激光扫描共聚焦显微镜在眼科研究中的应用

激光扫描共聚焦显微镜在眼科研究中的应用王风翔综述何守志审校（解放军总医院眼科北京１００８５３）激光扫描共聚焦显微镜（Ｌａｓｅｒｓｃａｎｎｉｎｇｃｏｎｆｏｃａｌｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，ＬＳＣＭ，是在普通荧光显微镜成像基础上加了激光扫描装置，使用激光激发...

小肠镜联合探头式共聚焦激光显微内镜对小肠疾病的观察研究

目的 探索小肠疾病在探头式共聚焦激光显微内镜(pCLE)图像中的特有表现,以揭示其在小肠疾病实时诊断中的潜在应用价值。方法 纳入2023年2月~2023年6月我院接受小肠镜和pCLE检查的小肠疾病患者48例。结合组织病理学图片特征,分析小肠疾病在pCLE图像中的特殊征象。结果 回顾性分析采集的pCLE图像,可清晰观察到与小肠疾病病理诊断相符的一系列特殊征象,包括但不限于上皮细胞脱落、杯状细胞增多、腺体间距增宽、上皮连续性中断或缺失、腺体结构破坏、隐窝结构异常、荧光素钠渗漏、血管增粗迂曲等。结论 pCLE技术在小肠疾病的诊断中与病理特征具有一致性,其图像中观察到的特有表现可为小肠疾病的实时诊断提供依据,有一定的应用潜力。

激光扫描共聚焦显微镜研究储层孔隙结构

这是一项首次应用激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)的激光荧光技术于油气储层的孔隙结构研究。供LSCM用的样品 ,用环氧树脂加入荧光剂后 ,经加压灌注 ,磨制成岩石薄片 ,在LSCM显微镜下观察孔喉的分布 ,可以测量面孔率 ,并可标出需要测量的每个孔喉的大小以及观察孔喉形状及分布状况。该法的优点 :1.可直接测量和观察到 2 μm左右大小的孔喉。 2 .在LSCM显微镜下可区分孔隙空间中的充填粘土杂基等 ,因此面孔率的测定较一般镜下统计和图像分析更为精确 ,因粘土矿物由于吸附染色剂后在颜色或灰度上有的不易区分。 3.岩石薄片中的微裂缝 ,在LSCM显微镜下可以更清楚地观察到。

利用激光扫描共聚焦显微镜观察同源四倍体水稻胚囊的形成与发育

激光扫描共聚焦显微镜是研究植物胚囊的形成与发育过程以及胚囊变异的理想工具。同源四倍体水稻是二倍体水稻染色体加倍形成的。本文利用激光扫描共聚焦显微镜直接观察经透明处理的水稻子房,研究加倍的基因剂量对于四倍体水稻的胚囊形成与发育的影响。结果表明,广陆矮4号四倍体大部分的胚囊形成与发育的过程基本是正常的,一部分胚囊出现异常现象,在成熟胚囊时期异常频率为10 61%;L202四倍体的异常频率较高,成熟胚囊时期异常频率达到45 65%。

激光扫描共聚焦显微镜的基本原理及其使用技巧

介绍了激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)的原理和构造,分析了LSCM的优点和缺点,并以花粉为例,详细介绍了共聚焦针孔直径、光电倍增管检测器增益、激光强度、扫描速度、扫描方式和Z轴步距等重要参数设置对共聚焦成像的不同影响。探讨了正确使用LSCM的方法与技巧,如获取高质量的图像、图像保存及图像处理,以便为科技人员利用LSCM开展更多植物学与环境科学相关的研究提供参考。

激光扫描共聚焦显微镜

阐述了激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)的原理和构造,分析了LSCM的优点和缺点,如获得清晰的图像,可光学切片、三维重建,实时多通道荧光,ZOOM放大,局部光操作,检测过程快、效果更灵敏、定位更准确。探讨了LSCM扫描方式及应用,如研究多种荧光定位分析,需选择XY扫描;研究标本空间实际位置信息,样品三维图像信息,需选择XYZ扫描;用于研究活体标本随时间的变化,或在不同时间采取不同的处理方法观察标本的荧光变化研究,得选择XYT扫描。并针对目前管理该仪器设备上存在的问题提出一些建议,以期对高校实验室的开放共享提供有益参考。

