2个猪品种的背最长肌组织中兰尼定受体(RYR1)基因表达的发育性变化

本研究采用实时荧光定量PCR方法检测了长白猪和梅山猪背最长肌组织中RYR1基因mRNA表达量在初生(0月龄)、1月龄、2月龄、3月龄、4月龄和5月龄间的变化及其与体重、肌纤维面积(CSA)和肌内脂肪含量(IMF)之间的相关性。结果表明:长白猪的体重、CSA在多数月龄均高于梅山猪,而梅山猪的IMF在多数月龄均高于长白猪。两品种RYR1基因表达量的发育性表达模式极为相似,均表现为波动起伏中逐渐上升的趋势。相同月龄时,梅山猪RYR1基因的表达量均高于长白猪。本文初步揭示了两猪种生长发育过程中RYR1基因表达的发育性变化模式和品种差异,为进一步研究RYR1基因对猪肉质性状的影响提供了基础数据。

猪兰尼定受体基因的PCR-RFLPS检测

从血样中提取２０头种猪的基因组ＤＮＡ，利用合成的特异性引物，进行ＰＣＲ扩增，得到了含兰尼定受体基因第１８４３碱基的６５９ｂｐＤＮＡ片段，利用ＨｈａⅠ酶切和电泳检测了兰尼定受体基因的变异．结果表明：在２０头猪中，基因型为Ｎｎ的杂合子猪４头，占２０％；基因型为ＮＮ的兰尼定受体基因正常猪１６头，占８０％；未检测到兰尼定受体基因突变纯合子．作者的研究证实利用ＰＣＲＲＦＬＰＳ技术检测兰尼定受体基因型具有快速、准确的特点，可为种猪品质的选定提供可靠数据．

兰尼定受体基因(RYR1)在藏猪背最长肌组织中的差异表达

兰尼定受体(rynodine receptor 1,RYR1)基因又称氟烷基因,已证明为猪应激综合征发生的主效基因。该基因的表达常常和猪肉质性状劣变相关联,因而具有较重要的研究前景。为了研究该基因在个体不同发育时期表达的规律性变化,为进一步深入研究该基因和肉质性状间的关系,本研究采用实时荧光定量PCR方法检测了藏猪背最长肌组织中RYR1基因在2、4、6和8月龄间表达为mRNA的量的差异。结果表明:不同月龄藏猪背最长肌中RYR1基因mRNA的表达量波动起伏,2月龄时表达量最高,4月龄表达量较2月龄极显著下降(P<0.01),6月龄又极显著上升(P<0.01),至8月龄极显著降低到最低水平(P<0.01)。本文初步揭示了藏猪RYR1基因表达在不同发育时期的变化,为进一步研究RYR1基因提供了基础数据。

凡纳滨对虾兰尼定受体基因单核苷酸多态性与对温度变化敏感性的关联分析

用直接测序法检测凡纳滨对虾兰尼定受体基因的单核苷酸多态性(SNP)位点,结果发现了1个SNP位点。通过进行凡纳滨对虾温度变化刺激的实验,把192尾对虾分为应激敏感组和应激抵抗组,用PCR产物直接测序法检测各对虾样品兰尼定受体基因的SNP的基因型。结果发现,应激敏感组和应激抵抗组的SNP等位基因频率差异显著(P<0.01)。结果显示兰尼定受体基因单核苷酸多态性与凡纳滨对虾对温度变化敏感性关联。

凡纳滨对虾兰尼定受体基因亚克隆文库的构建及部分序列的测定

将一个含有凡纳滨对虾兰尼定受体基因的fosmid克隆用DNA剪切仪进行片段化处理,回收3～5kb之间的DNA片段连接到pUC118HincⅡ/BAP载体上,构建了适合于鸟枪法测序的亚克隆文库.经鉴定,该文库滴度为5.0×104 cfu.mL-1,重组率达到90%,插入片段大小在3～5kb范围内.随机挑取100个阳性克隆进行两端测序,通过拼接得到一条兰尼定受体基因部分片段,该片段长2 550bp.通过比对分析,发现该基因片段推导的氨基酸序列与果蝇兰尼定受体基因有较高的相似性.

