热诱导卵白蛋白-白藜芦醇共价复合物的结构、功能及潜在致敏性

目的研究热诱导卵白蛋白(heat stressed ovalbumin,HOVA)-白藜芦醇(resveratrol,RES)共价复合物的结构、功能及潜在致敏性。方法首先将卵白蛋白(ovalbumin,OVA)在323 K条件下加热15 min,然后在碱性条件下与RES反应制备HOVA-RES共价复合物,利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳测定HOVA-RES共价复合物的分子量,通过液相色谱-串联质谱法鉴定RES的结合位点,采用内源性荧光光谱、圆二色光谱、紫外吸收光谱解析RES引起的蛋白质构象变化,最后检测HOVA-RES共价复合物的抗氧化性、乳化性、热稳定性及潜在致敏性。结果碱性条件下HOVA与RES可以共价形式交联,结合位点为Lys187和Lys264。低比例RES复合时,HOVA螺旋结构增加,无规则卷曲减少,而高比例RES复合时,蛋白结构逐渐往无序方向发展。RES的共价修饰会影响蛋白质的功能特性,其中1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和2,2’-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐[2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)ammonium salt,ABTS]阳离子自由基清除率提升了约2倍,乳化活性由45.14 m^(2)/g增加到107.88 m^(2)/g,变性峰值温度上升了9.66℃。此外,随着RES复合比例的增加,HOVA-RES共价复合物的免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)结合能力呈现先下降后上升再下降的趋势,适量RES的共价复合能够显著降低OVA的潜在致敏性。结论HOVA-RES共价复合可以改变OVA的构象,改善其功能特性,并影响其潜在致敏性,这为OVA的开发利用提供了理论依据。

冷喷雾电离质谱法分析表征四逆汤中的酸碱非共价复合物

本研究采用冷喷雾电离质谱(CSI-MS)法表征四逆汤中7组酸碱化合物形成的非共价复合物。通过自行搭建的冷喷雾电离装置,以经液氮冷却的氮气作为离子源鞘气,为酸碱非共价复合物质谱分析提供低温电离条件。采用四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱采集一级全扫描和二级碰撞诱导解离模式下的质谱数据。结果表明,在正、负离子模式下,均可检测到7组酸碱化合物之间形成的非共价复合物。进一步使用等温滴定量热实验和计算化学方法分析代表性酸碱化合物间的非共价相互作用模式,验证了CSI-MS的实验结果。该方法可为探索四逆汤自沉淀的形成机制提供理论依据和技术参考。

谷胱甘肽与D型氨基酸非共价复合物的质谱

为了研究谷胱甘肽和D型氨基酸的非共价相互作用,将一定化学剂量比的还原型谷胱甘肽与D-苯丙氨酸、D-组氨酸或D-谷氨酰胺在室温下混合后,温育1h,使反应达到平衡.电喷雾质谱测量结果表明,在生理pH条件下,谷胱甘肽可以和D型氨基酸经反应生成非共价复合物.串级质谱中的碰撞诱导解离(CID)以及紫外光谱进一步确认了非共价复合物的生成.为了避免严重的离子化效率和质谱信号相互抑制作用,对谷胱甘肽和D-谷氨酰胺的相互作用作了定量的评估.配制一系列不同初始浓度的谷胱甘肽和D型氨基酸的混合溶液,并用电喷雾质谱测定混合溶液中不同质点的质谱峰强度,计算了谷胱甘肽与三个D型氨基酸结合形成的复合物的解离常数.计算结果表明,谷胱甘肽可以和D型氨基酸结合形成不同键合强度的非共价复合物,其稳定性按照D-谷氨酰胺、D-苯丙氨酸、D-组氨酸的次序逐渐增大.

蛋白质多糖共价复合物的研究进展

介绍蛋白质多糖共价复合物的形成及分析方法,探讨共价复合物形成的影响因素,复合物对蛋白质乳化特性,溶解性,热稳定性及抗菌性的影响。

电喷雾质谱法研究人参皂苷Rb_1和Rd与细胞色素c的非共价复合物

用质谱法研究了人参皂苷Rb1和Rd与细胞色素c的非共价相互作用,证明主-客体之间形成了多种化学计量比的复合物,用直接计算的方法得出人参皂苷Rb1和Rd与细胞色素c形成的非共价复合物的各级解离常数KD,用竞争体系验证了计算结果,二者结果相互吻合.

抗抑郁化合物SIPI5358与环糊精形成的非共价复合物

用电喷雾电离质谱(ESI-MS)和串级质谱(MS/MS),并结合紫外光谱、荧光光谱等方法,研究一种芳烷醇哌嗪类抗抑郁化合物SIPI5358与α-、β-、γ-环糊精(CD)制备得到的非共价复合物.质谱分析结果显示,SIPI5358分子可以和α-CD生成配合比为1∶1的非共价复合物,而与β-、γ-CD生成不同配合比的非共价复合物.串级质谱的结果进一步验证β-CD与SIPI5358非共价复合物的组成.用紫外光谱和荧光光谱实验对液相中非共价复合物的形成进行了辅助研究,结果均再次验证了非共价复合物的生成.荧光光谱实验测得SIPI5358与β-CD反应的生成常数Kf=3.45×103 mol.L-1.

