不同浓度的LfcinB 4-9对人宫颈癌细胞Hela细胞株、敲除p62基因的Hela细胞株(Hela/KO p62)增殖的影响;平板克隆实验检测DDP联合LfcinB 4-9对人宫颈癌细胞克隆形成能力的影响;流式细胞术实验检测联合用药对人宫颈癌细胞凋亡的影响;qRT-PCR检测联合用药对人宫颈癌细胞Hela、Hela/KO p62中SIAH、PSMA、β-catenin等基因表达水平的影响;Western blot检测联合用药对人宫颈癌细胞中SIAH、PSMA、β-catenin等蛋白表达水平的影响。结果LfcinB 4-9和DDP联合用药对宫颈癌细胞的抑制率高于DDP单独作用组或单独LfcinB 4-9组(P<0.05或P<0.01),与DDP单独组相比,DDP联合LfcinB4-9作用后人卵巢癌细胞克隆形成能力降低,凋亡增加(P<0.05或P<0.01)。qRT-PCR和Western blot实验显示,DDP联合LfcinB 4-9作用时联合用药SIAH、PSMA1的表达量增加,而β-catenin的表达量降低。结论LfcinB4-9与DDP联合作用后增强了宫颈癌细胞对DDP的敏感性,其作用是通过蛋白酶体途径来实现的。

乳源六肽预防和降低小鼠急性酒精性肝损伤及其机制

目的研究乳源六肽(PGPIPN)在降低小鼠酒精性肝损伤方面的作用及其机制。方法建立小鼠急性酒精肝损伤的动物模型,健康雄性昆明种小鼠60只,体质量18~22 g,动物预饲养1周后分成6组:对照组、模型组、PGPIPN L组、PGPIPN M组、PGPIPN H组和谷胱甘肽(GSH)组,每组10只小鼠。为了制作小鼠急性酒精性肝损伤的动物模型,实验最后3 d,PGPIPN低、中、高剂量组、GSH组和模型对照组以56°红星二锅头酒灌胃,对照组使用等量蒸馏水灌胃,建立小鼠的急性酒精性肝损伤的对照模型。12 h后,将小鼠颈椎脱臼处死,取材检测相关指标。在实验结束时,将小鼠称重并麻醉,收集血清和肝脏样品,取肝脏称重后保存,计算出肝脏指数。同时,测定小鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量,血清和肝匀浆中三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)的含量。取肝脏组织制作成病理切片,观察肝脏细胞的病理学变化。原代细胞培养,流式细胞术检测肝脏组织的凋亡状况。结果生化分析显示模型组小鼠血清TG、TC和肝脏TG(肝匀浆中TG的浓度)高于对照组,PGPIPN H剂量组、PGPIPN M剂量组和PGPIPN L剂量组血清中ALT、AST含量与模型组相比降低,PGPIPN高剂量组中TNF-α含量较模型组也有减少。对照组中,肝细胞结构完整,凋亡指数为3.61%。而模型组中肝索结构紊乱,液泡数目增加,肝脏细胞的边界不清晰,细胞核消失,细胞皱缩,凋亡指数为36.87%,出现了明显的细胞凋亡状态。PGPIPN L组细胞出现凋亡状态,而PGPIPN H组细胞状态良好,无凋亡现象发生。流式细胞术检测细胞凋亡,对照组为4.558%,模型组为31.50%。结论PGPIPN能够预防和降低小鼠急性酒精性肝损伤。

乳铁蛋白六肽降低人卵巢癌细胞的耐药性及其机制

目的研究乳铁蛋白六肽(LfcinB4-9)降低人卵巢癌细胞的耐药性并探究其作用可能的机制。方法MTT检测顺铂(DDP)联合LfcinB4-9对人卵巢癌细胞SKOV3、SKOV3/DDP、CI3K、CI3K/DDP的增殖抑制;HE细胞染色切片实验检测人卵巢细胞经加药处理后细胞形态发生的变化;平板克隆实验检测DDP联合LfcinB4-9对人卵巢癌细胞克隆形成能力的影响;Transwell实验检测DDP联合LfcinB4-9对人卵巢癌细胞侵袭能力的影响;qRT-PCR检测人卵巢癌细胞在LfcinB4-9和DDP联合处理下HSF1、HSP70、OPTN等基因的表达情况。结果LfcinB4-9和DDP联合作用对卵巢癌细胞的抑制率明显高于DDP单独作用组(P<0.05或P<0.01),人卵巢细胞经DDP联合LfcinB4-9作用后细胞形态变化显著大于DDP单独作用组,与DDP单独组相比,DDP联合LfcinB4-9作用后人卵巢癌细胞克隆形成能力和侵袭能力均显著降低(P<0.05或P<0.01)。qRT-PCR实验显示,DDP联合LfcinB4-9时HSF1、HSP70、OPTN等耐药相关基因表达显著低于对照组和DDP单独组。结论LfcinB4-9与DDP联合作用后明显增强了卵巢癌细胞对DDP的敏感性,其作用是通过降低HSF1、HSP70、OPTN等基因表达,通过HSF1-HSP70-耐药蛋白的信号途径来实现的。

0.15nm分辨率去B链羧端六肽(B25～30)胰岛素晶体结构研究

应用差值Fourier技术,制约立体化学参数的最小二乘技术并辅以电子密度图的人工拟合,以0.25nm分辨率的去B链羧端六肽胰岛素(DHI)为起点,精化了0.15nm分辨率去六肽胰岛素的晶体结构,精化过程中确定了与蛋白质紧密结合的54个水分子。最终模型的晶体学可靠性只因子为0.187,键长和键角同标准值的均方根偏差分别为0.0016nm和2.7°。文中对DHI与其它胰岛素类似物的构象与功能差异进行了讨论。