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华癸中慢生根瘤菌7653R 3个脂质转运蛋白基因的克隆、突变及共生表型 被引量:2
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作者 李亚楠 曾小波 +1 位作者 周雪娟 李友国 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1901-1911,共11页
【目的】脂类转移家族蛋白基因编码一类参与脂类转运及代谢的蛋白。本研究旨在构建华癸中慢生根瘤菌3个脂质转运家族蛋白基因的突变株,检测及分析突变体与紫云英共生条件下的表型及功能。【方法】利用生物信息学分析与预测转脂蛋白的结... 【目的】脂类转移家族蛋白基因编码一类参与脂类转运及代谢的蛋白。本研究旨在构建华癸中慢生根瘤菌3个脂质转运家族蛋白基因的突变株,检测及分析突变体与紫云英共生条件下的表型及功能。【方法】利用生物信息学分析与预测转脂蛋白的结构特征及功能,采用荧光定量技术检测目标基因在自生和共生条件下的表达特性,通过插入突变技术构建目标基因突变株,并进行植物盆栽实验考察其共生表型。【结果】MCHK-5577、MCHK-2172和MCHK-2779基因编码蛋白属于START/RHO alpha_C/PITP/Bet_v1/Cox G/Cal C(SRPBCC)超家族,包含脂类转移结构域,参与脂类转运或代谢,与百脉根等中慢生根瘤菌相应基因的序列相似性达95%以上。这3个基因在共生条件下的表达水平都增高。分别构建了MCHK-5577、MCHK-2172和MCHK-2779基因突变菌株,与野生型菌株7653R相比,接种突变株MCHK-2172mut、MCHK-2779mut和MCHK-5577mut后的植株地上部分生物量和根瘤固氮酶活性显著降低。【结论】华癸中慢生根瘤菌脂质转移家族蛋白基因在共生互作过程中发挥重要作用,突变后明显影响共生固氮表型。本文的实验结果为深入研究脂类转移蛋白在共生固氮作用中的功能机制奠定了基础。 展开更多
关键词 转脂蛋白基因 华癸中慢生根瘤菌 插入突变 共生表型
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蒺藜苜蓿中1个聚半乳糖醛酸酶基因突变体的筛选及共生固氮表型的初步鉴定 被引量:6
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作者 杨倩倩 刘元 +1 位作者 陈大松 李友国 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期62-70,共9页
以模式豆科植物蒺藜苜蓿中1个聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)基因为对象,对其进行生物信息学分析,结果显示:该基因全长4 150bp,其编码区1 278bp,编码425个氨基酸;其编码蛋白包括2个与细胞壁主要成分果胶降解有关的保守结构域PL-6... 以模式豆科植物蒺藜苜蓿中1个聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)基因为对象,对其进行生物信息学分析,结果显示:该基因全长4 150bp,其编码区1 278bp,编码425个氨基酸;其编码蛋白包括2个与细胞壁主要成分果胶降解有关的保守结构域PL-6superfamily和Glyco_hydro_28;该酶蛋白与鹰嘴豆、赤豆等豆科植物中的PG蛋白同源关系更近。苜蓿基因表达谱数据库分析和RT-PCR检测结果表明,MtPG在根瘤中呈显著增强表达,在非共生组织如根、叶中表达量很低。此外,基于该基因3个Tnt1转座子插入的目标候选突变体(NF0999、NF5561和NF4746)插入位点分析,得到1个纯合突变体材料NF4746,共生表型观察表明,MtPG基因在豆科植物共生固氮的早期侵染过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 蒺藜苜蓿 聚半乳糖醛酸酶基因 RT-PCR 转座子插入突变 共生表型
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Symbiotic and Phenotypic Characteristics of Rhizobia Nodulaing Cowpea (Vigna Unguiculata L. Walp) Grown in Arid Region of Libya (Fezzan) 被引量:3
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作者 Mariam Abdelnaby Nazar Nasreldeen Babiker Elnesairy +1 位作者 Salah Hassan Mohamed Youness Abubaker Ali Aikhayali 《Journal of Environmental Science and Engineering(B)》 2015年第5期227-239,共13页
Symbiotic and phenotypic characteristics of thirty rhiobial isolates obtained from root nodules of two cowpea (Vigna unguiculata L. Walp) cultivars that grown in different sites of Fezzan (Southern part of Libya) ... Symbiotic and phenotypic characteristics of thirty rhiobial isolates obtained from root nodules of two cowpea (Vigna unguiculata L. Walp) cultivars that grown in different sites of Fezzan (Southern part of Libya) were studied. Cultural characteristics and cross-nodulation with Arachis hypogega and Faidherbia albida showed that they were slow-growing rhizobia. Each isolate was found to coexist with non-symbiotic bacteria similar in their cultural characteristics to fast-growing rhizobia. All isolates formed symbiosis with the test plants, but different in their nitrogen-fixation efficiency. Numerical analysis of phenotypic characteristics showed that at boundary level of 70% average similarity, the isolates formed four distinguished groups and two isolates remained separate. Most isolates exhibited wide tolerance to acidity, alkalinity and extreme temperatures. They also resistant to some heavy metals such as mercury, copper, zinc, lead, cadmium and aluminum at low concentrations and antibiotics like polymyxin, colistin, bacitracin and nalidixic acid. Isolates displayed different response to salinity ranging from sensitive, which unable to grow in 1% NaCI to resistant and grow at 2% NaCl or above. Urea was hydrolyzed by most of them and carbohydrates utilizations were different. Sucrose and maltose were metabolized by most of the test isolates, whereas, monosaccharide and sugar alcohols were poorly utilized. 展开更多
关键词 Libya Fezzan COWPEA PHENOTYPIC rhizobia.