电喷雾质谱法研究谷胱甘肽与L型芳香性氨基酸非共价复合物

为探索谷胱甘肽和L型芳香性氨基酸的非共价相互作用,将一定化学剂量比的还原型γ-谷胱甘肽分别与L型芳香性氨基酸(包括苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸)在室温和生理pH条件下混合后,温育1 h,生成非共价复合物,并使反应完全.电喷雾质谱测量结果揭示谷胱甘肽和L型芳香性氨基酸反应可以生成非共价复合物.在二级串级质谱MS2测得的复合物碎片离子峰中,除芳香性氨基酸离子峰外,还包括谷胱甘肽及其它再次碎裂产生的b2和y2碎片离子,进一步确认了非共价复合物的形成.紫外光谱也证实了电喷雾质谱的实验结果.为避免严重的离子化效率差异和质谱信号的相互抑制作用,定量评估了谷胱甘肽和酪氨酸的相互作用,结果显示反应物的初始浓度应该选择在5×10-5～3.00×10-4mol/L范围内.用质谱滴定法测定了谷胱甘肽与3个芳香性氨基酸非共价复合物的解离常数,结果表明,谷胱甘肽复合物的稳定性按Tyr,Trp和Phe次序依次增大.

美拉德反应制备蛋白质-多糖共价复合物的研究进展

蛋白质和碳水化合物通过美拉德反应形成糖基化产物,也称为共价复合物,可以改善蛋白质的功能特性。本文主要介绍了近年来通过美拉德反应制备蛋白质-多糖共价复合物的方法,共价复合物生成的主要影响因素,共价复合物结构与功能性质的分析方法及其应用。

液相体系制备大豆酸沉蛋白-葡聚糖共价复合物及其反应机制(Ⅰ)共价复合物的制备

作为一项新的有效的制备方法,对液相体系中发生Maillard反应的的各种影响因素进行系统研究,结果表明,80%乙醇体系中,反应体浓度为60%、50℃时反应6h以及95%乙醇体系中,反应体浓度为60%、60℃时反应24h条件下得到的产物表现出了优越的乳化活性。并采用SDS-PAGE技术证实蛋白与多糖之间发生共价结合反应。

大豆蛋白-海藻酸钠共价复合物制备条件的优化

以大豆分离蛋白和海藻酸钠为原料,干热法制备大豆蛋白-海藻酸钠共价复合物以改善大豆蛋白的乳化特性。单因素试验结果表明,反应温度、反应时间、海藻酸钠添加量均对制备的共价复合物的乳化性和乳化稳定性有显著影响(P<0.01)。在单因素试验的基础上,采用响应面法对大豆蛋白-海藻酸钠共价复合物制备条件进行优化。以乳化性为响应值,大豆蛋白-海藻酸钠共价复合物制备的最佳条件是:反应时间10.4 h,反应温度43.8℃,海藻酸钠添加量33.4%;以乳化稳定性为响应值,大豆蛋白-海藻酸钠共价复合物制备的最佳条件是:反应时间7.6 h,反应温度43.3℃,海藻酸钠添加量33.4%。

MALDI质谱检测蛋白质与富勒醇的非共价复合物

基质辅助激光解吸电离（ＭＡＬＤＩ）质谱由于受到酸性基质、样品制备、激光诱导聚合和基质加合物的形成等条件的限制而难以用于非共价复合物的检测．本文以芥子酸为基质，观察到蛋白质与富勒醇的特殊相互作用，一些质谱特征，如质量数迁移、宽的加合峰和定量结合比表明，在蛋白质和富勒醇之间形成了特殊的非共价复合物．其中，血红蛋白与富勒醇的结合比是１∶４，而肌红蛋白与富勒醇的结合比是１∶１．实验结果表明：富勒醇可用来保护血红蛋白，有在酸性介质中防止其分解的作用．因此，通过在基质组份中添加特性有机化合物保护被测样品。

阿司匹林-聚天冬酰胺共价复合物的合成方法改进

选用苯骈三氮唑使阿司匹林酰胺化，通过酰胺键与α，β－聚（３－羟烷基）－ＤＬ－天冬氨酸结合，成为阿司匹林－聚天冬酰胺共价复合物（ＡＳＡ－ＰＨＰＡ），反应条件温和，接入率稳定在４０％以上。

液相体系制备大豆酸沉蛋白-葡聚糖共价复合物及其反应机制(Ⅱ)反应机制的理论分析

采用凝胶过滤色谱和红外光谱(FT-IR)分析了反应前后蛋白与多糖Maillard反应产物分子结构特征,证实反应后SAPP与葡聚糖产生了共价结合;并通过凝胶渗透色谱(GPC)技术对干热反应后所得共价复合物的分子量分布进行分析,结果表明液相体系所得蛋白-多糖共价复合物与干热法所得产物的数均分子量和重均分子量非常相近。

