过敏性紫癜患儿外周血单个核细胞共刺激分子B7-1、B7-2与CD28的表达及意义

目的探讨免疫共刺激分子B7-1、B7-2和CD28在过敏性紫癜患儿外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及其意义。方法应用流式细胞仪(FCM)从蛋白质水平检测了38例过敏性紫癜(HSP)患儿(其中11例诊断为紫癜性肾炎)和20例正常儿童PBMC中B7-1、B7-2和CD28的表达,并分析其与24 h尿微量白蛋白的关系。结果过敏性紫癜患儿B7-2蛋白和CD28蛋白的表达水平(相对平均荧光强度,RMFI)均高于正常对照组(P<0.05),各组间B7-1蛋白表达水平的差别无显著性意义(P>0.05)。18例24 h尿微量白蛋白(24h UMA)增高的HSP患儿共刺激分子B7-2、CD28蛋白的表达与24 h UMA呈等级正相关。结论过敏性紫癜患儿PBMC共刺激分子B7-2、CD28表达异常增加,可能参与HSP的起病,而且B7-2、CD28蛋白的表达与24 h尿微量白蛋白呈等级正相关,提示可以作为监测HSP患儿病情以及检测早期肾脏损害的免疫学指标。

慢性乙型肝炎病毒感染不同免疫状态正负共刺激分子表达的研究

目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者不同免疫状态下正负共刺激分子表达的意义。方法用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法研究30例免疫清除期患者、10例免疫耐受期患者和10例健康对照者外周血单个核细胞B7-2及程序性死亡配体-1(PD-L1)mRNA的表达水平。结果免疫清除期和免疫耐受期患者B7-2的表达水平明显低于健康对照组(P均<0.01);免疫清除期患者B7-2的表达水平明显低于免疫耐受期患者(P<0.01)。免疫清除期和免疫耐受期患者PD-L1的表达水平和PD-L1/B7-2比值均明显高于健康对照组(P均<0.01);免疫清除期和免疫耐受期患者PD-L1的表达水平差异无统计学意义(P>0.05),免疫清除期患者PD-L1/B7-2比值明显高于免疫耐受期患者(P<0.01)。结论在慢性乙型肝炎的发病中,正、负共刺激分子的变化可能是机体对免疫反应的保护性调节的结果,最终可能使机体对HBV的免疫耐受加深。

B7-1和B7-2基因转染神经母细胞瘤细胞免疫原性的研究

目的比较免疫共刺激信号B7-1和B7-2以腺病毒为载体转染神经母细胞瘤(NB)SH-SY5Y细胞株,观察其对肿瘤细胞免疫原性的影响。方法以携带绿色荧光蛋白的腺病毒质粒(Ad-GFP)转染SH—SYSY细胞,通过流式细胞仪(FCM)判断转染效率,确定合适的感染倍数(MOI)。分别以空病毒质粒(Ad)及携带B7-1或B7-2的腺病毒质粒转染SH-SYSY细胞,即对照组和B7-1或B7-2组;并以未转染的肿瘤细胞为空白对照(空白组)。采用流式细胞仪(FCM)检测B7-1分子和B7-2蛋白表达,Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化外周血单个核细胞,分别以效靶比5∶1和10∶1进行混合淋巴细胞培养后,测定放射性核素闪烁计数(cpm)/min,同时检测上清液中细胞因子IFN-γ及IL-2的分泌水平。结果腺病毒对SH-SY5Y细胞有较高的转染效率,转染后目的基因B7-1和B7-2得到了有效表达。B7-1组、B7-2组cpm值及上清液IFN-γ、IL-2水平明显高于Ad组、SH组(P<0.01);B7-1组与B7-2组比较,cpm值及细胞因子水平增高无明显差别(P>0.05)。效靶比5∶1时,与10∶1相比,cpm值及IFN-γ、IL-2含量的增加更明显(P<0.05)。结论 B7-1和B7-2分子可促进T淋巴细胞的增殖及活化T细胞分泌IFN-γ、IL-2,而B7-1与B7-2两组间cpm值及细胞因子水平无明显差别。