Annexin A7及其共相关蛋白研究进展

膜联蛋白(annexin A7)是一种能促进膜融合的钙依赖性磷脂结合蛋白,近来研究表明其在多种肿瘤的发生、发展、转归中起重要作用。Annexin A7可与多种蛋白(如半乳糖凝集素3,抗药蛋白,凋亡相关基因2,死亡结构域沉默子等)相互作用。Annexin A7及其共相关蛋白的研究有助于阐明Annexin A7在肿瘤细胞发生、发展机制中的作用,有利于发现新的肿瘤治疗靶点。

胃癌组织中YAP、VGLL4蛋白表达与临床病理特征的相关性分析

目的:分析胃癌组织中转录共激活因子相关蛋白(YAP)、转录辅助因子退变样蛋白4(VGLL4)表达水平与临床病理特征的相关性。方法:回顾性分析医院2018年3月至2021年12月收治的胃癌患者103例的临床资料,采用免疫组织化学(SP)法检测患者胃癌组织及癌旁组织中YAP、VGLL4蛋白表达水平,采用Spearman相关性分析胃癌患者YAP与VGLL4蛋白表达的相关性,分析胃癌组织中YAP、VGLL4蛋白表达水平与临床病理特征的相关性。结果:癌组织中YAP蛋白阳性表达率高于癌旁组织,VGLL4蛋白阳性表达率低于癌旁组织(P<0.05);不同性别、年龄、肿瘤大小胃癌患者YAP、VGLL4蛋白表达水平相比,无显著性差异(P>0.05);不同组织学分级、TNM分期及淋巴结转移胃癌患者YAP、VGLL4蛋白表达水平相比,差异有统计学意义(P<0.05);经Spearman直线相关性检验,胃癌组织中YAP、VGLL4蛋白表达呈负相关性(r<0,P<0.05)。结论:胃癌组织中YAP、VGLL4蛋白表达与临床病理特征存在一定相关性,其中YAP蛋白表达与肿瘤的发展及恶性程度呈正相关,而VGLL4蛋白表达与肿瘤的恶性程度呈负相关。

扁蒴藤素调节YAP/TAZ信号通路对创伤性关节炎大鼠的治疗作用研究

目的探究扁蒴藤素(PM)调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路对创伤性关节炎(PTOA)大鼠的治疗作用。方法将SD雄性大鼠随机分为对照组、PTOA组、低剂量PM组(PM-L组,100 mg/kg PM)、高剂量PM组(PM-H组,200 mg/kg PM)和高剂量PM+YAP抑制剂VTPF组(PM-H+VTPF组,200 mg/kg PM+10 mg/kg VTPF),每组12只。记录大鼠热痛阈值、压痛阈值的变化。HE染色观察大鼠软骨组织病理学变化,并进行Mankin s评分,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠软骨组织中炎症因子一氧化氮(NO)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-3水平。TUNEL染色观察大鼠软骨组织细胞凋亡的情况。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测大鼠软骨组织TAZ、IL-1β、TNF-αmRNA水平。Western Blot检测大鼠软骨组织YAP/TAZ信号通路相关蛋白的表达情况。结果与对照组相比,PTOA组大鼠热痛阈值、压痛阈值、软骨组织YAP磷酸化水平、TAZ蛋白水平与mRNA水平显著降低(P<0.05),软骨组织IL-1β、TNF-α及其mRNA水平、NO、MMP-1、MMP3水平、细胞凋亡率、Mankin s评分显著升高(P<0.05),HE显示软骨层变薄,结构不清晰,软骨细胞大量丢失、排列紊乱。与PTOA组相比,PM-L组、PM-H组大鼠相关指标变化与上述相反(P<0.05),软骨组织病变减轻。YAP抑制剂VTPF减轻了PM对PTOA的治疗作用。结论PM可能通过激活YAP/TAZ信号通路,对PTOA大鼠具有一定的治疗作用。

