原发性肾病综合征患者外周血共刺激分子CD28的表达及其临床意义

目的研究原发性肾病综合征(PNS)患者外周血共刺激分子CD28的表达变化特点,以及这种变化与激素敏感性的关系,探讨其在PNS免疫发病机制中的作用。方法采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析方法,对32例PNS患者外周血T细胞亚群和共刺激分子CD28的表达进行研究。结果(1)肾病综合征发作组(包括激素有效组和无效组)共刺激分子CD28表达明显低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.001),并且CD4+CD28+T细胞和CD8+CD28+T细胞均明显低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)激素有效组尿蛋白转阴后CD28分子水平明显上升,且CD4+CD28+T细胞和CD8+CD28+T细胞均较治疗前明显上升,差异有统计学意义(P<0.01);而激素无效组上述三个指标在激素治疗前后的变化无统计学意义(P>0.05)。(3)不完全缓解组和持续缓解组CD28+T细胞、CD4+CD28+T细胞和CD8+CD28+T细胞均恢复至正常对照组水平。(4)首发和复发患者之间共刺激分子CD28、CD4+CD28+T细胞和CD8+CD28+T细胞之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论PNS患者外周血T细胞活化所必需的共刺激分子CD28异常表达可能在PNS发生和病变进展中起着重要作用;糖皮质激素可使PNS患者外周血CD28异常表达被逐渐纠正,可能是其治疗肾病综合征的机制之一。

尖锐湿疣患者外周血单一核细胞共刺激分子CD28,CD40的检测

目的探讨免疫共刺激分子CD28/CD152-CD80/CD86,CD40-CD40L在尖锐湿疣患者外周血单一核细胞(PBMC)中的表达情况。方法采用流式细胞仪(FCM)检测60例CA患者(初发组30例、复发组30例)和30例健康对照者外周血CD28,CD152,CD40L在CD4+,CD8+T细胞上CD80,CD86,CD40在CD19+B细胞上的表达水平。结果CA患者CD28,CD40L在CD4+,CD8+T细胞的表达,与对照组(42.36%,13.85%,5.08%,2.58%)相比,复发组(37.10,11.66%,2.57%,1.25%)较初发组(39.69%,12.76%,3.93%,1.96%)明显降低(P<0.01);CD80,CD86,CD40在CD19+B细胞上的表达与对照组(1.59%,3.83%,14.25%)相比,复发组(0.65%,3.05%,10.24%)较初发组(1.04%,3.45%,12.21%)显著降低(P<0.01),而CD152在CD4+,CD8+T细胞上的表达与对照组(1.71%,9.62%)相比,复发组(39.2%,12.15%)较初发组(2.64%,10.90%)显著增高(P<0.01)。结论尖锐湿疣患者外周血淋巴细胞CD28/CD152-CD80/CD86,CD40-CD40L共刺激分子的异常表达可能与其免疫功能紊乱及复发机制有一定关系。

小干扰RNA特异性抑制淋巴细胞共刺激分子CD28基因表达的研究

目的 :为了探讨体外转录法合成的小干扰RNA(smallinterferingRNA ,siRNA)对人淋巴细胞共刺激分子CD2 8基因表达和功能的影响。方法 :设计并合成 3条siRNA(siRNA 1、siRNA 2、siRNA 3) ,在阳离子脂质体的介导下转染淋巴细胞。于转染后 2 4、4 8、72小时收集细胞 ,用半定量RT PCR方法检测CD2 8mRNA的变化 ;流式细胞仪检测CD2 8表达的变化。结果 :体外合成的 3条siRNA通过脂质体转染淋巴细胞后 ,均能不同程度地抑制共刺激分子CD2 8的表达。转染后 4 8小时的流式细胞仪检测显示siRNA 1、siRNA 2和siRNA 3组的CD2 8表达抑制率分别为 2 2 10 %± 1 6 3%、73 5 0 %± 1 0 2 %和 4 2 90 %± 0 89% ,以siRNA 2的CD2 8抑制作用最强。半定量RT PCR检测显示siRNA 1、siRNA 2、siRNA 3转染后淋巴细胞的CD2 8mRNA均受到不同程度的抑制 ,其中siRNA 2组的抑制作用最明显 (74 10 %± 1 6 5 % )。结论 :siRNA可特异性抑制淋巴细胞共刺激分子CD2 8基因的转录和表达 ,从而为进一步研究siRNA在移植免疫耐受及防治GVHD方面的应用提供了理论和实验基础。

B7:CD28/CTLA-4共刺激分子及其在眼科的研究进展

大量实验证实B7家族分子与其受体CD2 8和CTLA 4结合后所产生的共刺激信号在T淋巴细胞激活中起重要作用 ,决定着受到抗原刺激的T细胞是分化、增殖为效应细胞 ,还是进入无反应状态。其在眼科的研究主要集中于眼科自身免疫性疾病、角膜和视网膜三个方面 ,阻断B7:CD2 8/CTLA 4通路可能为眼科自身免疫性疾病、角膜移植排斥反应和视网膜葡萄膜疾病的治疗提供新的途径。本文就其分子特性、功能及其在眼科的研究进展等方面的有关资料作一综述。