共聚焦激光扫描荧光显微镜扫描系统研制

为适应三维光学微细加工及三维光学信息存储研究的需要,研制了共聚焦激光扫描荧光显微镜的工作台式扫描系统,扫描范围138μm×138μm。工作台采用压电陶瓷驱动器(PZTactuator)驱动的方式来获得高分辨率的位移,采用带柔性铰链的杠杆放大装置来获得较大的位移范围。描述了工作台的工作原理,并对其静态和动态性能进行了测试,实验表明这一扫描系统能很好的应用于共聚焦激光扫描荧光显微镜系统。

牙本质表面状态对粘结界面影响的激光扫描共聚焦显微镜研究

目的 :研究不同表面状态下形成的牙本质湿粘结界面的异同。方法 :以RhodamineB为荧光剂 ,用激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)分别观察干燥或湿润粘结时形成的牙本质粘结界面的异同。结果 :湿粘结时 5种粘结系统在牙本质粘结界面都有良好的渗透。以丙酮为溶剂的粘结系统干燥粘结时形成的混合层的厚度有明显的降低 ,牙本质小管中树脂突较细 ,中断现象增多 ,长度缩短。结论 :干燥粘结时 5种粘结剂在牙本质表面的渗透性减弱。

ZEISS LSM 780激光扫描共聚焦显微镜的三维成像及分析

针对ZEISS LSM 780激光扫描共聚焦显微镜的三维图像获取步骤做了系统的介绍,详述了光学切片的设置和获取过程,后期应用Zen2011 black和blue软件进行三维重构的渲染及图像分析、数据采集。列举出三维成像中常见问题及解决办法,使仪器为教学和科研工作提供更优质的服务。

用共聚焦激光扫描显微镜观测GFP标记的内生固氮菌Klebsiella oxytoca SA2侵染水稻根

用高效绿色荧光蛋白 (greenfluorescentprotein ,GFP)突变体EGFPmut2的基因标记内生固氮菌———产酸克雷伯氏菌 (Klebsiellaoxytoca (Fl櫣ｇｇｅ)Lautrop)SA2 ,用标记菌接种限菌培养条件下生长的水稻 (OryzasativaL .)幼苗 ,在接种后 1、2、4、8、12、16和 2 1d ,用共聚焦激光扫描显微镜对水稻鲜根进行光学切片 ,显示了标记菌从水稻根成熟区表面向根内入侵的过程。定殖在根表面的标记菌主要从侧根伸出的位置侵入侧根皮层 ,从邻近发生侧根的位置进入内皮层和维管柱。SA2还能从初生根成熟区无侧根伸出的位置侵入皮层向维管柱迁移。SA2入侵水稻根引发了水稻根局部的过敏反应以阻滞细菌进一步入侵 ,表现为侵入根内的细菌周围的根细胞细胞壁变厚 ,在蓝光下发出很强的黄绿荧光。

不同烟草品种花粉粒形态的激光共聚焦扫描显微镜观察

对野生烟、烤烟、晒烟花粉进行了激光共聚焦扫描显微镜观察，发现不同品种烟草花粉的形态、大小存在明显的差异，可以做为烟草分类、进化研究的重要依据。

扁平苔藓的共聚焦激光扫描显微镜影像特征

目的:探讨扁平苔藓共聚焦激光扫描显微镜(皮肤CT)的影像特征。方法:应用皮肤CT对5例扁平苔藓患者皮损进行扫描,并与苏木精-伊红染色组织病理进行对比。结果:所有患者的典型皮损均可见到真皮乳头及其周围大量圆形、高折光性炎性细胞浸润以及真-表交界处指环状结构的破坏(基底细胞液化变性);其中4例患者皮损可见颗粒层局灶性楔形增厚以及棘层细胞不规则增厚。结论:皮肤CT作为一项新技术,可以作为扁平苔藓的重要辅助诊断技术。