甘草素调节Hippo/YAP/TAZ信号通路对高糖诱导的肾小球系膜细胞炎症反应及纤维化的影响

目的探讨甘草素(LQ)调节Hippo/Yes相关蛋白(YAP)/含有PDZ结合位点转录共激活因子(TAZ)通路对高糖(HG)诱导的肾小球系膜细胞炎症反应及纤维化的影响。方法将HBZY-1细胞分为对照组(Ct组)、高糖组(HG组)、低剂量LQ组(LQ-L组,20μmmol/L)、高剂量LQ组(LQ-H组,40μmmol/L)、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、pcDNA3.1-YAP/TAZ组(转染pcDNA3.1-YAP/TAZ)、LQ-H+pcDNA3.1组(40μmmol/L+转染pcDNA3.1)、LQ-H+pcDNA3.1-YAP/TAZ组(40μmmol/L+转染pcDNA3.1-YAP/TAZ)。qRT-PCR、Western blot检测转染效果。CCK-8法检测细胞增殖;ELISA检测细胞上清中TNF-α、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、IL-1β水平;免疫荧光检测IV型胶原纤维(Collagen IV)、纤连蛋白(FN)蛋白表达;Western blot检测结缔组织生长因子(CTGF)、TGF-β1、YAP1、TAZ蛋白表达。结果HBZY-1细胞成功高表达YAP1/TAZ;与Ct组比较,HG组HBZY-1细胞OD450值、TNF-α、MCP-1、IL-1β、Collagen IV、FN蛋白相对荧光强度、CTGF、TGF-β1、YAP1、TAZ蛋白表达升高(P<0.05);与HG组比较,LQ-L组、LQ-H组HBZY-1细胞OD450值、TNF-α、MCP-1、IL-1β、Collagen IV、FN蛋白相对荧光强度、CTGF、TGF-β1、YAP1、TAZ蛋白表达降低(P<0.05);与HG组、pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-YAP/TAZ组HBZY-1细胞OD450值、TNF-α、MCP-1、IL-1β、Collagen IV、FN蛋白相对荧光强度、CTGF、TGF-β1、YAP1、TAZ蛋白表达升高(P<0.05);pcDNA3.1-YAP/TAZ减弱了高剂量LQ对HG诱导的HBZY-1细胞炎症反应及纤维化的抑制作用。结论LQ可能通过抑制Hippo/YAP/TAZ通路抑制HG诱导的HBZY-1细胞炎症反应及纤维化。

CARM1在恶性肿瘤中的作用与机制研究进展

共激活蛋白相关的精氨酸甲基转移酶1(coactivator-associated arginine methyltransferase 1,CARM1)是蛋白质精氨酸甲基转移酶(protein arginine methyltransferase,PRMT)家族的成员,又称PRMT4。近年来,CARM1作为一种辅助转录调节因子已被广泛研究,并被发现在肿瘤、炎性疾病、糖尿病等疾病中具有重要作用。一方面,CARM1通过调节翻译后甲基化修饰参与表观遗传调控,另一方面通过RNA代谢、代谢重编程等形式调控基因表达过程。随着研究的深入,CARM1在恶性肿瘤中的调控作用及分子机制逐步被揭示,但其在不同肿瘤中的调控效应不尽相同,目前需进一步探索其在恶性肿瘤中的调控网络机制。本文就近年来恶性肿瘤中CARM1的作用及其分子机制展开综述,以期为今后的研究提供新思路。

