新型共刺激分子B7-H4表达抑制对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨新型共刺激分子B7-H4表达抑制对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法从人肝癌细胞系Hep3B,SMMC-7721,Huh-7,PLC/PRF/5,Hep G2,HCCLM3中筛选高表达B7-H4的细胞。培养高表达B7-H4的人肝癌细胞,将所培养的细胞随机分为三组:对照组、shRNA-1组、shRNA-2组。shRNA-1组、shRNA-2组分别转染对应的B7-H4慢病毒抑制基因序列,对照组加转染试剂但不予干扰序列。采用Western blotting法检测B7-H4表达量,挑选出shRNA-2组HCCLM3肝癌细胞进行下一步实验。分别于转染1、2、3、4、5 d,CCK-8法检测肝癌细胞增殖情况;转染后72 h,流式细胞术检测肝癌细胞凋亡率。结果 6个细胞株中,HCCLM3的B7-H4相对表达量最高,为高表达B7-H4细胞株。shRNA-1组、shRNA-2组B7-H4被抑制,且shRNA-2组抑制更明显。与对照组同时间比较,除转染1 d细胞增殖活性差异无统计学意义外,shRNA-2组HCCLM3细胞增殖活性降低(P均<0.05);细胞凋亡率升高(P均<0.05)。结论抑制B7-H4表达可明显抑制人肝癌细胞的增殖活性,并促使其凋亡。

协同共刺激分子B7-H4参与肿瘤免疫逃逸的研究进展

近年来恶性肿瘤的治疗方法虽然取得了较大进展,但5年生存率仍不理想,寻找新的治疗策略和有效的治疗靶点显得尤为迫切。B7家族是近年来研究较广泛的共刺激分子,其中B7-H4是新近发现的B7家族新成员,对T淋巴细胞介导的免疫应答起重要的负性调节作用。

膀胱癌来源外泌体携带程序性死亡配体1和共刺激分子B7-H4的表达及初步鉴定

目的提取并鉴定膀胱癌BIU-87和T24细胞来源的外泌体,检测膀胱癌细胞来源外泌体中程序性死亡配体1(PD-L1)和共刺激分子B7-H4的表达,验证膀胱肿瘤通过外泌体在微环境中传递PD-L1和B7-H4。方法体外培养膀胱尿路上皮癌BIU-87和T24细胞,超速离心法提取细胞上清液中外泌体,透射电子显微镜(TEM)观察外泌体大小及形态,BCA蛋白定量法测定外泌体蛋白浓度,蛋白质印迹法(WB)鉴定两种膀胱癌细胞的外泌体标志蛋白CD63和CD9,检测膀胱癌细胞来源外泌体PD-L1(exo-PD-L1)和外泌体B7-H4(exo-B7-H4)的表达。最后,将膀胱癌细胞外泌体分别与膀胱正常上皮SV-HUC-1细胞共培养48h后,RT-PCR和WB分别检测SV-HUC-1细胞中PD-L1和B7-H4的mRNA和蛋白的表达情况。结果 BIU-87和T24细胞上清外泌体总蛋白浓度分别为1.88μg/μL和1.84μg/μL,总质量分别为169μg和166μg。TEM观察外泌体直径为30~150nm的膜性囊泡,呈典型的"杯盘"形态。两种膀胱癌细胞上清液均检测出外泌体标志蛋白CD63及CD9。且两种膀胱癌细胞来源的外泌体中均携带PD-L1和B7-H4。当膀胱癌BIU-87和T24细胞来源的外泌体分别与SV-HUC-1细胞共培养后,后者PD-L1和B7-H4的mRNA表达阴性,两者蛋白表达阳性。结论成功提取并鉴定了膀胱癌BIU-87和T24细胞来源的外泌体均携带PD-L1和B7-H4,且膀胱癌细胞释放的外泌体能在肿瘤微环境中传递PD-L1和B7-H4,可开展后续膀胱癌来源exo-PD-L1和exo-B7-H4的生物学功能研究。

协同共刺激分子B7-H4在妇科恶性肿瘤中的研究进展

随着恶性肿瘤检出率不断上升,妇科恶性肿瘤发生率也逐年增加,缺乏早期有效的筛查手段和诊断以预防肿瘤的发生是妇科恶性肿瘤死亡的重要原因。恶性肿瘤的发生发展是一个涉及多基因的细胞增殖和凋亡的平衡过程。B7-H4与恶性肿瘤生长有关,其在常见妇科恶性肿瘤的发生、发展、浸润、转移、分化以及肿瘤血管形成等生物学行为中发挥重要作用。进一步研究B7-H4的生理信号通路及其在妇科恶性肿瘤中的表达,可能对患者的临床诊疗、预后判断及复诊评估具有指导作用。

