共济失调性毛细血管扩张症突变基因mRNA在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨共济失调性毛细血管扩张症突变基因(ATM)mRNA在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:用原位分子杂交方法检测56例乳腺浸润性导管癌(BIDC)、37例导管原位癌(BDCIS)及53例癌旁正常组织(NBTAC)中的ATM mRNA的表达。结果:①ATM mRNA在BIDC中的表达明显低于NBTAC(P<0.01)。②ATM mRNA在BDCIS的表达低于NBTAC,但无统计学意义。③ATM mRNA在Ⅲ级BIDC中的表达率明显低于Ⅰ级分化组(P<0.05),但Ⅰ与Ⅱ级和Ⅱ与Ⅲ级分化组间ATMmRNA表达率差别无统计学意义。④ATM mRNA表达与肿瘤组织分化程度间呈正相关(r=0.312,P<0.05),即组织分化越低,ATM mRNA表达越低。⑤ATM mRNA的表达与淋巴结转移与否无关。⑥ATM mRNA表达在患者临床分期Ⅱ+Ⅲ期中的表达明显低于Ⅰ期的表达(P<0.05)。结论:ATM mRNA在BTDC组织中表达降低,可为乳腺癌的早期发现和基因干预治疗提供新的思路。

共济失调毛细血管扩张症突变基因与端粒不稳定性关系研究进展

在电离辐射等因素造成的DNA损伤修复信号传导过程中 ,共济失调毛细血管扩张症突变基因 (ATM )起关键作用。同时 ,ATM属于PI3K家族成员 ,其功能与保持端粒长度有关。端粒是真核细胞内染色体末端的重复的DNA序列 ,端粒的长短和稳定性决定了细胞的寿命。ATM突变导致端粒的不稳定性 ,包括端粒连接、端粒染色质结构变化 。

共济失调毛细血管扩张综合征突变基因与口腔黏膜癌变的相关研究

目的研究共济失调毛细血管扩张综合征突变基因(ATM)在口腔黏膜癌变过程中的作用。方法选取上皮单纯增生,轻、中、重度上皮异常增生,口腔黏膜鳞状细胞癌及正常口腔黏膜标本共61例,采用免疫组织化学SP法和聚合酶链反应方法,观察口腔黏膜癌变过程中ATM蛋白表达与基因杂合性缺失情况以及其与临床病理特征的关系。结果上皮异常增生组平均染色强度高于正常对照组,差别有统计学意义(P<0.05)。在口腔鳞癌中,22例(68.8%)ATM蛋白表达正常或升高,10例(31.3%)ATM蛋白表达降低或缺失;经统计学分析,ATM蛋白表达正常或升高组与ATM蛋白表达降低或缺失组两组分别在病理分级与淋巴结转移两方面的差异有统计学意义(P<0.05);PCR结果表明,上皮异常增生中未发现异常改变,而口腔鳞状细胞癌中,3例(9.38%)发生杂合性缺失,2例(6.25%)发生微卫星不稳定,发生杂合性缺失的3例病例ATM蛋白表达均缺失。结论ATM在上皮异常增生中表达升高可能有利于消除基因组不稳定,阻止癌变发生;而ATM基因失活可能是促使口腔鳞癌恶性演进的基因改变之一。

DNA聚合酶基因在共济失调毛细血管扩张症家系突变状态的研究

目的通过对一个基因损伤修复缺陷性疾病共济失调毛细血管扩张症(AT)家系DNA聚合酶基因突变分析,初步观察其稳定突变位点,为上述疾病易感基因风险突变位点的进一步确定奠定基础。方法对该家系先征者DNA聚合酶基因家族,polA、polB、polD1、polD2、polE1、polG测序,检测突变位点,分析并筛选有意义突变位点;对该家系成员在先征者有意义突变区域直接测序。结果 AT家系患儿DNA聚合酶基因无外显子突变,但在polE1 12p24.3 132696619A>G,该突变位置处于该基因的3′UTR下游;家系中患儿的母亲、外祖母及舅舅发生12p24.3 132696619A>G。结论 AT家系先证者在DNA聚合酶基因外显子没有检测到突变位点,但在3′UTR位置检测到一个有意义突变位点,在家系成员中亦有突变,其可能为AT疾病的稳定突变位点。