圣草酚调节YAP/TAZ信号通路对牙周炎牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的:探究圣草酚调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子(TAZ)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的牙周膜干细胞(hPDLSC)成骨分化的影响。方法:采用结扎法进行大鼠牙周炎造模,造模成功后随机分为模型组和圣草酚组,每组6只,另取6只正常大鼠作为对照组。体外培养hPDLSC,以10μg/mL的LPS诱导的同时采用0、40、80、160、320、480μmoL/L的圣草酚处理,采用试剂盒检测各处理组细胞碱性磷酸酶(ALP)活性后筛选圣草酚最佳作用浓度。将hPDLSC随机分为对照组、LPS组、LPS+圣草酚组、LPS+空载组、LPS+圣草酚+YAP敲低组,诱导其成骨分化并以LPS、圣草酚和质粒分组处理。采用HE染色观察牙周组织病理形态学变化;采用实时荧光定量PCR与免疫印迹实验检测各组牙周组织及细胞YAP、TAZ表达;采用ALP活性检测试剂盒、ALP染色及茜素红染色检测各组细胞成骨分化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组血清及细胞炎症因子前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素(IL)-6、IL-18水平;采用实时荧光定量PCR与免疫印迹实验检测各组牙周组织细胞成骨分化因子Runx2、OSX、骨桥蛋白(OPN)表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠牙周组织呈现明显的病理损伤,血清PGE2、IL-6及与IL-18水平增高,牙周组织YAP、TAZ mRNA与蛋白表达降低(P<0.05);与模型组相比,圣草酚组大鼠牙周组织病理损伤减轻,血清PGE2、IL-6及与IL-18水平下降,牙周组织YAP、TAZ mRNA与蛋白表达增高(P<0.05)。40、80、160、320、480μmoL/L的圣草酚均可升高LPS诱导的hPDLSC中ALP活性(P<0.05),其升高作用随着圣草酚浓度升高而增强并在320μmoL/L时达到平台期,故选择320μmoL/L的圣草酚进行后续实验。与对照组相比,LPS组细胞YAP、TAZ mRNA与蛋白表达、ALP阳性相对比例、ALP活性、矿化结节相对比例、Runx2及OSX、OPN mRNA与蛋白表达降低(P<0.05),PGE2、IL-6及与IL-18水平升高(P<0.05)。与LPS组相比,LPS+圣草酚组细胞YAP、TAZ mRNA与蛋白表达、ALP阳性相对比例、ALP活性、矿化结节相对比例、Runx2及OSX、OPN mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),PGE2、IL-6及与IL-18水平降低(P<0.05);LPS+空载组细胞各指标无明显变化(P>0.05)。与LPS+圣草酚组相比,LPS+圣草酚+YAP敲低组细胞YAP、TAZ mRNA与蛋白表达、ALP阳性相对比例、ALP活性、矿化结节相对比例、Runx2及OSX、OPN mRNA与蛋白表达降低(P<0.05),PGE2、IL-6及与IL-18水平升高(P<0.05)。结论:圣草酚可减轻牙周炎大鼠的炎症损伤,并通过上调YAP/TAZ通路蛋白表达抑制LPS诱导的hPDLSC炎症,从而促使其成骨分化。

维生素K2调节YAP/TAZ信号通路对胆管癌细胞化疗耐药性的影响

目的:探究维生素K2(VK2)调节Yes相关蛋白(YAP)/PDZ结合基序转录共激活子(TAZ)信号通路对胆管癌(CCA)细胞化疗耐药性的影响。方法:将QBC939细胞设为对照组(Control组,空白培养基处理),QBC939/ADM细胞随机分为5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药组、低浓度VK2组、中浓度VK2组、高浓度VK2组、高浓度VK2+YAP激活剂JASP组。CCK-8法检测细胞增殖能力。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞侵袭能力。流式细胞术检测细胞凋亡。采用Western Blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase3和YAP/TAZ信号通路相关蛋白表达。结果:与Control组相比,5-FU组细胞OD450值(48 h、72 h)、细胞迁移率、细胞侵袭数目、细胞YAP、TAZ、Bcl-2蛋白表达显著上升(P<0.05),细胞凋亡率、细胞Bax、Caspase-3蛋白表达显著下降(P<0.05)。与5-FU组相比,VK2-M组、VK2-H组细胞的相应指标变化与上述相反(P<0.05)。JASP减弱了VK2逆转CCA化疗药物耐药性的作用。结论:VK2可能通过抑制YAP/TAZ信号通路,逆转CCA细胞对化疗药物的耐药性。

甜橙黄酮调节YAP/TAZ轴对宫颈癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探究甜橙黄酮(Sinensetin, SIN)调节Yes相关蛋白(YAP)/PDZ结合域的转录共刺激因子(TAZ)轴对宫颈癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响。方法:免疫组织化学和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测120例宫颈癌组织、癌旁组织中YAP、TAZ表达。以不同浓度SIN(0、5、10、25、50、100、200μg/mL)处理宫颈癌细胞,检测细胞活力。将SiHa细胞分为对照(control)组、SIN低、中、高剂量(SIN-L、M、H)组、SIN-H+XMU-MP-1组,EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测YAP、TAZ、PCNA、Bax、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin、E-cadherin蛋白表达水平。构建宫颈癌裸鼠模型,分为NC组、SIN组、SIN-H+XMU-MP-1组,测量肿瘤质量与体积,HE染色观察肿瘤组织形态,免疫组化法检测肿瘤组织Ki67、YAP、TAZ蛋白表达。结果:120例宫颈癌组织中YAP阳性率、TAZ阳性率显著升高(P<0.05);宫颈癌组织中YAP、TAZ mRNA表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。宫颈癌细胞CaSki、C-33A、HeLa、SiHa细胞活力随着SIN浓度的升高而逐渐降低(P<0.05),选择SiHa作为后续实验细胞,选择25、50和100μmol/L的SIN作为后续实验浓度。与对照组相比,SIN-L、M、H组细胞EdU阳性率、迁移细胞数、侵袭细胞数、PCNA、Bcl-2、N-cadherin蛋白表达显著下降,凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05);与SIN-H组相比,SIN-H+XMU-MP-1组细胞EdU阳性率、迁移细胞数、侵袭细胞数、PCNA、Bcl-2、N-cadherin蛋白表达显著升高,凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.05)。SIN能够抑制肿瘤体积和质量,促进肿瘤组织坏死,降低Ki67、YAP、TAZ阳性表达。结论:SIN能够抑制宫颈癌细胞增殖和上皮间质转化,促进凋亡,其作用机制可能与抑制YAP/TAZ轴有关。