共聚焦激光扫描显微镜技术

自1985年共聚焦激光扫描显微镜问世以来,该项技术一直在飞速发展和完善。近年来一系列新型的共聚焦显微镜相继研制成功和投入使用,如视频共聚焦激光扫描显微镜、双光子显微镜、4Pi显微镜、荧光寿命成像显微镜等,它们较传统共聚焦显微镜有着各自独特的优势,了解它们的基本性能和特点有助于其在生物学领域更为广泛深入的应用。

两种树脂粘结剂对纤维桩粘接强度测试及界面的激光扫描共聚焦显微镜观察

背景:树脂类粘结剂包括全酸蚀、自酸蚀和一步法粘结剂,学者们对其粘接性能进行了大量的研究,观点却有所不同。目的:比较两种树脂粘结系统对纤维桩的剪切粘接强度,并用激光扫描共聚焦显微镜观察粘接界面的物理构象,了解宏观的固位力与微观的形态结构之间的关系。设计、时间及地点:体外对比观察实验,于2008-03/2009-03在上海交通大学附属第九人民医院口腔修复实验室及口腔外科实验室完成。材料:实验采用的纤维桩为美国BISCO公司MATCHPOST石英纤维桩,两种树脂粘结系统为美国Bisco公司One-step粘结系统(全酸蚀粘结系统)和日本可乐丽株式会社的PanaviaF粘结系统(自酸蚀粘结系统),荧光素为美国Sigma公司罗丹明B异硫氢酸。方法:选用10颗无龋坏的人上颌中切牙,于釉牙骨质界冠方1mm处截除牙冠,随机分成2组,每组5颗。分别用One-step和PanaviaF两种树脂粘结系统在进行罗丹明标记后将石英纤维桩粘固于根管内。主要观察指标:牙根包埋后切片制备成2mm厚的标本,将标本置于EZ20微拉伸机上用微推出法进行剪切粘接强度测试并记录数值,同时用激光扫描共聚焦显微镜观察牙本质-粘结剂-桩之间界面,并用随机软件测量粘接层的厚度。结果:One-step粘结系统的粘接强度明显大于PanaviaF粘结系统的粘接强度(P<0.05),另外根颈部的粘接强度明显大于根尖部的粘接强度(P<0.05)。激光扫描共聚焦显微镜观察显示One-step粘结系统的混合层厚度大于PanaviaF粘结系统的混合层厚度(P<0.05)。结论:全酸蚀粘结系统对纤维桩的粘接强度大于自酸蚀粘结系统,树脂粘结剂对纤维桩的粘接强度在根颈部大于根尖部。

利用激光扫描共聚焦显微镜检测巨噬细胞呼吸爆发

用过氧化物和超氧化物荧光探针ＤＣＦＨ－ＤＡ标记巨噬细胞后，在激光扫描共聚焦显微镜下，用最适发射波长为５３０ｎｍ的检测器１检测巨噬细胞内ＤＣＦＨ－ＤＡ的荧光强度变化，结果显示：检测器１可检测单个和多个巨噬细胞内ＤＣＦＨ－ＤＡ的荧光强度变化，经ＰＭＡ作用后，巨噬细胞内ＤＣＦＨ－ＤＡ的荧光强度增强，而且各细胞增强的幅度不同。表明：通过检测ＤＣＦＨ－ＤＡ荧光强度变化可原位实时观察单个或多个活细胞内呼吸爆发的动态变化，ＰＭＡ刺激巨噬细胞呼吸爆发作用。