共济失调毛细血管扩张症四例临床表型及基因突变分析

目的报道4例经基因检测明确诊断的共济失调毛细血管扩张症患者,结合文献总结该病临床表型和基因突变特点。方法采集3个共济失调毛细血管扩张症家系共4例患者临床资料,并提取患者及其父母外周静脉血,采用全外显子测序和Sanger测序进行ATM基因突变分析。结果 4例共济失调毛细血管扩张症患者均表现为儿童期发病的进行性进展的小脑共济失调、球结膜和皮肤毛细血管扩张、免疫缺陷导致反复感染,血清甲胎蛋白水平升高,头部MRI显示小脑萎缩。ATM基因检测显示,例1和例2存在已知复合杂合突变c.8287C>T(p.Arg2763X)和c.9139C>T(p.Arg3047X),均为无义突变;例3存在2种未报道的复合杂合突变,包括无义突变c.8911C>T(p.Gln2971X)和缺失突变c.7141_7151del AATGGAAAAAT(p.Asn2381Glufs X18);例4存在纯合突变c.1402_1403del AA(p.Lys468Glufs X18)。结论 4例患者具有典型共济失调毛细血管扩张症临床表现。变异型共济失调毛细血管扩张症患者神经系统受累较轻,头部MRI通常正常,神经系统以外受累少见,明确诊断仍依靠ATM基因检测。

共济失调-毛细血管扩张突变基因表达与新疆地区不同民族人群胃癌临床病理特征的关系

目的探讨共济失调-毛细血管扩张突变基因(ATM)蛋白表达与新疆地区维吾尔族(维族)、哈萨克族(哈族)、汉族胃癌患者临床病理特征的关系及其意义。方法回顾性纳入2012年1月至2012年12月新疆医科大学附属肿瘤医院收集的110例胃癌组织标本,并选取其癌旁非癌组织为对照,采用Western blot检测ATM蛋白,比较维族、哈族、汉族患者胃癌及非癌组织中ATM蛋白表达的差异,分析ATM蛋白表达水平与胃癌临床病理特征的关系。结果各组患者胃癌组织中ATM蛋白表达均明显低于非癌组织(P<0.05),但不同民族患者对比,胃癌或非胃癌组织中ATM蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。维族患者中,肿瘤低、未分化,TNM分期Ⅲ~Ⅳ期,浸润深度T3~T4,发生远处转移者,其ATM蛋白表达水平明显低于相应对照组;哈族患者中,肿瘤低、未分化者ATM蛋白表达水平明显低于相应对照组;汉族患者中,肿瘤低、未分化,浸润深度T3~T4者,其ATM蛋白表达水平明显低于相应对照组(P<0.05)。结论 ATM蛋白在新疆地区维族、哈族及汉族患者胃癌组织中表达均明显下降,但不同民族患者胃癌组织中ATM蛋白表达无显著差异。不同民族患者ATM蛋白均与肿瘤临床病理特征有一定关系,对评价病情、预测预后可能有一定价值。

共济失调毛细血管扩张突变基因与恶性肿瘤关系研究进展

共济失调毛细血管扩张突变基因(ATM)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,作为DNA损伤反应的主要调控因子之一,调控p53、乳腺癌相关蛋白1、检查点激酶2等多种蛋白,在细胞对DNA损伤的反应和氧化应激中起着至关重要的作用,其也决定了基因组的稳定性。ATM突变或缺失的患者表现为恶性肿瘤易感性和放疗敏感性,同时恶性肿瘤的侵袭能力及预后也与ATM相关。通过抑制ATM的表达可显著提高癌细胞对放化疗的敏感性,有望作为恶性肿瘤治疗的新靶点。