川陈皮素调节YAP/TAZ信号通路对OGD/R诱导神经元细胞铁死亡的影响

目的探究川陈皮素(NOB)调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导的神经元铁死亡的影响。方法常规培养小鼠海马神经元HT22细胞,采用OGD/R诱导HT22建立细胞损伤模型,将HT22细胞随机分为对照组(Control组)、模型组(OGD/R组)、低浓度NOB组(NOB-L组,15μmol/L NOB)、高浓度NOB组(NOB-H组,30μmol/L NOB)和高浓度NOB+YAP激活剂XMU-MP-1组(NOB-H+XMU-MP-1组,30μmol/L NOB+5μmol/L XMU-MP-1)。CCK-8法检测5组HT22细胞活力;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测5组HT22细胞谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平;活性氧(ROS)试剂盒检测细胞ROS水平。特异性荧光探针法检测细胞内铁含量;Western Blot检测5组HT22细胞中YAP/TAZ信号通路相关蛋白和铁死亡指标蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、酰基合成酶长链家族成员4(ACSL4)的表达。结果与Control组比较,OGD/R组HT22细胞OD_(450)(48 h、72 h)、GSH水平、SLC7A11、GPX4蛋白表达显著下降(P<0.05),MDA、ROS水平、铁离子水平、ACSL4、YAP、TAZ蛋白表达显著上升(P<0.05)。与OGD/R组比较,NOB-L组、NOB-H组HT22细胞相关指标变化与上述相反(P<0.05)。YAP激活剂XMU-MP-1减轻了NOB对OGD/R诱导的神经元铁死亡的抑制作用。结论NOB可能通过抑制YAP/TAZ信号通路减轻OGD/R诱导的神经元铁死亡。

肺癌组织中YAP、Lats 1、Mst 1蛋白的表达及其临床意义

目的:分析肺癌组织中转录共激活因子相关蛋白(YAP)、大肿瘤抑制基因1蛋白(Lats 1)、哺乳动物不育系20样激酶1(Mst 1)水平与血清肿瘤标志物的相关性,探讨其对肺癌复发转移的预测价值。方法:取50例新鲜肺癌标本和癌旁组织标本以及同期50例肺部良性病变患者经皮肺穿刺活检获得的正常组织标本,采用免疫组化SP法检测标本中YAP、Lats1、Mst1蛋白的表达情况。同时收集患者的性别、年龄、术前血清学、肿瘤的临床病理特征及随访预后结果等。结果:①YAP在肺癌组织中强阳性表达,含量明显高于癌旁组织与正常组织(均P<0.05)。②YAP的表达与血清细胞角蛋白19片断(CYFRA21-1)、糖类抗原(CA125)水平呈正相关(均P<0.05),与血清神经元特异性烯醇化(NSE)无关(P>0.05);Lats 1的表达与血清CYFRA21-1、NSE、CA125水平呈负相关(均P<0.05);Mst 1的表达与血清CYFRA21-1、CA125水平呈负相关(均P<0.05),与NSE无关(P>0.05)。③截至随访末期,41例(82.0%)发生复发转移。Kaplan-Merier生存分析示:YAP及Mst 1高表达组的无病生存期(DFS)与其低表达组比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。Lats 1高表达组的DFS明显高于低表达组(P<0.05)。④COX比例风险模型分析示:TNM分期、淋巴结转移、Lats 1蛋白的表达是肺癌患者DFS的独立预后因子。结论:Hippo通路失调对肺癌复发转移的预测价值有限。