IRP患者骨髓单个核细胞中CD28/B7家族共刺激分子mRNA表达研究

目的 研究免疫相关性全血细胞减少症(IRP)患者骨髓单个核细胞中CD28/B7家族共刺激分子mRNA表达情况,探讨CD28/B7家族共刺激分子在IRP发病机制中的作用.方法 采用骨髓单个核细胞分离及 RNA 提取等方法,用荧光定量PCR技术检测CD28/B7家族共刺激分子中 细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)、CD28、CD80、CD86mRNA表达量,统计和分析IRP疾病组和缺铁性贫血(IDA)对照组间CD28/B7家族共刺激分子mRNA表达差异.结果 IRP和IDA 骨髓单个核细胞中CD28/B7家族共刺激分子mRNA的表达有差异,其中IRP 患者骨髓单个核细胞中的CTLA-4mRNA 表达量较IDA组明显减低(P<0.01);CD28mRNA、CD80mRNA、CD86mRNA 表达量减低但差异无统计学意义(P>0.05).结论 IRP患者骨髓单个核细胞中CD28/B7家族共刺激分子mRNA存在异常表达,其中CTLA-4的表达下调在IRP的发生发展中可能起到了重要的作用.

CD28／B7信号在再生障碍性贫血T淋巴细胞异常活化中的作用

目的通过淋巴细胞输注诱导自身免疫性再生障碍性贫血动物模型，探讨CD28／B7信号在淋巴细胞异常活化中的作用及可能机制。方法将来自父本的淋巴细胞悬液（40×10^6个／L左右）通过尾静脉注入CBYB6 F1代受鼠体内，采用CFDA—SE标记法跟踪淋巴细胞在体内的分布，尾静脉注射CD80和CD86阻断性单克隆抗体（单抗），不同时段检测受体小鼠外周血象的变化，病理切片观察骨髓及主要脏器的变化。将骨髓造血细胞与淋巴结淋巴细胞进行共培养，通过计数造血细胞的集落形成数来观察不同数量淋巴结淋巴细胞对骨髓造血细胞的影响。体外测试不同浓度环孢菌素A（cyclosporine A，CsA）对骨髓造血细胞的影响。结果输注淋巴细胞后可诱导受体小鼠在第5天出现骨髓衰竭的表现，主要是白细胞、血红蛋白、血小板下降，21d左右受体鼠出现死亡。不同时间段受体小鼠主要脏器冰冻切片显示荧光标记的淋巴细胞主要分布在骨髓组织中；病理切片显示有骨髓组织的破坏。同时注射CD80及CD86阻断性单抗的受体鼠同样出现上述表现；体外集落形成试验证实B6淋巴结淋巴细胞数量和F1造血细胞为5：1时，红系集落形成单位（CFU—E）和粒细胞集落形成单位（CFU—G）集落形成数目与空白组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；将比例提高至10：1，CFU—E集落形成数目明显减少（P〈0．05）；至50：1时，则可完全抑制CFU—E集落的形成，CFU—E和CFU-G集落形成数目的减少呈现淋巴细胞剂量依赖性，加入CsA可显著提高CFU—E和CFU-G形成率。结论通过模型证实T细胞在再生障碍性贫血的发生过程中起重要作用，仅通过阻断CD28／B7信号并不能阻断T淋巴细胞的异常活化。

CD4^＋T细胞及其相关前炎症细胞因子基因多态性与胃癌发生的关系

目的探讨CD4^＋T细胞及其前炎症细胞因子基因多态性与胃癌发生的关系。方法①采用PCR—RFLP法检测170例胃癌患者及110例健康对照者肿瘤坏死因子（TNF）．B＋252、白细胞介素（IL）-10启动子-1082和IL-4内含子3基因多态性。②流式细胞术检测63例胃癌患者和31例健康对照者T细胞亚群和共刺激分子CD28。结果①非贵门胃癌组TNF—β＋252^＊A等位基因频率和IL-10启动子-1082A等位基因频率高于健康对照组（P〈0．05或0．01）。IL-4内含子3基因多态性与非贲门癌患者无明显相关（P〉0.05）。贲门癌组IL-4内含子3RP2基因频率明显高于健康对照组,RP1基因频率低于健康对照组（均P〈0．01）。②胃癌组外周血总T细胞、CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞均较健康对照组显著减少（P〈0．001或0．05）；CD28表达率胃癌组较健康对照组显著增高（P〈0.001）。术后1周总T细胞和CD4^＋T细胞明显上升（P〈0．05）。CD28表达率明显下降（P〈0．05）。结论CD4^＋T细胞亚群异常与胃癌发生关系密切。TNF—β＋252^＊A等位基因和IL-10启动子-1082A等位基因可能是胃癌发生的易感基因，IL-4内含子3-RP2等位基因与贲门癌的发生有一定相关。