miRNA-181a及其靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因在胃癌组织中的表达及意义

目的：观察胃癌组织中微小RNA-181a（miR-181a）与其靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因（ATM）的表达与异常情况，初步研究其意义。方法收集2009年4月~2011年12月广州市第一人民医院外科手术切除的胃癌组织标本9例，同时选取其癌旁非癌组织标本作为对照，分析胃癌组织中miR-181a与ATM蛋白表达的相关性。提取其蛋白质及总RNA，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测标本的miR-181a，Western blot检测ATM蛋白。比较胃癌组织及癌旁非癌组织中miR-181a、ATM蛋白表达量。结果 miR-181a在胃癌组织中的表达量为（1.981±1.800），miR-181a在邻近非癌组织中的表达量为（0.394±0.093）；灰度值检测：癌组织ATM蛋白为（0.2539±0.0046）；非癌组织为（0.5525±0.0660），癌及非癌组织中miR-181a、ATM蛋白表达量比较，差异均有高度统计学意义（P〈0.01）；miR-181a与ATM蛋白表达呈负相关（r=-0.539，P〈0.01）。结论 miR-181a在胃癌组织中表达明显增高，ATM蛋白表达明显下降；究其原因可能是通过基因沉默机制miR-181a降低ATM蛋白表达量，从而在胃癌的发生及发展中起促进作用。

共济失调毛细血管扩张症2家系ATM基因分析

目的探讨致共济失调毛细血管扩张症的ATM基因新突变的致病性。方法分析2个无血缘关系的共济失调毛细血管扩张症家系成员的临床资料及基因检测结果,并应用Sanger测序对新突变位点进行验证。结果家系1先证者为男性,11岁,家系2先证者为女性,8岁。均有共济失调毛细血管扩张症的典型表现,甲胎蛋白升高。头颅磁共振成像示小脑萎缩。家系1先证者发现c.7627delA与c.8385-8394del复合杂合突变,分别遗传自父母;家系2先证者发现c.2638delG与c.2921+1G>C复合杂合突变,c.2638delG来源于母亲,其父ATM基因不详。经HGMD检索,4个变异目前均未见有文献报道,为新突变。4个新突变经蛋白功能分析软件预测等确认为致病突变。结论证实ATM基因新突变为2个无关的共济失调毛细血管扩张症家系的致病原因。

共济失调毛细血管扩张突变基因在维持小鼠海马神经干细胞静息状态中的作用

目的探讨共济失调毛细血管扩张突变基因(ATM)在维持小鼠海马齿状回颗粒下层(SGZ)神经干细胞(NSCs)静息状态中的作用。方法构建ATM基因敲除小鼠,1月龄和4月龄ATM基因敲除小鼠各12只,体外分离、培养、鉴定ATM基因敲除小鼠SGZ区NSCs,Nestin/ki67染色比较1月龄ATM^(+/+)和ATM^(-/-)小鼠SGZ区神经干细胞的增殖水平;体内用BrdU染色比较1月龄和4月龄小鼠SGZ区细胞的增殖水平,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)/性别决定基因高迁移率组蛋白2(SOX2)检测4月龄两组小鼠SGZ区静息神经干细胞比例的差异。结果1月龄时,体外Nestin/ki67染色和体内BrdU染色均显示ATM^(-/-)小鼠SGZ区神经干细胞表现出异常高的增殖能力(P<0.05)。4月龄时,体内BrdU染色显示,ATM^(-/-)小鼠SGZ区神经干细胞的增殖能力明显降低(P<0.01),GFAP/SOX2染色显示ATM^(-/-)小鼠SGZ区静息神经干细胞的比例明显降低(P<0.01)。结论ATM的缺失使NSCs不能维持静息状态,导致NSCs短暂性大量扩增,继而出现NSCs库的耗竭。提示ATM对维持神经干细胞静息起到重要作用。