25-OH维生素D通过调控TGF-β介导的YAP/TAZ核转位机制对新生儿感染性肺炎的抗炎作用研究

目的探讨25-OH维生素D(25-OH vitamin D,25-OH-VD)对新生儿感染性肺炎(neonatal infectious pneumonia,NIP)的抗炎作用及其作用机制。方法选取2022年1月~2023年1月成都市妇女儿童中心医院收治的65例NIP患儿,根据病情严重程度,分为轻症组(n=34)和重症组(n=31),另选取同期60例健康新生儿为对照组。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清25-OH-VD,白细胞介素-2(inteleukin-2,IL-2)、γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和IL-1β水平;蛋白免疫印迹法检测外周血单个核细胞中维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)、细胞核转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)/Yes相关蛋白(nucleus-Yes-associated protein,n-YAP)和细胞核转录共激活因子PDZ结合基序(nucleus-transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,n-TAZ)通路相关蛋白表达。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激人肺上皮细胞构建NIP体外模型,分为Control组、LPS组和LPS+VD组;CCK-8检测细胞活力;qRT-PCR检测各组细胞中细胞色素P450家族成员28B1(recombinant cytochrome P45027B1,CYP27B1)和VDR的mRNA表达;免疫细胞化学法检测各组细胞YAP阳性细胞核数;免疫荧光检测各组细胞YAP/TAZ复合物核转位;蛋白免疫印迹法检测各组细胞炎性因子相关蛋白表达。结果与对照组相比,轻症组和重症组患儿血清中IL-2(1.91±0.18μg/L,2.63±0.27μg/L vs 1.05±0.12μg/L),IFN-γ(1.73±0.13μg/L,2.18±0.19μg/L vs 1.03±0.07μg/L),TNF-α(1.79±0.08μg/L,2.38±0.13μg/L vs 0.97±0.04μg/L)和IL-1β(2.18±0.07μg/L,2.59±0.11μg/L vs 0.96±0.02μg/L)含量以及TGF-β(1.67±0.21,2.43±0.42 vs 1.02±0.04),n-YAP(2.08±0.11,4.23±0.37 vs 0.99±0.02)和n-TAZ(2.47±0.42,4.21±0.58 vs 1.03±0.05)蛋白表达逐渐升高,25-OH-VD(12.57±2.21μg/L,7.85±2.03μg/L vs 16.76±1.02μg/L)含量和VDR(0.73±0.09,0.51±0.06 vs 1.03±0.08)蛋白表达逐渐降低,差异具有统计学意义(F=18.983~56.782,均P<0.001)。细胞实验结果显示,与Control组相比,LPS组细胞存活率在12h(76.23%±0.73%vs 116.72%±2.14%),24 h(57.23%±0.94%vs 125.76%±1.67%)和48 h(41.23%±0.56%vs 138.56%±1.35%)时显著降低(t=10.342,26.562,37.821);YAP阳性细胞数(47.35±3.47个vs 12.46±1.34个)和YAP/TAZ复合物核转位率(2.56%±0.32%vs 1.01%±0.06%)升高(t=46.362,26.921);IL-2(2.03±0.09 vs 1.03±0.08),IFN-γ(2.07±0.21 vs 1.02±0.04),TNF-α(2.18±0.11 vs 0.99±0.02)和IL-1β(3.17±0.42 vs 1.03±0.05)的蛋白表达水平升高(t=28.341,26.713,31.235,47.823),差异具有统计学意义(均P<0.001),而两组间CYP27B1和VDR mRNA表达差异无统计学意义(t=0.872,0.786,均P>0.05)。与LPS组比较,LPS+VD组在12 h(85.23%±0.36%),24 h(79.82%±0.63%),48 h(76.28%±0.72%)的细胞存活率和CYP27B1(4.42±0.14),VDR mRNA(5.13±0.56)表达升高,YAP阳性细胞核数(24.41±3.23个)和YAP/TAZ复合物核转位率(1.47%±0.26%)降低,IL-2(1.21±0.06),IFN-γ(1.13±0.42),TNF-α(1.03±0.37)和IL-1β(1.61±0.58)蛋白表达降低,差异具有统计学意义(t=7.263,19.892,23.145,27.872,26.982,14.762,13.623,18.273,25.314,27.873,22.134,均P<0.01)。结论血清25-OH-VD水平与NIP严重程度相关,外源性给予VD补充可通过调控TGF-β介导的YAP/TAZ核转位机制发挥抗炎作用,减轻NIP损伤。