用激光扫描共聚焦显微镜观察雪松花粉和花粉管

为更直观地观察和显示花粉和花粉管中细胞结构及其细胞核的状态与行为。雪松花粉和花粉管经卡诺液固定,分别以埃氏苏木精、曙红、Hoechst 33243单染和曙红-Hoechst 33342双染后,用冬青油整体透明,在激光扫描共聚焦显微镜下观察。4种染色法观察效果不同;以曙红-Hoechst 33342双染的样品观察效果最佳,在紫外光激发下清晰地显示出细胞核,在488 nm激光激发下不仅能清晰看到花粉和花粉管壁结构,且能分辨管细胞、柄细胞及体细胞的结构特点和空间位置关系。建立了一种快速简便的适于在激光扫描共聚焦显微镜下观察花粉和花粉管中成员细胞结构及其细胞核的状态、行为的制片技术;激光扫描共聚焦显微镜具有独特的共轭成像装置、连续光学扫描、图像三维重组和多通道检测等功能,极好地展示了雪松花粉和花粉管的结构特点,相比于传统的光学显微镜和荧光显微镜,其观察到的图像更清晰、更直观、更具立体感。

激光扫描共聚焦显微镜在微孔隙研究中的应用

激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)具有分辨率高、制样简单、具有一定穿透能力、集激光扫描和数字图像处理为一体等优点。用于研究储层中的微孔隙,其能够快速、准确、直观地提供微孔隙的孔隙结构与面孔率等信息,本文通过对致密砂岩粒缘微缝、砂岩长石粒内溶蚀孔、云母内微孔、火山凝灰岩脱玻化气孔和英安岩溶蚀微孔进行激光共聚焦三维扫描,可以检测出孔径在0.1μm以上的微孔隙,有助于分析微孔隙特征与油气集输之间的关系,对天然气储层和致密砂岩储层的勘探和开发具有重要意义。

不同饮料对SD大鼠牙釉质脱矿影响的激光共聚焦扫描电镜观察

目的通过激光共聚焦扫描电镜了解饮料对釉质脱矿的影响。方法80d龄SD大鼠42只,每只单笼饲养,喂饲致龋饲料15天后检测无牙釉质脱矿。余鼠随机分为去离子水组(阴性对照,A组)、雪碧组(碳酸类,B组)、伊力纯牛奶组(牛奶类,C组)、农夫山泉矿泉水组(矿泉水类,D组)、统一鲜橙多组(果汁类,E组)和康师傅鲜c组(果汁类,F组),每组6只,喂饲饮料3个月,用激光共聚焦扫描显微镜观察磨牙釉质的脱矿情况。结果雪碧、统一鲜橙多和康师傅鲜c组的荧光面积、总荧光面积及平均荧光量分别是12.75×10-3μm2、19.83×10-3及1.56;8.90×10-3μm2、14.52×10-3及1.63;15.05×10-3μm2、24.04×10-3及1.60,明显高于对照组(P<0.05),其值为6.03×10-3μm2、9.73×10-3及1.55,其中又以康师傅鲜c组为最高。矿泉水和牛奶类的荧光面积和总荧光量都较低,分别为3.45×10-3μm2、5.41×10-3和3.87×10-3μm2、6.14×10-3,与对照组相比没有显著性差异(P>0.05),与酸性饮料(包括碳酸类和果汁类)比较有显著差异(P<0.01)。结论酸性饮料具有较强的酸蚀性,牛奶和矿泉水对釉质脱矿没有明显的影响。

激光扫描共聚焦显微镜的功能及质量控制

阐述了FluoViewTM FV500激光扫描共聚焦显微镜的工作原理及主要功能,提出了FluoViewTM FV500激光扫描共聚焦显微镜使用过程中荧光探针的选择、样品制备的要求、参数的选择以及对环境要求的质量控制方法。

肝癌细胞及正常肝细胞中间隙连接蛋白Cx32、Cx43的表达——激光扫描共聚焦显微镜研究

目的 :研究间隙连接蛋白Cx32、Cx43在肝癌细胞系HHCC、SMMC 772 1及正常肝细胞系QZG中的表达。方法 :采用免疫荧光标记技术 ,对HHCC、SMMC 772 1及QZG细胞中Cx32、Cx43蛋白进行激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)分析。结果 :Cx32、Cx43蛋白定位于肝细胞胞质中 ,在HHCC、SMMC 772 1中阳性细胞率、阳性细胞的荧光强度较QZG中明显减弱。结论 :Cx32。