以血尿为突出表现的共济失调毛细血管扩张综合征患儿1例报告并文献复习

目的回顾性分析1例以反复血尿为突出临床表现的共济失调毛细血管扩张综合征(AT)患儿的临床资料及其基因检测结果,并复习相关文献,以提高临床医师对该病的认识。方法对我院儿科收治的1例以血尿为突出表现的AT患儿的临床资料进行回顾性分析,并对相关文献进行复习。结果患儿,男12岁,因反复血尿3年余并进行性加重就诊。患儿自2岁时出现步态不稳,并呈进行性加重;7岁时确诊为急性淋巴细胞性白血病,化疗治疗2.5年后停药,至今完全缓解。现因大量血尿再次就诊。查体可见双眼球结膜毛细血管扩张,小脑性共济失调。尿液检查提示红细胞计数明显升高,以正常红细胞为主。泌尿系超声检查示膀胱内有凝血块,而肾脏、输尿管结构无明显异常。泌尿系CT造影检查均未见异常。基因检测提示患儿ATM基因存在复合杂合突变,分别为c.8357G>T、IVS54+3A>C,均为新发现突变。患儿血尿经膀胱镜证实为膀胱源性,经外科手术电凝后治愈。结论ATM基因c.8357G>T、IVS54+3A>C突变为AT患儿致病突变;AT患儿可因膀胱壁毛细血管扩张出现血尿,甚至可发生大出血而危及生命;如内科止血处理无效应及时行外科手术治疗。

共济失调毛细血管扩张基因和Rad3相关基因介导电离辐射诱导的A549细胞早衰作用研究

目的:研究共济失调毛细血管扩张突变(ATM)基因和ATM-Rad3相关基因(ATR)对早衰相关的p53蛋白及p16蛋白的促进作用。方法:通过阐明ATM、ATR在电离辐射诱导的A549细胞早衰中是否发挥作用,对ATM、ATR与A549细胞早衰的关系做进一步验证。将采用ATM、ATR抑制剂处理的A549细胞定义为实验组,将采用二甲基亚砜(DMSO)处理的A549细胞定义为对照组,1 h后进行4 Gy X射线照射,72 h后利用蛋白免疫印迹法检测p62蛋白的表达、β-半乳糖苷酶(β-Galactosidase)染色试剂盒检测细胞早衰的发生。结果:实验组在ATM、ATR抑制剂处理后72 h,A549细胞中p62蛋白的表达水平升高,与对照组相比差异有统计学意义(t=51.68,P<0.001)。ATM、ATR抑制剂处理后72 h,A549细胞早衰水平升高,实验组与对照组相比A549细胞早衰减少,差异有统计学意义(t=6.018,P<0.001);当4 Gy X射线照射实验组与对照组细胞后,实验组细胞发生早衰的数量较对照组明显下降,差异有统计学意义(t=6.030,P<0.001)。结论:抑制ATM、ATR可促进A549细胞p62蛋白的表达,同时抑制细胞早衰的发生;在4 Gy X射线照射A549细胞72 h后,ATM、ATR具有调控X射线诱导的A549早衰的作用。

蛋白质体外磷酸化方法的建立

蛋白质的磷酸化与去磷酸化调节方式在细胞信号传递过程中占有极其重要的位置 .建立鉴定蛋白质磷酸化的可靠方法具有重要意义 .毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白 (ataxia telangiectasiamutated ,ATM)是直接感受DNA双链断裂损伤 ,并起始诸多DNA损伤信号反应通路的主开关分子 .电离辐射 (IR)细胞学反应中 ,ATM激酶可通过磷酸化活化 p5 3蛋白 ,原核表达 p5 3融合蛋白 ,免疫沉淀IR活化的野生型ATM蛋白 ,进行蛋白质的体外磷酸化反应 .实验验证了ATM对 p5 3蛋白的磷酸化作用 .这一方法的建立可为研究细胞信号转导途径中蛋白激酶对底物的磷酸化作用及筛查激酶底物提供标准化的技术手段 .