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华癸中慢生根瘤菌7653R MCHK-3535基因在自生和与紫云英共生中的功能 被引量:2
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作者 于艳霞 佀再勇 +1 位作者 曾小波 李友国 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期499-509,共11页
【目的】探究Mesorhizobium huakuii 7653R MCHK-3535基因在共生固氮中的功能。【方法】构建MCHK-3535插入失活突变体、超表达和互补菌株,对其进行共生表型鉴定;并测定各菌株的生长曲线、运动性及生物膜形成;利用qRT-PCR方法和组织表达... 【目的】探究Mesorhizobium huakuii 7653R MCHK-3535基因在共生固氮中的功能。【方法】构建MCHK-3535插入失活突变体、超表达和互补菌株,对其进行共生表型鉴定;并测定各菌株的生长曲线、运动性及生物膜形成;利用qRT-PCR方法和组织表达定位分析MCHK-3535在共生过程中的时空表达特征。【结果】与野生型7653R相比,突变体Δ3535达到稳定期的生物量增加,运动性下降,生物膜形成增加。此外,MCHK-3535基因的失活会显著提高紫云英固氮能力和植物地上部分鲜重,但不影响根瘤数量及重量;且互补菌株C3535能部分回补到野生型性状,超表达菌株OV3535均无显著性差异;qRT-PCR和启动子组织表达定位发现,MCHK-3535基因主要在根瘤的侵染区、过渡区及固氮区表达,并且表达持续整个固氮期。【结论】MCHK-3535基因在自生及与紫云英共生过程中发挥重要功能,参与根瘤的正常发育并负向调控固氮酶活性。 展开更多
关键词 生物固氮 华癸中慢生根瘤菌7653R 共生表型 时空表达
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大豆快生根瘤菌SMH12效应蛋白NopP在共生固氮过程中的功能 被引量:2
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作者 孙轶芳 赵鹏 +1 位作者 刘元 李友国 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期2172-2183,共12页
【目的】研究Sinorhizobium fredii SMH12中的nopP在共生固氮过程中的功能,为深入解析根瘤菌效应蛋白的菌植互作机理提供线索,进而为大豆高效根瘤菌的遗传改良提供一定的科学依据。【方法】利用生物信息学分析nopP的结构特征,构建nopP... 【目的】研究Sinorhizobium fredii SMH12中的nopP在共生固氮过程中的功能,为深入解析根瘤菌效应蛋白的菌植互作机理提供线索,进而为大豆高效根瘤菌的遗传改良提供一定的科学依据。【方法】利用生物信息学分析nopP的结构特征,构建nopP缺失、过表达和互补菌株,并对其进行共生表型分析;通过qRT-PCR分析nopP在共生过程中的时空表达特征,测定在接野生型和突变体的冀豆17中NIN、ENOD40、PR1、PR2和PR5的表达量;采用激光共聚焦显微镜观察NopP的亚细胞定位。【结果】根瘤菌的NopP不包含任何已知功能域,与病原体的任何Avr效应物没有同源性。nopP缺失之后对冀豆17和中黄13的根瘤固氮酶活均有显著影响,在瘤数上对冀豆17有显著增加,表明nopP突变后促进其与冀豆17和中黄13的共生固氮。qRT-PCR显示,nopP在自生条件下少量表达,在共生条件下表达量显著升高,尤其在接菌2 d后表达量达到最高,显示该基因可能与根瘤菌早期侵染相关。此外,发现NopP在烟草叶片和大豆根中均定位于细胞膜和细胞核。接种突变体的冀豆17根中NIN的表达量升高1.2倍,PR5的表达量降低3.6倍。【结论】效应蛋白NopP在与大豆共生过程中,参与根瘤菌的早期侵染以及在根瘤菌与豆科宿主植物之间的免疫防御反应中发挥重要功能。 展开更多
关键词 共生固氮 大豆快生根瘤菌SMH12 效应蛋白NopP 共生表型
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