重症肌无力患者血清兰尼定碱受体抗体的测定及临床意义

目的探讨血清兰尼定碱受体抗体测定对于重症肌无力诊断的临床意义。方法采用梯度离心法纯化兔骨骼肌肌浆网作为兰尼定碱受体抗体的抗原,ELISA法测定74例重症肌无力患者(其中21例合并胸腺瘤)血清中兰尼定碱受体抗体的水平,并比较其临床意义。结果Westernblot验证梯度离心纯化的肌浆网中存在兰尼定碱受体,血清受体抗体测定在重症肌无力合并胸腺瘤患者中的阳性率较高,与重症肌无力病情严重程度密切相关。结论血清兰尼定碱受体抗体水平检测对于重症肌无力合并胸腺瘤诊断及判定预后具有重要临床意义。

次声对大鼠海马5-HT、5-HTR、RyR表达及恢复的研究

目的研究大鼠海马5-羟色胺(5-HT)、5-羟色胺受体(5-HTR)、兰尼定受体(RyR)表达在8Hz、130dB的次声作用后1周和2周时的恢复情况。方法大鼠暴露于8Hz、130dB次声1、7、14、21、28、35、42d后置安静环境观察1周或2周,取脑组织并进行免疫组织化学染色,光学显微镜下观察海马5-HT、5-HTR、RyR表达。结果次声作用组大鼠脑组织海马5-HT、5-HTR、RyR表达均较对照组减少,最低值分别出现于21d、28d和42d(P<0.01)。次声停止作用后,5-HT、5-HTR、RyR表达均逐渐回升,且随时间延长大部分恢复到正常对照水平。结论8Hz、130dB次声可引起大鼠海马5-HT、5-HTR、RyR表达减少,其变化规律与观察指标有关;次声引起的5-HT、5-HTR、RyR表达减少在停止次声作用后可逐渐恢复正常。

8Hz次声对大鼠海马和颞叶皮层RyR的表达影响

目的 研究 8Hz,90dB、10 0dB、130dB的次声对SD大鼠海马及颞叶皮层兰尼定受体(RyR)表达的影响。方法 雄性SD大鼠随机分为正常对照组、8Hz,90dB、10 0dB、130dB的 1、7、14、2 1、2 8、35、4 2d组共 2 8组。最后一次作用结束后立即取脑组织并进行RyR免疫组织化学染色 ,光学显微镜下观察海马及颞叶皮层RyR表达的变化。结果 次声作用组大鼠脑组织海马及颞叶皮层RyR表达均较对照组减少 ,8Hz,90dB组、10 0dB组以 2 1d减少最为明显 ,而 130dB组变化较为复杂 ,有2个峰值 ,14d和 4 2d,其中 4 2d阳性表达最少 (均P <0 .0 1) ,且 2 1d时 ,10 0dB组的表达减少较 90dB组为少 ,90dB组和 10 0dB组阳性表达在 2 1d后均有所回升。结论 8Hz ,90dB、10 0dB和 130dB次声可引起大鼠海马及颞叶皮层RyR表达减少 。

再灌注损伤大鼠心肌细胞核~3H-Ryanodine结合特性的变化

目的 观察缺血再灌注损伤 (IRI)心肌细胞核兰尼定受体 (Ry R)结合特性改变。方法 雄性Wistar大鼠随机分为 IRI组和假手术 (Sham )组 ,结扎冠状动脉左主干建立 IRI模型 ,~3H -Ryanodine饱和结合法分析分离的心肌细胞核上 Ry R最大结合容量 (Bmax)和解离常数 (K d)。结果 大鼠心肌细胞核存在高亲和力的 Ry R,IRI组较 Sham组 Bmax降低 2 9% (P<0 .0 1) ,K d差异无显著性 (P>0 .0 5 )。IRI组和 Sham组心肌细胞核经佛波酯 (PMA) +磷脂酰丝氨酸 (PS)处理后 ,Bmax均显著增加 (P均 <0 .0 1) ,但 IRI组的增加幅度较小 (P<0 .0 1) ;IRI组和 Sham组心肌细胞核经 Ca2 +钙调素 (Ca M)处理后 ,Bm ax均降低 (P均 <0 .0 5 ) ,但 IRI组降低幅度较小 (P<0 .0 1) ;上述处理对两组 K d均无显著影响 (P均 >0 .0 5 )。结论 IRI心肌细胞核 Ry R的 Bm ax呈降低趋势 ;经 PMA+PS和 Ca^(2 +) -Ca M处理后 ,Bmax的改变削弱 ,而 K d无改变。