β-环糊精与青蒿素类药物非共价复合物的电喷雾质谱研究

采用电喷雾飞行时间质谱(ESI-TOF-MS)技术,对β-环糊精与3种青蒿素类药物所形成的复合物进行研究,在正离子检测方式下,将β-环糊精与青蒿素类药物等体积比混合后直接进样,然后利用源内碰撞诱导解离(CID)技术对其复合物进行分析。实验表明,在气相中,该非共价复合物可以稳定存在,其化学计量比分别为1:1和2:1。运用该法测定了1:1包络物的结合常数,考察了质谱条件及溶液条件对形成包络物的影响,通过比较结合常数的大小,探讨了β-环糊精与青蒿素类药物在气相状态下的作用方式。

大豆蛋白—壳聚糖共价复合物制备研究

通过干热反应将壳寡糖引入大豆蛋白,形成大豆蛋白―壳寡糖共价复合物,采用响应面方法对大豆蛋白―壳寡糖制备条件进行优化,建立以乳化性及乳化稳定性为响应值回归方程。以乳化性为响应值时,优化结果为:反应时间10.4 h,反应温度41.2℃,壳聚糖添加量25.7%;以乳化稳定性为响应值时,优化结果为:反应时间9.6 h,反应温度38.3℃,壳聚糖添加量26.1%。

壳聚糖-大豆分离蛋白共价复合物改性天然乳胶的研究

通过可控干热法制备壳聚糖和大豆分离蛋白共价复合物,并将其与天然乳胶共混制成共混膜。壳聚糖和大豆分离蛋白共混液与共价复合物的粒径分布对比可以验证共价复合物的形成。通过对复合物改性天然乳胶膜的表面形貌、力学性能及蛋白质溢出量等性能进行测试,结果发现膜表面光滑度、平整度、致密性和力学性能均有所改善,蛋白质溢出量降低,作为医用薄膜材料具有广泛的应用前景。

乳清分离蛋白-甜菜果胶共价复合物理化特性分析

蛋白质-多糖通过Maillard反应生成共价复合物,其乳化稳定性等功能特性得到提高,为研究与开发新型食品添加剂提供了一条新的途径,但共价复合物的乳化稳定性提高机理尚不明确。本研究通过界面张力仪测定界面张力、红外光谱分析二级结构,并结合GPC-动态光散射法考察其分子量分布,初步探讨乳清分离蛋白(WPI)-甜菜果胶(BP)共价复合物乳化稳定提高原因。研究结果表明:WPI-BP共价复合物与混合物相比,界面张力降低;WPI-BP共价复合作用使得蛋白质分子中的羟基含量增加,亲水性增强;共价复合物的分子量增大,dn/dc降低,分子量分布更集中,提高其在乳状液界面上的空间位阻作用,从而提高其乳化稳定性。因此,界面张力降低、亲水性增强与空间位阻增大是WPI-BP共价复合物乳化稳定性提高的主要原因。

大豆蛋白—海藻酸钠共价复合物功能特性研究

将大豆蛋白加水溶解,添加33.4%海藻酸钠,混合均匀后冷冻干燥,干燥后粉状物在43.8℃条件下干热反应10.4 h,得到大豆蛋白―海藻酸钠共价复合物。对大豆蛋白―海藻酸钠共价复合物溶解性、乳化性、起泡性、热稳定性和抗氧化性等功能特性进行系统研究,结果表明,大豆蛋白―海藻酸钠共价复合物溶解性、乳化性和乳化稳定性、起泡性和泡沫稳定性、热稳定性较大豆蛋白均有不同程度改善。

谷胱甘肽与氨基酸非共价复合物的碎片化反应

为了探讨非共价复合物的碎片化反应机理,选择谷胱甘肽和氨基酸复合物研究影响碎片化反应的主要因素。串级质谱结果表明,碰撞气体密度(CGT)和碰撞能量是影响非共价复合物碎片化反应的两个主要因素,对谷胱甘肽复合物碎片化产物的生成途径会有明显的影响。当碰撞气体密度恒定在50×1013mole-cules/cm2,碰撞能量在小于100 eV范围内,复合物His-GSH都能发生碎裂,断裂位点容易发生在非共价键上,生成原来组分[His+H]+和[GSH+H]+离子,但没有发生进一步碎裂。当碰撞能量一定(恒定为30eV),碰撞气体密度为50×1013molecules/cm2时,His-GSH复合物碎裂后的产物同样为[His+H]+和[GSH+H]+。然而,当碰撞气体密度上升至75×1013molecules/cm2时,除非共价键发生碎裂外,共价键也会发生碎裂,产生更小的碎片离子y2,b2。当碰撞气体密度上升为175×1013molecules/cm2时,His也开始碎裂,生成m/z110[His-H2O-CO+H]+。三级串级质谱MS3实验确认,Lys-GSH复合物中谷胱甘肽碎裂后产生的y2碎片离子会进一步碎裂。