共聚焦定量分析WAF_1-S基因表达对人食管癌细胞系EC109生长的作用

目的:探讨抑癌基因WAF_1-S基因在食管癌细胞中的表达以及对食管癌细胞生长的抑制作用,为食管癌发病机制的研究提供一种新的思路,为食管癌基因治疗提供理论基础。 方法:采用亚克隆技术,将野生型WAF_1-S基因全长,通过双粘端克隆入真核表达载体pcDNA3中,用lipofectamine2000介导的方法转染EC109细胞(人食管癌细胞系)。通过打点杂交观察WAP_1-S基因mRNA在细胞中的表达,用Westem blot及激光共聚焦方法定量分析WAF_1-S基因的蛋白表达产物,MTT及流式细胞仪检测EC109的生长状态,分析WAF_1基因对食管癌细胞株生长的影响。 结果:用内切酶酶切分析证实外源野生型WAF_1_S基因克隆入真核表达载体中,经打点杂交证实外源野生型WAF_1-S基因可以在EC109细胞中表达,通过激光共聚焦分析证实,转染后的食管癌细胞EC109中WAF_1-S的蛋白的表达明显高于对照组(32±15 vs 11±7,P<0.05),对细胞进行周期分析表明,处于G_0～G_1期细胞为0.47～0.65。 结论:通过转染外源野生型WAF_1基因可提高WAF_1基因表达,增加食管癌细胞中P^(21)蛋白的表达量,从而提高WAF_1基因表达,抑制细胞的生长。

共聚焦定量分析拉米夫定脂质纳米粒对细胞内HBeAg表达的抑制作用

目的 用共聚焦定量分析方法 ,观察拉米夫定脂质纳米粒对细胞内HBV基因表达的作用。方法 构建半乳糖修饰的十六酸拉米夫定脂质纳米粒 (LAP -GSLN) ,将其定向导入 2 2 15细胞 ,对导入的细胞所表达HBeAg进行间接免疫荧光染色 ,用共聚焦技术对其含量进行定量分析。结果 导入LAP -GSLN的细胞内HBeAg荧光量与单纯加入拉米夫定 (LA)比较 ,导入LAP -GSLN的细胞内HBeAg荧光量明显减少。结论 LAP -GSLN与 2 2 15细胞上的半乳糖受体结合 ,将LA导入细胞而发挥对HBeAg抑制作用。