协同共刺激分子B7-H4与母胎免疫

B7-H4是B7家族中的一种负性调节分子,于2003年首次被发现。B7-H4使人们对细胞层面的免疫应答和免疫耐受的相关机制有了进一步的了解和发现。B7-H4主要表达在巨噬细胞、成熟的树突状细胞、某些肿瘤细胞以及活化的T淋巴细胞表面,可以负性调控免疫细胞的增殖以及相关细胞因子的产生等,在介导母胎免疫应答过程中发挥重要作用。母胎界面中免疫细胞表面表达的B7-H4可能参与了妊娠的维持和发展。

早期胃癌患者血清TK1、STAT1、sB7-H4水平变化及对内镜黏膜下剥离术预后的预测价值

目的 探究早期胃癌患者血清胸苷激酶1(TK1)、信号转导和转录活化因子1(STAT1)、可溶性B7-H4(sB7-H4)水平变化,并分析其对内镜黏膜下剥离术(ESD)预后的预测价值。方法 前瞻性选取2019年1月至2022年7月郑州大学第一附属医院300例接受ESD手术的早期胃癌患者,检测围手术期(术前、术后3 d、术后7 d)血清TK1、STAT1、sB7-H4水平,术后接受为期1 a随访,根据有无复发分为复发组(22例)与未复发组(278例)。比较两组患者的临床资料及血清TK1、STAT1、sB7-H4水平。评价血清TK1、STAT1、B7-H4水平预测早期胃癌患者ESD术后复发的价值。结果 所有患者术后7 d血清TK1、sB7-H4水平<术后3 d<术前(P<0.05),所有患者术后7 d血清STAT1水平>术后3 d>术前(P<0.05)。复发组术后3、7 d的血清TK1、sB7-H4水平均高于未复发组,STAT1水平均低于未复发组(P<0.05)。术后3、7 d血清TK1、sB7-H4、STAT1联合预测复发的曲线下面积(AUC)分别为0.901、0.944,均大于各时间点三项血清指标单独预测,且术后7 d预测价值更高,此时最佳敏感度、特异度分别为90.91%、86.33%。结论 血清TK1、sB7-H4、STAT1水平变化与早期胃癌患者ESD术后复发密切相关,且在临床早期预测患者术后复发方面具有较高预测效能。

负性共刺激分子B7-H3和B7-H4在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的:分析负性共刺激分子B7-H3和B7-H4在子宫内膜癌中的表达及临床意义。方法:将实施子宫切除术的198份石蜡包埋的子宫内膜病变标本纳入研究,其中经病理学确诊为子宫内膜癌的有89份,增生期子宫内膜标本为109份。所有子宫内膜病变标本以免疫组织化学染色法检测B7-H3、B7-H4表达情况,比较子宫内膜癌与增生期子宫内膜患者B7-H3、B7-H4阳性表达率,并分析子宫内膜癌B7-H3、B7-H4阳性表达率与临床病理特征之间的关系。结果:子宫内膜癌标本B7-H3阳性表达率与B7-H4阳性表达率高于增生期子宫内膜标本(P<0.05)。子宫内膜癌患者B7-H3阳性表达与其年龄(≥60岁)、淋巴结转移、肌层浸润深度(>1/2)、组织学类型、组织学病理分级无明显相关性(P>0.05),而B7-H3阳性表达与其临床分期存在相关性(P<0.05);子宫内膜癌患者B7-H4阳性表达与其年龄(≥60岁)、肌层浸润深度(>1/2)、组织学病理分级、临床分期无明显相关性(P>0.05),而B7-H4阳性表达与其淋巴结转移、组织学类型存在相关性(P<0.05)。结论:负性共刺激分子B7-H3、B7-H4表达与子宫内膜癌的发生密切相关,且B7-H3表达与子宫内膜癌临床分期有着一定关联,而B7-H4阳性表达与子宫内膜癌淋巴结转移、组织学类型存在相关性,B7-H3、B7-H4可为临床评估子宫内膜癌进展提供一定的依据。