抑制共济失调毛细血管扩张突变基因RAD3相关蛋白逆转卵巢癌SKOV3细胞顺铂耐药

目的 探讨共济失调毛细血管扩张突变基因RAD3相关蛋白（ATR）水平和活性对卵巢癌SKOV3细胞顺铂（DDP）敏感性的影响.方法 以ATR-siRNA转染SKOV3细胞48 h下调ATR蛋白水平,以VE-821预处理SKOV3细胞12 h下调ATR激酶活性.采用CCK8实验检测细胞活性,Western blot法检测ATR、磷酸化组蛋白2A变异体（γ-H2AX）和p-ATR蛋白表达,荧光共聚焦检测细胞γ-H2AX和DNA双链修复蛋白（RAD51）的表达,碱性慧星实验检测细胞内DNA双链损伤情况,流式细胞术检测细胞周期分布.结果 DDP可明显引起SKOV3细胞DNA双链损伤,并激活ATR激酶通路.ATR-siRNA可显著下调ATR蛋白水平.CCK8检测结果显示,NC-siRNA组和ATR-siRNA组经DDP作用48 h后,其半数抑制浓度（IC50）值分别为72.12 μmol/L和41.25 μmol/L（P＜ 0.05）.荧光共聚焦检测结果显示,40 μmol/L DDP处理24 h后,ATR-siRNA组RAD51募集明显减少.碱性彗星实验结果显示,与NC-siRNA组比较,ATR-siRNA组能够引起更长的拖尾效应,DNA双链损伤明显增加.DMSO组和VE-821组经DDP作用48 h后,其IC50值分别为75.32 μmol/L和45.64 μmol/L（P＜0.05）.荧光共聚焦检测结果显示,40 μmol/L DDP处理24 h后,VE-821组RAD51募集明显减少.碱性彗星实验结果显示,与DMSO组比较,VE-821组能够引起更长的拖尾效应,DNA双链损伤明显增加.细胞周期检测结果显示,40 μmol/L DDP作用于卵巢癌SKOV3细胞24h后,其G0/G1期、S期、G2/M期细胞比例分别为71.2％、13.4％和15.4％,而对照组分别为54.2％、21.3％和24.4％,DDP引起明显的G0/G1期阻滞.ATR-siRNA组和VE-821组经DDP作用后,其G0/G1期、S期、G2/M期细胞比例分别为43.2％、20.4％、36.4％和40.2％、22.5％、37.3％,干扰ATR表达和活性后能够逆转DDP引起的细胞周期阻滞。结论 抑制ATR可以影响SKOV3细胞同源重组修复过程,增加DNA双链损伤,缓解G0/G1期周期阻滞,增加其对DDP的敏感性。

冬凌草中新二萜化合物Jaridonin激活共济失调毛细血管扩张突变蛋白激酶诱导胃癌细胞周期阻滞

目的：探讨冬凌草中新型二萜化合物Jaridonin对人胃癌细胞周期的影响及其分子机制。方法采用流式细胞术检测Jaridonin对MGC-803细胞共济失调毛细血管扩张突变（ ATM）蛋白的表达和细胞周期的影响，采用Western blot法检测细胞周期调控相关蛋白的表达情况。结果 Jaridonin对胃癌MGC-803细胞细胞周期具有阻滞作用，10、20μmol／L Jaridonin作用MGC-803细胞6 h，G2／M期细胞比例分别为（18．2±2．5）％和（27．3±3．2）％，与对照组[（10．8±2．2）％]比较，差异有统计学意义（P＜0．05）；作用12 h后，G2／M期细胞比例分别为（24．1±2．0）％和（39．7±5．2）％，与对照组[（12．0±1．5）％]比较，差异有统计学意义（P＜0．01）。 Jaridonin将MGC-803细胞阻滞在G2／M期，且呈浓度和时间依赖性。 Jaridonin作用MGC-803细胞后，ATM、Chk1和Chk2以及磷酸化的Cdc2和CDK2蛋白的表达上调，而非磷酸化的Cdc2和CDK2水平则下降。 ATM抑制剂KU-55933逆转了Jaridonin诱导相关蛋白的表达和G2／M期阻滞。结论 Jaridonin可显著诱导胃癌细胞G2／M期阻滞，其机制与ATM介导的Chk1和Chk2活化，以及Cdc2和CDK2磷酸化失活有关。