亚砷酸钠对神经干细胞活力及YAP蛋白表达的影响

目的探讨亚砷酸钠对神经干细胞活力及转录共激活因子Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)表达的影响。方法以不同浓度(0、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2μmol/L)亚砷酸钠干预NE-4C细胞48 h,倒置显微镜观察细胞形态变化,CCK-8法检测细胞活力,Western Blot检测亚砷酸钠对细胞YAP、P-YAP蛋白的影响,qRT-PCR检测亚砷酸钠对YAP下游靶基因Gli2、Tead1、Tead2 mRNA表达的影响。结果亚砷酸钠引起细胞缩小,胞体萎缩,上清液中漂浮细胞及细胞碎片增加,贴壁能力显著下降,出现大面积死亡,各干预组细胞活力随亚砷酸钠浓度的增加而降低;亚砷酸钠干预后YAP蛋白表达升高,P-YAP蛋白表达降低,P-YAP/YAP相对表达水平呈下降趋势,提示亚砷酸钠可激活YAP,使其入核水平增加;YAP下游靶基因Gli2、Tead1、Tead2 mRNA的表达水平随亚砷酸钠浓度的增加而升高。结论亚砷酸钠可抑制NE-4C细胞活力、诱导细胞损伤,其可能机制与YAP蛋白的应激性清除受损细胞有关。

Hippo信号通路在肝纤维化过程中的调控机制研究进展

肝纤维化是肝脏慢性损伤的一种修复反应,其特征为肝脏中细胞外基质的过量沉积,肝星状细胞(HSC)的激活是肝纤维化发生的中心环节。Hippo信号通路是一条高度保守的信号通路,其参与了哺乳动物多种细胞和器官的稳态调控,且能够通过调控多种细胞、趋化因子、分子信号等相互作用参与肝纤维化的发生发展。Hippo信号通路能够参与HSC的激活,其下游转录激活因子Yes相关蛋白(YAP)和含PDZ结合基序的转录共激活因子(TAZ)是HSC激活的关键调节因子。YAP/TAZ在肝纤维化过程中表达上调,并表现出广泛的核累积,抑制YAP/TAZ能有效改善肝纤维化的发生发展。因此,深入研究Hippo信号通路与肝纤维化的关系可以为肝纤维化患者的治疗提供新靶点。

YAP在特发性膜性肾病中的表达及其对C5b-9诱导足细胞损伤的作用

目的 在特发性膜性肾病(IMN)中探究转录共激活因子Yes相关蛋白(YAP)的表达及其在膜攻击复合物C5b-9诱导足细胞损伤的作用。方法 免疫组织化学染色检测YAP蛋白在IMN患者肾组织及正常对照肾组织中的表达;选用亚溶解剂量的膜攻击复合物C5b-9(以下简称C5b-9)在体外建立人足细胞系MPC5的损伤模型,Western blot检测随C5b-9刺激时间的延长,足细胞中YAP蛋白的表达变化;使用siRNA瞬时转染技术,靶向沉默足细胞中YAP基因表达,qRT-PCR及Western blot检测转染效率;按足细胞处理的不同将其分为4组,正常培养的Control组,经C5b-9处理的C5b-9组,C5b-9处理转染si-NC或si-YAP的的C5b-9+si-NC组与C5b-9+si-YAP组;应用CCK-8实验检测上述各组细胞的增殖活力,Anenxin V-FITC双染色联合流式细胞数检测各组细胞的凋亡发生率,DCFH-DA法检测细胞中活性氧(ROS)含量,Western blot检测各组细胞中足细胞标志性蛋白Nephrin、WT1与紧密连接蛋白ZO-1、表型转换蛋白Snail及纤连蛋白Fibronectin的蛋白表达水平。结果 与正常对照肾组织相比,YAP在IMN中的表达显著增加(P<0.05);随C5b-9刺激时间的延长,足细胞中YAP蛋白的表达水平逐渐升高;转染si-YAP后,足细胞中YAP mRNA及蛋白水平均显著降低(P<0.05);与Control组相比,C5b-9组、C5b-9+si-NC组及C5b-9+si-YAP组细胞的增殖活力均显著降低(P<0.05),而凋亡率及ROS含量均显著增加(P<0.05);但与C5b-9组或C5b-9+si-NC组相比,C5b-9+si-YAP组细胞增殖活力显著增加(P<0.05),凋亡率及ROS含量显著减少(P<0.05);Western blot检测各组细胞中相关蛋白的表达结果显示,与Control组相比,C5b-9组、C5b-9+si-NC组及C5b-9+si-YAP组细胞中Nephrin、WT1及ZO-1蛋白表达均显著降低(P<0.05),Snail与Fibronectin蛋白表达均显著增加(P<0.05);而与C5b-9组或C5b-9+si-NC组相比,C5b-9+si-YAP组细胞中Nephrin、WT1及ZO-1蛋白表达显著增加(P<0.05),而Snail与Fibronectin蛋白表达显著减少(P<0.05)。结论 本研究结果表明YAP蛋白在IMN患者肾小球中的表达显著增加,而沉默足细胞中YAP基因表达能够明显改善C5b-9诱导的细胞功能损伤,并抑制其凋亡的发生。