共刺激分子B7-H4在胃癌组织中表达及其与预后的关系

目的探讨共刺激分子B7-H4在胃癌组织中的表达与预后的关系。方法应用免疫组织化学染色，检测156例胃癌患者手术标本中B7-H4的表达；应用生物技术，体外诱导自体细胞因子激活的杀伤细胞（CIK）进行免疫治疗胃癌。结果B7-H4在胃癌组织中阳性表达率为44．9％；单因素分析显示，B7-H4的表达与性别、年龄、组织学类型、病理分级、肿瘤大小等均无明显相关；但浸润深度和淋巴结转移与B7-H4阳性表达显著关联，侵入肌层组的B7-H4阳性率高于未侵入组（49．1％比16．7％），差异有统计学意义（X^2=8．467，P=0．01），淋巴结转移组B7-H4阳性率高于未转移组（X^2=17．339，P〈0．01）。与B7-H4高表达组比较，B7-H4低表达组胃癌患者中位生存时间显著延长13个月，差异有统计学意义（，=12．38，P〈0．01）。多因素COX模型分析显示，与B7-H4低表达组比较，B7-H4高表达组胃癌患者的死亡风险明显增加（RR=1．85，95％CI=1．15～2．96）；CIK治疗组与化疗组比较，CIK治疗组胃癌患者的死亡风险明显降低（RR=0．53，95％CI=0．33—0．85）。结论B7．H4的高表达与胃癌患者的生存时间成负相关，证实了B7-H4为一负性调节分子，可作为判断胃癌生存期的指标；CIK细胞治疗可以显著延长胃癌患者的生存期。

共刺激分子B7-H1、B7-H3和B7-H4在血液系统恶性肿瘤细胞株中的表达水平和分布特征

目的:探讨3种共刺激分子B7-H1、B7-H3和B7-H4在人类血液系统恶性肿瘤细胞株中的表达及分布特征。方法:分别采用RT-PCR、q PCR、Western blot和流式细胞术检测13株血液肿瘤细胞中B7-H1、B7-H3和B7-H4的表达及亚细胞定位情况,设12例志愿者外周血单个核细胞(PB MNC)为对照。结果:3种共刺激分子的mRNA在12例志愿者PB MNC和13株血液肿瘤细胞中广泛表达,其中B7-H4表达水平相对偏低;3种共刺激分子分别在Maver、Z138和HL-60中表达最高,B7-H3和B7-H4在CZ1中不表达。3种共刺激分子的胞核及胞浆蛋白仅在恶性血液肿瘤细胞中异常高表达,分别在U937、Z138和Raji细胞中表达最高,B7-H3和B7-H4在CZ1细胞中不表达。在同一肿瘤来源的细胞株中,3种共刺激分子的mRNA和胞核及胞浆蛋白表达均存在差异,且差异不全一致。B7-H3膜蛋白在U937、M aver和Z138中表达丰度较高;B7-H1和B7-H4的膜蛋白在13株细胞中呈不表达或低表达。结论:共刺激分子B7-H1、B7-H3和B7-H4在mRNA水平均广泛表达,但蛋白水平仅在血液肿瘤细胞中异常高表达,且亚细胞定位多在胞核及胞浆,膜蛋白水平普遍低表达或不表达。同一肿瘤来源的细胞株中3种共刺激分子的表达可存在差异。