血管平滑肌钙信号研究进展

钙离子是各型细胞中普遍存在的第二信使,能调节细胞的许多生理过程,其中包括血管平滑肌的收缩过程。血管平滑肌细胞内由兰尼定受体与三磷酸肌醇受体介导产生的胞内钙释放,对胞内钙离子浓度的调节极为重要。

从RYR1基因角度探讨猪种资源的保护与选育利用

采用PCR-RFLPs方法对撒坝猪、保山猪、大河猪、滇南小耳猪4个云南地方品种和杜洛克、长白、大约克、长白×大约克(LY)、PIC 5个引进品种(群体),共1 088头种猪的骨骼肌兰尼定受体(ryanodine re-ceptor,RYR1)基因C1843→T1843突变位点多态性进行了检测,并据此对猪种资源的保护和选育利用进行了探讨。上述9个品种(群体)RYR1T基因的频率分别为2.94%,2.27%,5.13%,1.85%,15.78%,4.11%,3.08%,0.39%,9.57%;23个种猪场中,有14个种猪场(占60.87%)的种猪携带有RYR1T基因,杜洛克、长白、大约克种猪的RYR1T基因频率分别为15.22%,3.73%,2.74%,平均为6.49%;45个人工授精站点中,有10个站点(占22.22%)的种猪公猪携带有RYR1T基因,杜洛克、长白、大约克种猪的RYR1T基因频率分别为18.29%,8.33%,5.00%,平均为10.18%。尽管云南地方猪品种RYR1T基因的平均频率(2.92%)低于引进品种(群体)(6.26%),但却明显高于国内其他地方猪种,很可能已发生了不同程度的RYR1T基因渗入,需引起足够重视并加强保种和选育提高。种猪场和人工授精站点种猪的RYR1T基因频率较高,尤其是广泛用作杂交终端父本的杜洛克,种猪场种猪和人工授精站点公猪的RYR1T基因频率分别高达15.22%和18.29%。为保证猪群的遗传品质和生产性能,需要加强种猪RYR1基因的监测与控制。

PCR一步法检测猪RYR1基因

在传统的PCR加酶切检测猪的RYR1基因基础上,设计能特异地扩增突变和正常序列的4条引物,根据扩增片段大小和条带多少可直接鉴别不同的RYR1基因型,从而建立了简单、廉价、准确地PCR一步检测猪应激综合征的新方法。

从江香猪RYR1基因2个SNP位点的多态性

兰尼定受体1(Ryanodine Receptor1,RYR1)基因的n等位基因是导致猪应激综合征的主效基因。为探明主产区从江香猪群体中是否存在n等位基因的污染,采用PCR-RFLP和AS-PCR方法对贵州从江香猪群体中n等位基因的多态性进行了检测。结果表明:从江香猪血液基因组DNA经扩增得到659bp的DNA片段,200头从江香猪的基因型均为纯合NN型,N等位基因频率为100%;对659bp扩增片段克隆测序发现1个新的变异位点(T1922C),导致成熟肽V641A替换。T1922C位点基因型均为TC杂合型,T等位基因和C等位基因频率均为50%。经三维结构预测,V641A替换位于RYR1蛋白SPRY1结构域的上游,T1922C变异对猪的兰尼定受体功能可能没有直接影响。

恶性高热病因、诊断及治疗的研究进展

恶性高热是一种罕见的骨骼肌遗传性疾病,通常是由吸入麻醉药或去极化骨骼肌松弛药诱发所致的骨骼肌高代谢反应,恶性高热是麻醉过程中较少见但后果致命的一种并发症。恶性高热的病因至今尚不明确,但已有很多病因相关的基因及分子机制研究,这些研究有助于更清楚地了解恶性高热和避免其发生。恶性高热的诊断需综合多方面因素,实验室诊断仍为金标准,在诊断过程中还要注意与其他相关疾病进行鉴别。恶性高热的治疗目前以对症支持和药物丹曲林为主,但丹曲林在相当一部分国家和地区供应使用情况并不乐观,研究更有效的对症措施以及开发效果显著且经济适宜的抗恶性高热药物是十分重要的。

恶性高热与劳累性热病、劳累性横纹肌溶解有关联吗?