白血病抑制因子受体在宫颈癌肺转移过程中的作用及其机制

目的探讨白血病抑制因子受体(LIFR)在宫颈癌肺转移中的作用以及Hippo-YAP信号通路在其中的作用。方法 (1)采用实时荧光定量PCR法检测50例宫颈癌肺转移患者原发灶癌组织、癌旁组织及转移灶癌组织LIFR mRNA表达。(2)用包含LIFR的重组慢病毒质粒及其阴性对照空载体质粒vector转染人宫颈癌Si Ha细胞,2.0μg/mL嘌呤霉素筛选,得到稳定过表达LIFR的宫颈癌细胞(观察组)和对照细胞(对照组)。采用Western blotting法检测两组LIFR及Hippo-YAP信号通路相关蛋白YAP、P-YAP、TAZ、p-TAZ。将两组细胞经尾静脉注射到BALB/c裸鼠体内,4周后处死裸鼠,取出肺组织,HE染色,镜下计数肺组织中所有转移灶个数。结果 (1)LIFR mRNA相对表达量:原发灶癌组织高于癌旁组织,转移灶癌组织低于原发灶癌组织和癌旁组织(P均<0.05)。(2)观察组过表达LIFR的Si Ha细胞LIFR、p-YAP、p-TAZ蛋白相对表达量高于对照组(P均<0.05),YAP、TAZ蛋白表达量与对照组比较P均>0.05。注射过表达LIFR的Si Ha细胞及对照细胞的裸鼠肺转移灶个数分别为(9±2)、(60±5)个,P<0.05。结论过表达LIFR可促进Hippo-YAP信号通路蛋白YAP、TAZ磷酸化,进而抑制宫颈癌肺转移灶的形成。

改良的大鼠鼠尾增生性瘢痕动物模型制备方法

目的建立增生性瘢痕的有效动物模型。方法于SD大鼠鼠尾形成6 mm矩形创面,根据创面边缘距鼠尾根部的距离分为A组(3 cm)和B组(5 cm)。术后16 d进行牵拉并测量创面牵张力。于牵拉7、14、21、28 d拍照记录两组的瘢痕的大体变化。于牵拉28 d检测两组瘢痕中张力相关蛋白局部黏着斑激酶(FAK)和共激活因子相关蛋白(YAP)活化情况。结果A、B两组牵拉即刻的牵张力分别增加了(22.78%±2.452%)和(15.46%±2.193%)(P<0.05)。相比B组,A组瘢痕厚度显著增加(P<0.05),胶原束粗大呈漩涡样排列紊乱,且α-SMA蛋白表达高于B组(P<0.05)。A组FAK和YAP阳性表达率均较B组增高(P<0.05;P<0.001)。结论于鼠尾3 cm处建立创面进行牵拉可以建立更接近于人增生性瘢痕的动物模型。

Hippo-YAP/TAZ通路在妇科恶性肿瘤中的研究进展

Hippo-Yes相关蛋白(YAP)/含有PDZ结合位点的转录共激活因子(TAZ)通路是一种参与多种细胞过程的肿瘤抑制通路,其在调节细胞增殖与凋亡、组织稳态和再生中发挥重要作用。Hippo-YAP/TAZ通路下游关键分子YAP和TAZ的过表达已在多种实体肿瘤中被监测到,且Hippo-YAP/TAZ信号调节异常,特别是其下游YAP和TAZ的过度激活也参与了宫颈癌、卵巢癌及子宫内膜癌的发生发展。因此,研究Hippo-YAP/TAZ通路在妇科恶性肿瘤中的表达情况可为妇科恶性肿瘤的诊治提供新思路。