共刺激分子B7-H4和程序性死亡配体1在膀胱尿路上皮癌组织中的表达及临床意义

目的检测共刺激分子B7-H4和程序性死亡配体1(PD-L1)在膀胱尿路上皮癌组织中的表达,探讨两者与膀胱尿路上皮癌临床病理特征的相关性。方法2016年1月至2018年4月采用免疫组化染色法检测我院98例膀胱尿路上皮癌患者手术标本中B7-H4和PD—L1的表达情况,以其中42例癌旁正常膀胱组织为对照。98例中男75例,女23例;年龄45~82岁,平均67.8岁;非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)64例,肌层浸润性膀胱癌(MIBC)34例;低级别68例,高级别30例;初发患者70例,复发患者28例。NMIBC危险度分级低-中危29例,高危35例。比较B7-H4和PD-L1在膀胱尿路上皮癌与正常膀胱组织中的表达差异,分析B7-H4和PD-L1与膀胱尿路上皮癌临床分期、组织学分级、复发等临床指标的关系,并分析两者在膀胱尿路上皮癌中表达的相关性。结果B7-H4和PD—L1在膀胱尿路上皮癌中表达的阳性率分别为54.1%(53/98)和59.2%(58/98),癌旁正常膀胱组织中均无表达,差异有统计学意义(均P<0.05)。B7-H4在MIBC患者表达的阳性率高于NMIBC[73.5%(25/34)与43.8%(28/64),P=0.005];高级别肿瘤B7-H4的阳性率高于低级别[70.0%(21/30)与47.1%(32/68),P=0.036];高危患者B7-H4的阳性率高于低-中危患者[57.1%(20/35)与27.6%(8/29),P=0.018]。PD.L1在MIBC患者的阳性率高于NMIBC[79.4%(27/34)与48.4%(31/64),P=0.003];虽然高级别肿瘤的阳性率高于低级别[73.3%(22/30)与52.9%(36/68)],但差异无统计学意义(P=0.058);高危患者PD—L1的阳性率亦高于低-中危患者[68.6%(24/35)与24.1%(7/29),P<0.05]。B7-H4与PD—L1在膀胱尿路上皮癌中表达呈正相关性(r=0.318,P=0.002),二者联合表达较二者均阴性表达的患者术后复发率明显升高[66.7%(14/21)与30.8%(8/26),P=0.014]。结论B7-H4和PD—L1在膀胱尿路上皮癌中表达上调,与膀胱尿路上皮癌的临床分期、组织学分级、NMIBC的危险度分级和复发密切相关。

原发性胆汁性肝硬化患者共刺激分子B7-H4的检测及临床意义

目的探讨原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis，PBC）患者共刺激因子B7-H4的表达及其与疾病发病机制的关系。方法分别采用荧光实时定量PCR法（real-time PCR）、酶联免疫吸附试验（ELISA）及流式细胞术（FCM）检测65名PBC患者外周血单个核细胞（PBMC）B7-H4 mRNA表达水平、血清IL-2水平以及CD4^＋、CD8^＋T细胞亚群和T细胞表面B7-H4表达百分率，同时监测抗线粒体抗体（anti-mitochondrial antibody，AMA）及临床各项生化指标的关系。结果（1）PBC患者PBMC B7-H4 mRNA水平及T细胞表面B7-H4表达百分率显著低于非PBC肝硬化组及健康对照组（P〈0．01）。（2）活化72h后各实验组及对照组IL-2含量及CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋CD8^＋T淋巴细胞表达水平均低于活化前，以非PBC肝硬化组与健康对照组降低显著（P〈0．05）；PBC组IL-2含量及CD4^＋、CD4^＋CD8^＋T淋巴细胞表达水平高于非PBC肝硬化组与健康对照组（P〈0．01）。（3）AMA-M2阳性患者血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）及γ-谷氨酰转肽酶（GGT）水平升高，其中ALP及GGT升高显著（P〈0．05）；AMA—M2阳性患者与阴性患者T细胞表面B7-H4表达百分率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论共刺激因子B7-H4对PBC患者体内T细胞活化增殖及细胞因子分泌的抑制作用减弱，为研究PBC的发生发展和阐明PBC的发病机制提供了试验资料。

共刺激分子B7-H4在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨宫颈癌组织中B7-H4的表达水平及临床意义。方法选取哈尔滨医科大学附属第一医院2010~2012年因子宫肌瘤行子宫全切的正常宫颈组织30例,宫颈活检及LEEP刀治疗的宫颈上皮内瘤变组织30例及宫颈癌患者的宫颈癌组织40例,采用PV-二步法免疫组织化学方法检测新型共刺激分子B7-H4在各组中的表达情况。结果B7-H4在宫颈癌组织中较宫颈上皮内瘤变组织中和正常宫颈组织中表达的阳性率高,差异有统计学意义(P<0.05);在宫颈上皮内瘤变组织中与正常宫颈组织中表达阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。B7-H4的阳性表达率随着宫颈癌患者病理分级的升高,淋巴结转移,呈增高趋势,但与患者年龄无关。结论B7-H4参与了宫颈癌的发生发展,有望成为宫颈癌新的诊断及治疗指标。