共济失调毛细血管扩张突变基因沉默可抑制人乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 :探讨共济失调毛细血管扩张突变(ataxia-telangiectasia mutated,ATM)基因沉默对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 :将携带ATM-sh RNA及其阴性对照序列(作为阴性对照组)的重组慢病毒载体分别感染人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,获得ATM基因稳定沉默及其对照细胞株;同时,设置未经病毒感染的空白对照组细胞。经嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜下观察各组细胞的感染效率,并采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测ATM mRNA及蛋白的表达水平。采用MTT法、FCM法、细胞划痕愈合实验和Transwell小室实验分别检测ATM基因沉默对MDA-MB-231细胞增殖、周期分布、迁移和侵袭能力的影响。结果:成功构建了稳定沉默ATM基因的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株。与空白对照组和阴性对照组相比,ATM基因沉默组细胞的增殖能力和细胞周期分布均无明显变化(P值均>0.05),但细胞迁移和侵袭能力均明显减弱(P值均<0.05)。结论:在人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞中,ATM表达下调可明显抑制细胞的迁移和侵袭。

ATM缺失阻碍骨骼肌蛋白质合成的研究进展

恶性体质对国家财政和医疗资源造成极大浪费,而且直接影响个人健康状况和生活质量。毛细血管扩张共济失调(AT)疾病患者普遍身材矮小、肌力和运动能力下降,认为ATM与骨骼肌蛋白质合成有强关联性。文章梳理AT病人与骨骼肌、运动能力的相关实例,简述骨骼肌蛋白质合成机制和ATM与相关分子的调控关系,提出ATM阻碍骨骼肌蛋白质合成的路径假设。

三氧化二砷通过毛细血管扩张性共济失调突变和RAD3相关激酶通路上调KG1a细胞UL16结合蛋白1的表达

目的观察三氧化二砷(ATO)对急性髓系白血病细胞KG1a细胞表面NKG2D配体UL16结合蛋白1(ULBP1)表达的影响,探讨其调节ULBP1表达的分子机制。方法常规体外培养KG1a细胞,采用细胞增殖/毒性检测试剂(CCK8)检测不同浓度ATO对KG1a细胞的增殖抑制率;应用实时荧光定量反转录(RT)-PCR方法检测KG1a细胞ULBP1 mRNA表达的影响;流式细胞术检测ATO对KG1a细胞表面ULBP1蛋白表达的影响。加入毛细血管扩张性共济失调突变和RAD3相关激酶(ATM/ATR)抑制剂咖啡因,观察其是否影响ATO对KG1a细胞ULBP1 mRNA及蛋白的表达。采用Western blot法观察ATO对KG1a细胞中CHK1、CHK2蛋白及其磷酸化表达的影响。结果不同浓度(1、2、3、4、5μmol/L)ATO均可抑制KG1a细胞的增殖,呈浓度依赖性,其对KG1a细胞的半数抑制浓度(IC50值)为2.7μmol/L。荧光定量RT-PCR法检测结果示ATO可使KG1a细胞ULBP1 mRNA的相对表达水平升高,ATO在浓度分别为1、2、3、4、5μmol/L时,与未加药组比较,ULBP1 mRNA相对表达水平分别升高至(1.86±0.30)倍、(3.02±0.71)倍、(3.16±0.75)倍、(4.80±0.70)倍、(3.70±0.89)倍,差异均有统计学意义(均P<0.05);与未加药组相比,当ATO浓度分别为1、2、3、4、5μmol/L时,ULBP1蛋白相对表达水平均显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。咖啡因预先处理KG1a细胞2 h再联合ATO共同孵育KG1a细胞24 h,ULBP1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低。在咖啡因浓度为8 mmol/L时,ULBP1 mRNA相对表达水平由不用咖啡因处理组的(9.55±0.38)倍降为(6.36±0.93)倍,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测结果发现,当咖啡因浓度分别为2、4、8 mmol/L时,ULBP1蛋白相对表达水平由不用咖啡因处理组的(3.50±0.08)倍分别降为(2.17±0.07)倍、(2.02±0.06)倍、(1.75±0.06)倍,差异均有统计学意义(均P<0.05)。CHK1和CHK2蛋白相对表达水平均随ATO浓度的升高而降低,而CHK1和CHK2磷酸化蛋白的相对表达水平均随ATO浓度的升高而升高。结论ATO诱导上调KG1a细胞ULBP1 mRNA及蛋白的表达,ATM/ATR-CHK1/CHK2通路可能参与这一过程。