YAP/TAZ在肿瘤细胞上皮-间充质转化中作用的研究进展

Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)/作为Hippo信号通路级联的下游效应因子,在器官生长、组织再生、细胞增殖等中具有关键调控作用。在哺乳动物细胞中,Hippo通路的激酶级联反应通过磷酸化YAP/TAZ来抑制YAP/TAZ的活性,从而调控器官的大小和肿瘤的形成。上皮-间充质转化作为肿瘤转移的首发事件,是肿瘤发展的关键因素,而YAP/TAZ在调控肿瘤细胞上皮-间充质转化中具有重要作用。而作为核心的YAP/TAZ必将成为癌症和再生药物中最有吸引力的治疗靶点。

骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化前后基因及Ca^(2+)浓度的变化

背景: 单唾液酸四己糖神经节苷脂(Monosialotetrahexosylganglioside,GM1)在神经细胞的生长发育、分化、再生和细胞内外信息传递等多种生理过程中发挥重要作用。目的: 探讨GM1对骨髓间充质干细胞按照Woodbury经典诱导方案将其诱导分化为神经元样细胞前后基因方面和细胞内游离Ca2+浓度的变化。方法: 分离纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞进行传代培养,传至第5代时,待细胞融汇成致密单层后,加入50mmol/L神经节苷脂设为GM1组,预培养24h后按照Woodbury经典诱导方案进行诱导,设置对照组,采用免疫组化和RealtimePCR技术分别检测诱导前后生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白的蛋白和mRNA表达的变化,采用激光扫描共聚焦显微镜检测诱导前后细胞内游离钙离子浓度的变化。结果与结论: ①加入GM1组诱导分化后较对照组生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白表达水平增高(P<0.05),GM1能够促骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞。②更换诱导液后,两组细胞内荧光强度逐渐增加,到100s达高峰值,其后逐渐减弱,但20min时细胞荧光强度仍高于诱导前,加入GM1组,细胞内游离Ca2+浓度较对照组有所增加(P<0.05)。说明GM1能够促进细胞内Ca2+浓度增加,游离Ca2+在诱导过程中可能有促进作用。③诱导后生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白基因表达改变不显著,说明Woodbury经典诱导方案可能为转录后水平即蛋白水平的调控。

毛兰素通过调节YAP/TAZ信号通路减轻糖尿病肾病大鼠肾纤维化

目的探讨毛兰素对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾纤维化的影响及调节机制。方法雄性SD大鼠分为对照组、模型组、地塞米松组、维替泊芬组、毛兰素低剂量组、毛兰素高剂量组以及毛兰素联合地塞米松用药组,每组10只。检测大鼠微量白蛋白尿(microalbuminuria,MAU)和肾功能相关指标水平;观察肾组织病理变化及胶原纤维沉积;检测肾组织中丙二醛和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平;实时定量荧光定量聚合酶链反应检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白介素(interleukin,IL)-1β、转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1信使(messenger,m)RNA水平;免疫印迹法检测Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)/PDZ结合基序的转录共激活因子(transcriptional co-activator with PDZ-binding motif,TZA)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、纤连蛋白(fibronectin,FN)以及纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitor-1,PAI)-1蛋白表达。结果与对照组相比,模型组和地塞米松组的MAU、血清肌酐(serum creatinine,Scr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、丙二醇、TNF-α、IL-1β、TGF-β1 mRNA水平及YAP、TAZ、CTGF、FN、PAI-1蛋白表达均升高,SOD活性降低(P<0.05);与模型组相比,维替泊芬组和毛兰素组的MAU、Scr、BUN、丙二醇、TNF-α、IL-1β、TGF-β1 mRNA水平及YAP、TAZ、CTGF、FN、PAI-1蛋白表达均降低,SOD活性升高(P<0.05);回补实验加入地塞米松后显示,高剂量毛兰素对DN大鼠的保护作用被逆转(P<0.05)。结论毛兰素可通过抑制YAP/TAZ信号通路减轻DN大鼠的肾纤维化。