乳腺癌组织中免疫共刺激分子B7-H1与受体酪氨酸激酶EphA4蛋白的表达及意义

目的探讨乳腺癌组织中免疫共刺激分子B7-H1与受体酪氨酸激酶Eph A4蛋白的表达及意义。方法 82例病理诊断为乳腺癌患者,乳腺癌TNM分期Ⅰ期23例、Ⅱ期38例、Ⅲ期15例、Ⅳ期6例,分析B7-H1、Eph A4蛋白与乳腺癌TNM分期的相关性。以同期良性乳腺病变55例患者为对照,观察B7-H1、Eph A4蛋白的阳性率。结果与乳腺良性病变患者相比,乳腺癌患者B7-H1阳性率高(P<0.05)、Eph A4蛋白阳性率低(P<0.05)。Spearman分析发现B7-H1与TNM分期呈正相关(r=0.4682,P<0.05),Eph A4蛋白与TNM分期呈负相关(r=-0.3402,P<0.05)。结论 B7-H1促进肿瘤细胞免疫逃逸、Eph A4蛋白抑制癌细胞活化增殖能力降低,均参与了乳腺癌病理发展,均可作为乳腺癌诊断和治疗的潜在靶点。

共刺激分子B7-H4与自身免疫病

T细胞激活需要两种信号途径：一种是通过T细胞表面受体（TCR）-人类主要组织相容性复合体（MHC）-肽复合物特异性抗原信号，第二种是通过抗原提呈细胞（APC）表面分子提供的共刺激信号。

类风湿性关节炎患者的免疫分子sB7-H3表达变化及临床意义分析

目的探讨类风湿性关节炎(RA)患者的血清可溶性B7-H3(sB7-H3)表达变化及临床意义。方法选择78例RA患者作为RA组,选择同期体检的50例健康人员作为对照组。检测两组血清sB7-H3、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平。比较RA组与对照组血清sB7-H3、TNF-α、IL-6水平;比较RA组中不同Steinbrocker影像学分级及不同RA活动度患者血清s B7-H3、TNF-α、IL-6水平,分析RA患者血清s B7-H3与TNF-α、IL-6水平的相关性。结果RA组患者血清s B7-H3、TNF-α、IL-6水平分别为(23.76±3.65)ng/ml、(41.86±11.74)pg/ml、(19.68±10.55)ng/ml,均明显高于对照组的(15.47±2.04)ng/ml、(19.72±6.61)pg/ml、(3.65±1.82)ng/ml(P<0.05)。随着Steinbrocker影像学分级的升高,RA患者血清sB7-H3、TNF-α、IL-6水平逐渐升高,不同Steinbrocker影像学分级患者血清sB7-H3、TNF-α、IL-6水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。随着疾病活动程度的升高,RA患者血清sB7-H3、TNF-α、IL-6水平逐渐升高,RA组中不同疾病活动程度患者血清sB7-H3、TNF-α、IL-6水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。直线相关分析显示,RA患者血清sB7-H3水平与血清TNF-α、IL-6水平呈正相关性(r=0.658、0.517,P=0.000、0.000<0.05)。结论RA患者存在血清s B7-H3表达明显升高,并与疾病的活动程度密切相关,可作为RA治疗的预后评估的标志物及潜在靶点。

血清人附睾蛋白4和共刺激分子B7-H3水平对宫颈癌术后患者预后的评估价值

目的:分析血清人附睾蛋白4(HE4)、共刺激分子B7-H3(B7-H3)水平对宫颈癌术后患者预后的评估价值。方法:选取行腹腔镜宫颈癌根治术患者300例为宫颈癌组,280例宫颈上皮内瘤变患者为良性组,选择同期体检健康女性280例为对照组;观察宫颈癌组、良性组术后非月经期、对照组在非月经期间体检时的血清HE4、B7-H3水平,分析不同临床特征宫颈癌术后患者(年龄、月经状态、肿瘤直径、病理类型、FIGO分期、分化程度、淋巴结转移及浸润深度)的HE4、B7-H3水平;宫颈癌术后患者随访5年,分析生存状况、比较死亡与存活患者血清HE4、B7-H3表达水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分析HE4、B7-H3单独或联合检测对宫颈癌术后患者预后的评估价值。结果:宫颈癌组和良性组患者血清HE4、B7-H3水平高于对照组(P<0.05),宫颈癌组HE4、B7-H3表达水平高于良性组(P<0.05);不同FIGO临床分期、淋巴结转移、肿瘤分化程度的宫颈癌术后患者血清HE4、B7-H3表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);300例宫颈癌术后患者持续随访5年,死亡率42.67%(128/300),存活率57.33%(172/300),死亡组血清HE4、B7-H3水平高于存活组(P<0.05);HE4、B7-H3单一指标检测对宫颈癌术后患者预后的评估价值低于2项指标联合检测。结论:血清HE4联合B7-H3检测可有效提高宫颈癌术后患者预后评估的灵敏度与准确度。