临床观察和近年恶性高热(MH)的研究发现,一小部分曾经历过劳累性热病(EHI)或劳累性横纹肌溶解(ERM)的患者由于携带与导致MH相似的兰尼定受体1(RYR1)的突变而增加了手术中发生MH的危险性;有MH既往史或家族史的患者在高强度运动、马拉松或军队训练时也更易发生劳累性热休克(EHS)或/和ERM,也可能发展为清醒型或非麻醉诱导的MH综合征。本文通过介绍一系列的病例报道和近期MH与EHI、 ERM相关的研究,进一步强调术前病史采集和MH危险评估的必要性,呼吁储备静脉丹曲林,提高临床麻醉医生、急诊室、神经内科、家庭社区医生、重症监护医生和外科医生对MH的认知。最后阐述了MH专家针对清醒型MH的共识和防治指南。

蕨麻正丁醇部位下调缺氧心肌细胞CaV1.2及Ryanodine受体表达

【目的】研究蕨麻正丁醇部位对大鼠心肌细胞缺氧所致钙超载的抑制作用,并通过研究其对心肌细胞L-型钙通道(Ltype calcium channel,Cav1.2)及肌浆网兰尼定受体(Ryanodine receptor,Ry R)表达的影响,探讨其可能的机制。【方法】建立原代心肌细胞缺氧模型,设正常对照组、缺氧损伤组、维拉帕米组(5μmol/L)及蕨麻正丁醇部位高、中、低浓度组(250.0、62.5、15.6μg/ml)。采用荧光分光光度法检测各组心肌细胞内钙离子变化,RT-PCR法检测心肌细胞Cav1.2和Ry R m RNA表达水平。【结果】缺氧损伤组心肌细胞内游离钙离子的浓度较正常对照组明显增加(P<0.01),Cav1.2 m RNA、Ry R m RNA表达明显增强(P<0.01),维拉帕米组和蕨麻正丁醇部位高、中、低浓度组心肌细胞内游离钙离子的浓度较缺氧损伤组明显降低,Cav1.2 m RNA(P<0.01或P<0.05)和Ry R m RNA(P<0.01)表达明显降低。【结论】蕨麻正丁醇部位可明显抑制缺氧所致心肌细胞钙超载,抑制L-型钙通道和Ry R的表达。提示蕨麻正丁醇部位抑制心肌细胞内钙超载的作用可能与其抑制L型钙通道有关。

NMDA受体和IP3受体介导NMDA诱导的小脑颗粒神经元内Ca^(2+)超载

目的探讨N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)诱导的小脑颗粒神经元(CGNs)钙超载与NMDA受体(NMDAR)及细胞内钙库受体三磷酸肌醇受体(IP3R)和兰尼定受体(RyR)之间的关系。方法取出生后8 d SD大鼠小脑进行颗粒神经元体外培养。用NMDA(100μmol/L)急性损伤神经元,在激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)扫描开始前30 min,或扫描开始后4,9,14 min分别加入NMDAR、IP3R、RyR拮抗剂MK-801、2-APB和DAN,检测神经元内Ca2+浓度的动态变化。结果 MK-801预孵育神经元经NMDA急性刺激后,神经元内Ca2+的荧光强度不再升高,NMDA刺激后加入MK-801,上升的Ca2+水平立即下降,最终下降至基线水平;NMDA急性刺激2-APB预孵育神经元,神经元内Ca2+的荧光强度升高,但升高幅度明显低于未经NMDA刺激组,NMDA刺激后加入2-APB,细胞内升高的Ca2+水平急剧下降,最终下降至接近基线水平;DAN预孵育的神经元经NMDA急性刺激后,胞内Ca2+的荧光强度急剧升高,达到NMDA刺激组水平,NMDA刺激后加入DAN,神经元内Ca2+水平无明显下降。结论 NMDA诱导的神经元Ca2+超载,主要由细胞膜钙通道NMDAR和细胞内钙释放通道IP3R介导,而细胞内钙释放通道RyR不起主导作用。

新民猪RYR1和MC4R基因的多态性检测分析

为了调查兰尼定1型受体(RYR1)基因和黑素皮质素受体4(MC4R)基因[其目前公认的数量性状基因座(QTN)]在新组建的民猪群体内的分布情况,试验采用PCR-RFLP的方法,对黑龙江省农业科学院畜牧研究所收集整理的23头民猪的RYR1基因和MC4R基因进行检测,并与其他已报道的猪种进行比较。结果表明:RYR1基因的N等位基因频率为86.96%,n等位基因频率为13.04%;MC4R的A等位基因频率为76.19%,G等位基因频率为23.81%,与其他猪种相比,n等位基因频率偏高。