共刺激分子PD-L1、PD-L2和B7-H4在宫颈癌的表达及临床病理特征分析

目的研究共刺激分子PD-L1、PD-L2、B7-H4在不同恶性程度宫颈上皮组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法选择我院2005-2010年间确诊为宫颈癌的85例及宫颈上皮内瘤变(CINⅡ-Ⅲ)22例为实验组,选取15例正常宫颈上皮组织作为对照组,对手术切除组织采用免疫组化SP法(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法)检测PD-L1、PD-L2和B7-H4的表达,统计其染色得分;并分析此三种共刺激分子的表达与子宫颈患者临床病理特征的关系。结果 PD-L1、B7-H4几乎不在正常宫颈上皮中表达,上皮细胞瘤变(CINⅡ-Ⅲ)的PD-L2和B7-H4明显高于对照组(P<0.05,P<0.01)。在宫颈癌组织中,PD-L1、PD-L2、B7-H4均明显较对照组及上皮细胞瘤变的宫颈上皮中高(P<0.01)。肿瘤浸润深度>10mm的患者组织的PD-L1明显高于浸润深度≤10mm的PD-L1表达(P<0.01);而发生了淋巴转移的宫颈癌的PD-L2和B7-H4要高于没有发生淋巴转移的(P<0.01);局部癌栓、血栓发生患者的的B7-H4要高于癌栓、血栓发生阴性的B7-H4(P<0.01)。结论人子宫颈癌细胞异常高表达PD-L1、PD-L2、B7-H4,且其高表达与肿瘤的淋巴转移及侵袭力有关。

负性协同刺激分子B7-H4在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨负性协同刺激分子B7-H4在原发性非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其与NSCLC临床病理特征间的关系。方法:选取南通大学第三附属医院胸外科2008年1月至2009年4月手术切除并经病理证实的NSCLC标本52例。免疫组织化学法检测NSCLC组织中B7-H4分子的表达及CD3+T细胞浸润程度,分析B7-H4表达水平与NSCLC组织中CD3+T细胞浸润、临床病理特征间的关系。结果:52例NSCLC组织中B7-H4表达阳性率为48.08%(25/52),正常肺组织不表达或较少表达B7-H4,差异具有统计学意义(P<0.05)。B7-H4表达水平与NSCLC临床分期和淋巴结转移呈正相关(P<0.05),与CD3+T淋巴细胞浸润程度呈负相关(P<0.05),与其他临床病理参数无关(P>0.05)。结论:负性协同刺激分子B7-H4在NSCLC发病过程中可能起重要的作用,其阳性表达与NSCLC临床分期及淋巴结转移密切相关,B7-H4为NSCLC的诊断及治疗提供参考依据。

共刺激分子配体B7-H1基因真核表达载体和转基因细胞的构建

以PHA刺激的小鼠外周血单核细胞中抽提的总RNA为模板,通过RT-PCR技术,扩增出B 7-H 1基因。按常规方法克隆进pEF 6V 5H is A载体,重组质粒经鉴定后采用脂质体法转染CHO细胞,48 h后进行间接免疫荧光试验,72 h后用B lastic id in进行筛选,挑选出能稳定表达B 7-H 1的细胞株。结果表明:成功地克隆小鼠B 7-H 1基因并构建了用于表达B 7-H 1基因的真核表达载体,经间接免疫荧光试验证明,该基因在CHO细胞中得到表达。经W estern-b lotting检测表明筛选出的转基因细胞稳定表达了B 7-H 1基因。

共刺激分子CD28:CTLA4/B7在实验性自身免疫性重症肌无力中的作用

目的研究共刺激分子CD28：CTLA4/B7在实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）发病中的作用。方法将雌性Lewis鼠随机分为EAMG组和对照组;EAMG组采用人工合成的Rα97-116肽段3次法免疫Lewis鼠,对照组同期注入等量的PBS;3次免疫接种后采用流式细胞术检测CD28、B7-2、B7-1、CTLA4在外周血、淋巴细胞、单核细胞中的表达。结果EAMG组大鼠成模率75%;与对照组比较,外周血CD28、B7-2B7-1、CTLA4的表达明显增加（P〈0.05-0.01）;EAMG组大鼠外周血CD28、CTLA4主要在淋巴细胞表达及B7-1、B7-2在淋巴细胞、单核细胞表达显著增加（P〈0.05-0.01）。结论EAMG大鼠存在共刺激分子CD28：CTLA4/B7表达异常,共刺激分子CD28：CTLA4/B7可能参与了EAMG的发生、发展。